赛默飞分光光度计Evolution光谱扫描
质保3年只换不修,厂家长沙实了个验仪器制造有限公司
一、概述
赛默飞 Evolution 系列分光光度计 是一款高性能紫外–可见光分析仪器,具备 高灵敏度、宽波段、快速扫描 的特点。
其“光谱扫描(Spectral Scan)”功能是仪器最核心的分析模式之一,通过在指定波长范围内连续测量样品的吸光度或透射率,生成完整的光谱曲线,以揭示物质在不同波长下的光学特征。
光谱扫描是进行物质定性分析、吸收峰确定、成分检测及材料特性研究的基础。Evolution 系列在扫描速度、波长精度与数据分辨率等方面表现优异,能够满足科研、教学、制药、环境监测和材料研究等多领域的需求。
二、光谱扫描的基本原理
2.1 光谱扫描定义
光谱扫描是指仪器通过控制光栅或单色器,使光源产生的连续光逐步变化波长,并测量样品对各波长光的吸收或透射程度,从而得到 吸光度(A)或透射率(%T)随波长(λ)变化的曲线图。
数学表达式:
A(λ)=−log(I(λ)I0(λ))A(\lambda) = -\log \left(\frac{I(\lambda)}{I_0(\lambda)}\right)A(λ)=−log(I0(λ)I(λ))
其中:
I0(λ)I_0(\lambda)I0(λ):空白或参比光强;
I(λ)I(\lambda)I(λ):样品透射光强。
2.2 光谱扫描的意义
光谱扫描不仅揭示物质吸收峰(λmax)所在位置,还能反映:
分子结构与能级跃迁信息;
化合物纯度与组成差异;
反应过程中的光谱变化;
色度与光学性质参数。
三、Evolution 光谱扫描系统结构
3.1 光学系统组成
光源系统:氘灯(190–360 nm)与钨卤灯(360–1100 nm),自动切换;
单色系统:高分辨率全息光栅,波长定位精度 ±0.2 nm;
样品舱系统:支持标准比色皿、微量比色皿及固体反射附件;
检测系统:硅光二极管或光电倍增管检测器,响应线性优异;
控制系统:由 Thermo Insight 软件进行扫描控制与数据采集。
3.2 光谱扫描特点
扫描速度可调:10–3600 nm/min;
波长范围:190–1100 nm;
分辨率(带宽):0.5–5 nm 可调;
信号平均次数:1–10 次;
支持自动平滑与漂移校正。
四、光谱扫描操作流程
光谱扫描需按照标准化步骤执行,以确保结果稳定可靠。
4.1 仪器准备
检查电源与连接线是否完好;
预热光源 10–15 分钟,保证光强稳定;
清洁比色皿并检查有无划痕或气泡;
确认实验环境(温度 25 ±2 ℃,湿度 45–60%)。
4.2 软件启动与模式选择
打开 Insight / Insight Pro 软件;
选择“Spectral Scan(光谱扫描)”模式;
新建实验文件并输入样品名称、编号、操作人等信息。
4.3 参数设置
| 参数项目 | 设置说明 | 推荐值 |
|---|---|---|
| 起始波长 | 扫描下限 | 190 nm |
| 终止波长 | 扫描上限 | 800 或 1100 nm |
| 扫描间隔 | 相邻采样点波长差 | 1 nm |
| 扫描速度 | 光栅移动速率 | 600 nm/min |
| 带宽 | 单色器缝宽 | 1 nm |
| 数据格式 | 吸光度 A 或透射率 %T | 依据实验需要 |
| 光源切换点 | 自动/手动 | 默认 360 nm |
| 平滑算法 | Savitzky–Golay 平滑 | 默认开启 |
4.4 空白校正
在参比光路中放入空白溶液;
点击“Blank”按钮,仪器自动记录基线;
进行光谱基线校正,消除背景干扰。
4.5 样品扫描
将样品比色皿放入样品架;
点击“Start Scan”;
软件实时显示吸光度随波长变化的曲线;
扫描完成后自动保存数据文件。
五、光谱扫描参数优化
光谱扫描结果的质量取决于参数设置的合理性。
5.1 带宽选择
带宽(Slit Width)决定光谱分辨率:
| 带宽 | 特点 | 适用场景 |
|---|---|---|
| 0.5–1 nm | 高分辨率,信号较弱 | 精细结构分析 |
| 2 nm | 平衡模式 | 常规定性分析 |
| 4–5 nm | 信号增强但峰形变宽 | 低浓度样品 |
5.2 扫描速度
扫描速度越快,数据点间隔时间越短,但信噪比可能下降。
建议选择:
低速(100–300 nm/min):高精度分析;
中速(600 nm/min):常规分析;
高速(≥1200 nm/min):样品多、时间紧时使用。
5.3 平滑与平均
为减少噪声,可设置:
信号平均次数:3–5 次;
平滑点数:7–15 点。
平滑后光谱曲线更平滑,便于峰值判断。
六、光谱扫描数据的类型与结构
光谱扫描结果通常包含以下数据内容:
| 数据项 | 说明 | 单位 |
|---|---|---|
| 波长(λ) | 扫描点的波长值 | nm |
| 吸光度(A) | 样品吸收强度 | — |
| 透射率(%T) | 样品透射光强比例 | % |
| 峰值波长(λmax) | 吸收峰位置 | nm |
| 峰高 | 吸收峰强度 | A |
| 半峰宽 | 吸收带宽度 | nm |
数据文件可导出为 CSV、TXT、XLSX 或 INS 格式。
七、光谱扫描曲线分析
7.1 吸收峰识别
软件自动识别局部极大值位置并标注 λmax。
常用分析指标:
主峰 λmax:主要吸收峰位置;
副峰 λ’:其他次级吸收峰;
吸收肩峰:说明分子中存在能级重叠。
7.2 峰形分析
窄峰:说明样品纯度高,电子跃迁单一;
宽峰:可能存在杂质或分子间相互作用;
双峰:常见于共轭体系或混合物。
7.3 光谱差异比较
Evolution 软件可叠加多条光谱曲线,用于:
不同样品的比较;
时间序列光谱变化;
温度或pH影响研究。
八、光谱扫描在定性分析中的应用
光谱扫描是定性分析的重要工具。
8.1 化合物识别
通过比对吸收峰 λmax 与标准物质光谱,可判断化合物类型。
例如:
苯环化合物在 250–270 nm 处有特征吸收;
羰基化合物在 300–350 nm 区域有 n→π* 吸收峰。
8.2 杂质检测
纯物质应呈现单一光谱曲线。
若出现额外吸收峰或峰位偏移,则可能存在杂质或溶剂污染。
8.3 反应监测
通过实时扫描反应体系,可观察光谱变化趋势,判断反应进程与产物生成情况。
九、光谱扫描在定量分析中的辅助作用
虽然定量分析通常采用固定波长模式,但光谱扫描在确定最佳检测波长方面具有重要意义。
扫描样品全光谱,找到 λmax;
在 λmax 附近选择吸光度最大且稳定的波长;
在定量模式中以该波长进行浓度测定。
该方法能显著提高定量分析的灵敏度与准确度。
十、光谱扫描误差与校正
10.1 波长误差
来源:光栅定位偏差或光源不稳。
校正方法:使用氧化钬滤片验证标准峰(241.5、361.5、536.3 nm)。
10.2 光度误差
来源:检测器非线性或光源漂移。
校正方法:使用标准吸收滤片或重铬酸钾溶液验证。
10.3 噪声与漂移
原因:环境振动、电源不稳;
对策:使用稳压器、延长积分时间、开启平滑算法。
十一、光谱扫描实验实例
实例一:DNA 紫外吸收光谱
扫描范围:200–350 nm;
吸收峰 λmax:260 nm;
特征:A260/A280 比值反映纯度;
应用:核酸定性与纯度评估。
实例二:苯甲酸溶液光谱
扫描范围:200–400 nm;
吸收峰:228 nm(π→π*),273 nm(n→π*);
意义:用于有机化合物结构识别。
实例三:染料溶液扫描
扫描范围:400–700 nm;
峰值 λmax:520 nm;
应用:色度分析与材料光吸收研究。
十二、光谱扫描数据处理
12.1 峰值计算
软件可自动或手动选定吸收峰进行积分,输出峰面积、峰高及 λmax 值。
12.2 差光谱分析
通过样品光谱与参比光谱相减,可得到差光谱,用于痕量分析或组分分离研究。
12.3 基线修正
若出现基线漂移,可使用自动基线拟合工具(多项式或线性)进行修正。
12.4 数据导出与报告
导出格式:CSV、PDF、INS;
报告内容:样品编号、扫描参数、峰值表、光谱图;
可直接生成实验报告或科研论文图表。
十三、光谱扫描性能指标
| 项目 | 参数 | 性能说明 |
|---|---|---|
| 波长范围 | 190–1100 nm | 覆盖紫外–可见–近红外区 |
| 波长精度 | ±0.2 nm | 光栅定位精确 |
| 光谱带宽 | 0.5–5 nm 可调 | 支持高分辨分析 |
| 扫描速度 | 10–3600 nm/min | 可调,适配不同实验 |
| 吸光度范围 | -0.3–3.5 A | 动态线性良好 |
| 信噪比 | ≥2000:1 | 保证低噪声输出 |
这些指标保证了 Evolution 光谱扫描的高稳定性与数据精确度。
十四、光谱扫描注意事项
光源未充分预热会导致信号不稳;
比色皿透光面必须清洁;
样品浑浊或含气泡会引起散射误差;
扫描速度过快可能导致峰形畸变;
高吸光度样品应适当稀释;
每次实验前应重新执行空白校正。
十五、光谱扫描在科研与工业中的应用
Evolution 的高扫描速度与自动峰值识别功能,使其成为科研与工业光谱检测的标准化工具。
十六、光谱扫描质量控制
16.1 每日检查
执行光源强度测试;
检查波长准确度;
校验空白基线稳定性。
16.2 每月验证
使用标准滤片验证吸收峰位置;
检查光度线性与信噪比;
对比前期数据,确保长期稳定。
16.3 校准记录
所有扫描参数与校准数据应记录于实验日志;
保存校准报告以满足 GLP/GMP 审核要求。
十七、光谱扫描的优势总结
高精度波长定位:±0.2 nm 确保吸收峰准确;
快速扫描能力:3600 nm/min 支持高通量分析;
智能算法支持:平滑、漂移校正、自动峰值识别;
宽光谱覆盖:190–1100 nm 满足多领域应用;
数据处理全面:支持叠加、差光谱与报告输出;
重复性高:A 重复性 ±0.001,曲线再现性优良。


