赛默飞分光光度计Evolution检测流程
质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司
一、概述
赛默飞 Evolution 系列分光光度计 是一款高性能紫外–可见光分析仪器，广泛应用于化学分析、生物医药、环境检测、食品安全及材料研究。
该仪器通过测量样品对不同波长光的吸收或透射程度，获得物质的光谱信息，实现定性或定量分析。
为了确保测定结果的精确性，用户必须严格遵循标准化的 检测流程（Detection Procedure）。
Evolution 系列配备自动校准系统、双光束光学结构和智能化控制软件，可在较宽波长范围内（190–1100 nm）完成多模式检测。
二、检测流程概述
Evolution 的检测流程可分为以下八个阶段：
每个阶段环环相扣，确保测定的科学性与稳定性。
三、环境准备与仪器检查
3.1 实验环境要求
温度：20–25 ℃；
湿度：45–60%；
电源：AC 220 V ±10%，接地良好；
照明：避免强光或阳光直射样品舱；
台面：稳固、防震，远离电磁干扰源。
环境的稳定性是光谱数据准确性的前提。
3.2 仪器外观与附件检查
检查电源线与数据线是否完好；
确认光源灯（氘灯、钨灯）安装牢固；
样品舱清洁，无灰尘、液滴或杂质；
比色皿架稳定，光路无遮挡；
显示屏、按键和软件界面响应正常。
3.3 比色皿准备
选择与实验波段匹配的比色皿：
紫外区（190–350 nm）：石英比色皿；
可见区（350–800 nm）：光学玻璃比色皿。
确保比色皿透光面无划痕、指纹或气泡；
清洗后晾干，避免残留水滴影响透光。
四、开机与系统自检
4.1 开机顺序
打开主机电源；
启动计算机；
打开控制软件 Thermo Insight 或 Insight Pro；
仪器与软件自动连接并进行初始化。
4.2 系统自检项目
开机后仪器会自动完成以下自检：
光源状态检测；
光栅驱动与定位；
检测器响应测试；
电路与通信稳定性检测。
自检完成后界面显示“Ready”，说明系统处于可操作状态。
4.3 光源预热
为获得稳定光强，需预热 10–15 分钟。
氘灯用于 190–360 nm 区间；
钨灯用于 360–1100 nm 区间；
软件可设置光源自动切换点（默认 360 nm）。
五、软件初始化与检测模式选择
5.1 实验文件建立
打开软件新建实验文件；
输入实验名称、样品编号、操作人信息；
设置数据保存路径及报告格式（CSV、PDF 等）。
5.2 模式选择
根据实验目的选择不同检测模式：
| 模式 | 功能 | 应用场景 |
|---|---|---|
| Fixed Wavelength Mode | 单波长检测吸光度或透射率 | 样品浓度测定 |
| Scan Mode | 扫描指定波长范围内的吸收光谱 | λmax、光谱特征分析 |
| Quant Mode | 建立标准曲线计算浓度 | 化学定量分析 |
| Kinetics Mode | 记录吸光度随时间变化 | 酶促反应与动力学研究 |
| Multi-Wavelength Mode | 同时测多个波长点 | 混合体系定量分析 |
5.3 参数设置
波长或波长范围：200–800 nm 常用；
带宽（Slit Width）：0.5–2 nm；
积分时间（Integration Time）：0.5–1 s；
扫描速度：600 nm/min（可调）；
信号平均次数：3–5 次；
数据格式：吸光度（A）或透射率（%T）。
六、空白校正与基线设置
6.1 校正目的
空白校正用于消除溶剂、比色皿和系统噪声的影响，使吸光度数据以样品吸收为唯一信号来源。
6.2 校正步骤
将空白溶液（如溶剂或缓冲液）加入比色皿；
擦拭比色皿透光面，确保无指纹；
放入参比光路位置；
点击“Blank”或“Zero”；
仪器自动记录基线光强 I0I_0I0。
6.3 注意事项
空白溶液与样品基质成分一致；
校正后不得再改变波长范围或带宽；
每次更换溶剂后应重新校正。
七、样品检测流程
7.1 样品准备
样品应澄清透明，无悬浮颗粒；
若样品浓度过高，稀释至吸光度 0.1–1.0 区间；
避免气泡产生，保持液面高度一致。
7.2 比色皿放置
确认方向一致（刻线朝前）；
光程面垂直于光路；
插入样品架时动作轻柔，防止震动。
7.3 检测操作
（1）固定波长检测
设置目标波长（如 595 nm）；
放入样品比色皿；
点击“Measure”；
系统显示吸光度 A 或透射率 %T。
（2）光谱扫描
设置起止波长（如 200–800 nm）；
步长 1 nm；
执行空白校正后开始扫描；
光谱图实时显示，可自动识别 λmax。
（3）定量分析
选择 Quant 模式；
输入标准溶液浓度；
测得各吸光度值；
软件自动生成标准曲线并拟合方程；
测定未知样品吸光度后计算浓度。
（4）动力学检测
选择波长（如 340 nm）；
设定采样间隔（1 s）与测定时长（300 s）；
点击“Start”；
软件自动记录 A–t 曲线并计算反应速率。
八、数据记录与分析
8.1 实时数据查看
检测过程中可实时观察吸光度、透射率、浓度等数据。
Evolution 软件提供：
数值列表；
动态曲线；
光谱叠加视图；
峰值分析工具。
8.2 数据处理
平滑算法（Savitzky–Golay）去除随机噪声；
自动基线校正消除漂移；
多波长比较功能用于混合样分析；
定量曲线可通过线性回归或二次拟合计算。
8.3 数据输出与保存
实验结束后，可将结果导出为：
CSV：用于统计或绘图；
PDF：标准报告格式；
INS：原始仪器文件，含所有参数；
XLSX：Excel 表格用于计算与分析。
报告包含实验名称、样品编号、波长范围、吸光度、λmax、曲线图及拟合方程。
九、实验结束与关机维护
9.1 仪器关闭步骤
保存所有实验数据并关闭软件；
关闭仪器主电源；
待光源冷却 5 分钟后切断总电源；
拔除电源线，盖上防尘罩。
9.2 清洁与维护
清洗比色皿并晾干；
擦拭样品舱内部与外壳；
检查光路窗片是否洁净；
每月执行波长和光度校准；
定期更换老化光源灯（每 1000 小时左右）。
十、检测质量控制
10.1 重复性验证
同一样品重复测量 3–5 次，标准偏差 ≤ ±0.001 A，说明检测重复性良好。
10.2 线性验证
配制系列标准样品（如重铬酸钾溶液），绘制 A–C 曲线：
当 R² ≥ 0.999 时，表示线性关系符合要求。
10.3 波长与光度准确度
使用氧化钬滤片校正波长（241.5、361.5、536.3 nm）；
使用标准吸收片验证光度精度（偏差 ≤ ±0.005 A）。
10.4 空白与噪声监测
空白扫描 10 分钟，若漂移 ≤ 0.0005 A/h，说明系统稳定。
十一、常见问题及处理
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 吸光度波动大 | 光源未预热或样品不均 | 预热 15 分钟并混匀样品 |
| 吸光度为负 | 空白校正错误 | 重新执行基线校正 |
| 无信号输出 | 比色皿方向错误或光路遮挡 | 调整比色皿方向 |
| 光谱曲线断层 | 光源切换波段异常 | 手动设置切换点 |
| 噪声过大 | 电源不稳或外界干扰 | 使用稳压器并远离干扰源 |
十二、安全与规范
不得直视氘灯或钨灯光源；
禁止带水操作电源部分；
清洁光学元件时使用专用镜头纸；
避免化学试剂接触仪器外壳；
实验结束后填写操作记录与维护日志。
十三、检测流程总结
| 阶段 | 操作要点 | 目的 |
|---|---|---|
| 1. 环境检查 | 控制温湿度与电源稳定 | 保证测量稳定性 |
| 2. 仪器启动 | 系统自检与光源预热 | 确保功能正常 |
| 3. 参数设置 | 选择模式与波长范围 | 明确实验目标 |
| 4. 空白校正 | 建立基线 | 消除背景干扰 |
| 5. 样品检测 | 测量吸光度与透射率 | 获取原始数据 |
| 6. 数据分析 | 绘制曲线与计算浓度 | 生成结果 |
| 7. 保存报告 | 归档数据文件 | 便于追溯与复核 |
| 8. 清洁关机 | 维护仪器 | 延长使用寿命 |
十四、数据质量与可追溯性
Evolution 软件遵循数据完整性标准（ALCOA+ 原则）：
A – Accurate（准确）：测定值真实无误；
L – Legible（清晰）：结果记录规范；
C – Contemporaneous（实时）：数据实时保存；
O – Original（原始）：保留原始文件；
A – Attributable（可追溯）：记录操作人与时间。
系统还具备自动记录实验日志、保存操作历史、生成审计追踪（Audit Trail）的功能，确保数据安全与质量体系符合 GLP、GMP 要求。
十五、典型应用举例
波长：260 nm
吸光度范围：0–2 A
分析内容：A260/A280 比值用于判断纯度
蛋白质定量（Bradford 法）
波长：595 nm
吸光度范围：0–1.5 A
通过标准曲线计算蛋白质浓度
环境水样 COD 测定
波长：600 nm
定量模式分析，浓度范围 10–250 mg/L
药物含量分析
波长：240–350 nm
光谱扫描确定 λmax 后进行定量计算。
