赛默飞分光光度计Evolution测定流程
质保3年只换不修,厂家长沙实了个验仪器制造有限公司
一、概述
赛默飞 Evolution 系列分光光度计 是一款性能稳定、功能完善的紫外–可见光分析仪器,广泛应用于生物化学、药物分析、材料检测、环境监测等领域。
其测定流程体现了从“光源预热—样品准备—光谱测量—数据分析—结果保存”的一体化理念。
通过规范化流程操作,可最大限度地减少测量误差、提高结果重复性,并保障仪器长期稳定运行。
二、测定流程总览
Evolution 分光光度计的完整测定流程可分为八大阶段:
实验准备与环境检查
仪器启动与光源预热
软件设置与模式选择
空白校正与基线调整
样品测定
结果记录与数据分析
实验结束与清理
数据保存与备份
以下章节将对每个步骤进行详细阐述。
三、实验准备阶段
3.1 环境条件检查
温度:保持在 20–25 ℃;
湿度:45%–60%;
电源:AC 220V ±10%,独立稳压电源;
振动:避免震源或强磁干扰;
光照:远离阳光直射及荧光灯直射。
稳定的环境是保证光谱测量重复性的首要条件。
3.2 仪器外观与附件检查
确认电源线、接地线连接牢固;
检查光源灯安装正确,无松动或异响;
清洁样品舱内部,确保无灰尘与液滴;
准备标准比色皿(石英或光学玻璃);
准备擦拭镜头纸、无水乙醇及实验日志。
四、仪器启动与光源预热
4.1 启动步骤
打开主机电源,观察显示屏亮起;
等待仪器自动完成系统自检(包括光栅、电机、检测器等);
若状态显示“Ready”,说明自检通过。
4.2 光源预热
Evolution 系列使用氘灯与钨卤灯双光源系统:
氘灯用于紫外区(190–360 nm);
钨灯用于可见区(360–1100 nm)。
光源需预热 10–15 分钟,以保证光强稳定并消除漂移。
五、软件登录与参数设置
5.1 启动软件
打开电脑,运行 Thermo Insight 或 Insight Pro 软件,系统自动识别仪器。界面显示仪器型号、序列号及连接状态。
5.2 模式选择
根据实验目的选择合适的测定模式:
5.3 参数设定
波长或波长范围(如 260 nm 或 200–800 nm);
带宽(1–2 nm);
扫描速度(600 nm/min);
积分时间(0.5–1 s);
信号平均次数(3–5 次);
数据保存路径与命名规则。
正确的参数设置是确保光谱数据精度的关键。
六、空白校正与基线设置
6.1 空白校正目的
用于消除溶剂或容器的背景吸收,使样品测得的吸光度仅反映目标物质。
6.2 校正步骤
取空白溶液(如蒸馏水或缓冲液);
加入比色皿约 2/3 容量;
擦干外壁水迹与指纹;
放入样品架的参比位置;
点击“Blank”或“Zero”按钮;
仪器自动记录光强 I₀ 并设为基准线。
校正完成后,系统提示“Baseline Set”。
6.3 注意事项
空白溶液成分必须与样品溶剂相同;
校正期间应关闭样品舱盖以防外光干扰;
每更换溶剂或波长区间都需重新校正。
七、样品测定流程
7.1 比色皿准备
使用干净的石英或玻璃比色皿;
光程长度应一致(通常 10 mm);
放置方向统一(有标识面朝前);
比色皿内液面高度相同。
7.2 样品装载
加入待测样品溶液约占比色皿 2/3;
检查是否有气泡,如有应轻轻敲击排出;
擦净外壁后放入样品架中对应位置。
7.3 测量操作
(1)固定波长测定
设定波长(如 260 nm、595 nm 等);
放入样品比色皿;
点击“Measure”启动测量;
系统自动显示吸光度 A 或透射率 %T。
(2)光谱扫描测定
设定起始波长与终止波长(如 200–800 nm);
执行空白校正;
点击“Start Scan”,仪器自动扫描并绘制曲线;
λmax 自动标识。
(3)定量分析
选择 Quant Mode;
输入标准样浓度与测得吸光度;
系统自动生成标准曲线方程 y = kx + b;
测定未知样吸光度后自动计算浓度。
(4)动力学测定
设定波长与测量时间(如 340 nm,300 s);
设定采样间隔(1 s);
点击“Start”,系统记录 A–t 曲线;
软件自动计算反应速率(ΔA/min)。
八、数据处理与结果分析
8.1 实时数据观察
实验过程中,可在软件主界面实时监控吸光度变化或扫描曲线形态。
8.2 数据修正与平滑
使用平滑算法(Savitzky–Golay 或 Moving Average);
去除偶发噪声点,提高信号稳定性;
不得随意修改原始数据。
8.3 数据导出
测量完成后,可将结果导出为:
CSV 文件:便于统计分析;
PDF 文件:用于报告归档;
INS 文件:原始实验格式,可重新载入分析。
8.4 结果判读
吸光度在 0.1–1.0 A 之间表示最佳线性;
若 A > 1.5,需稀释样品重测;
λmax 与标准物质一致,说明样品纯度良好;
标准曲线相关系数 R² ≥ 0.995 为合格。
九、重复测定与误差控制
9.1 重复测定
同一样品至少重复测量 3 次,取平均值以消除偶然误差。
9.2 误差来源
| 类型 | 主要原因 | 控制方法 |
|---|---|---|
| 系统误差 | 光源波动、光栅偏移 | 定期校准 |
| 操作误差 | 样品体积不一、比色皿不洁 | 统一操作规范 |
| 随机误差 | 环境温度波动 | 控制恒温环境 |
9.3 精度验证
使用标准滤片或标准溶液(如 K₂Cr₂O₇)验证光度精度。
仪器偏差应小于 ±0.003 A。
十、实验结束与仪器关闭
10.1 关闭步骤
保存并导出实验数据;
退出软件系统;
关闭仪器主电源;
等待光源冷却 5 分钟;
拔除电源线(长期不使用时);
盖上防尘罩。
10.2 比色皿与样品处理
倒空比色皿残液;
用蒸馏水或乙醇清洗;
干燥后放入干燥器保存;
样品废液按实验室规定处理。
十一、实验记录与报告
11.1 记录内容
实验日期与操作者;
样品编号与溶剂类型;
波长、带宽、积分时间等参数;
吸光度、透射率、浓度或速率值;
标准曲线方程与相关系数;
异常情况说明。
11.2 报告生成
Evolution 软件可自动生成实验报告,包含:
光谱曲线与吸光度表格;
测量参数摘要;
数据统计与分析结果。
报告可直接打印或保存为 PDF。
十二、维护与保养要点
每次实验后清洁样品舱与比色皿架;
定期校准波长与光度(建议每月一次);
更换老化光源灯(使用寿命约 1000 小时);
检查反射镜与光栅是否有灰尘;
每年由专业工程师进行性能验证。
良好的维护习惯是保持测定精度的保障。
十三、常见问题及处理
| 问题 | 可能原因 | 解决办法 |
|---|---|---|
| 吸光度读数不稳定 | 光源未预热 | 预热 15 分钟 |
| 光谱曲线异常 | 光栅或反射镜污染 | 清洁光学部件 |
| 吸光度为负 | 空白校正错误 | 重新校正空白 |
| 无信号输出 | 比色皿插反或光路遮挡 | 调整方向 |
| 测定重复性差 | 比色皿未清洁或样品不均 | 统一操作条件 |
十四、安全规范
不得直视光源,防止紫外灼伤;
使用仪器前确认接地良好;
清洁光学元件时禁止使用硬质材料;
实验过程中保持样品舱盖关闭;
操作结束后应记录维护日志。
十五、测定流程简要总结
| 阶段 | 操作要点 | 目标 |
|---|---|---|
| 1. 实验准备 | 检查环境、清洁仪器 | 保证测量稳定 |
| 2. 开机与预热 | 启动仪器与软件 | 稳定光源强度 |
| 3. 模式设置 | 设定波长与参数 | 确定测定条件 |
| 4. 空白校正 | 测定基线 | 消除背景影响 |
| 5. 样品测定 | 测量吸光度或扫描曲线 | 获取数据 |
| 6. 数据分析 | 计算浓度、绘制曲线 | 结果判定 |
| 7. 结果保存 | 导出 CSV/PDF 文件 | 数据存档 |
| 8. 关机维护 | 清洁与记录 | 延长寿命 |
整个过程科学有序,确保每次测定数据准确可靠。


