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赛默飞分光光度计Evolution测定流程

赛默飞 Evolution 系列分光光度计 是一款性能稳定、功能完善的紫外–可见光分析仪器,广泛应用于生物化学、药物分析、材料检测、环境监测等领域。

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一、概述

赛默飞 Evolution 系列分光光度计 是一款性能稳定、功能完善的紫外–可见光分析仪器,广泛应用于生物化学、药物分析、材料检测、环境监测等领域。
其测定流程体现了从“光源预热—样品准备—光谱测量数据分析—结果保存”的一体化理念。

通过规范化流程操作,可最大限度地减少测量误差、提高结果重复性,并保障仪器长期稳定运行。


二、测定流程总览

Evolution 分光光度计的完整测定流程可分为八大阶段:

  1. 实验准备与环境检查

  2. 仪器启动与光源预热

  3. 软件设置与模式选择

  4. 空白校正与基线调整

  5. 样品测定

  6. 结果记录与数据分析

  7. 实验结束与清理

  8. 数据保存与备份

以下章节将对每个步骤进行详细阐述。


三、实验准备阶段

3.1 环境条件检查

  • 温度:保持在 20–25 ℃;

  • 湿度:45%–60%;

  • 电源:AC 220V ±10%,独立稳压电源;

  • 振动:避免震源或强磁干扰;

  • 光照:远离阳光直射及荧光灯直射。

稳定的环境是保证光谱测量重复性的首要条件。

3.2 仪器外观与附件检查

  1. 确认电源线、接地线连接牢固;

  2. 检查光源灯安装正确,无松动或异响;

  3. 清洁样品舱内部,确保无灰尘与液滴;

  4. 准备标准比色皿(石英或光学玻璃);

  5. 准备擦拭镜头纸、无水乙醇及实验日志。


四、仪器启动与光源预热

4.1 启动步骤

  1. 打开主机电源,观察显示屏亮起;

  2. 等待仪器自动完成系统自检(包括光栅、电机、检测器等);

  3. 若状态显示“Ready”,说明自检通过。

4.2 光源预热

Evolution 系列使用氘灯与钨卤灯双光源系统:

  • 氘灯用于紫外区(190–360 nm);

  • 钨灯用于可见区(360–1100 nm)。

光源需预热 10–15 分钟,以保证光强稳定并消除漂移。


五、软件登录与参数设置

5.1 启动软件

打开电脑,运行 Thermo InsightInsight Pro 软件,系统自动识别仪器。界面显示仪器型号、序列号及连接状态。

5.2 模式选择

根据实验目的选择合适的测定模式:

模式功能典型用途
Fixed Mode固定波长测量吸光度或透射率定量检测
Scan Mode光谱扫描λmax、物质识别
Quant Mode标准曲线定量含量测定
Kinetics Mode动力学测定反应速率分析

5.3 参数设定

  • 波长或波长范围(如 260 nm 或 200–800 nm);

  • 带宽(1–2 nm);

  • 扫描速度(600 nm/min);

  • 积分时间(0.5–1 s);

  • 信号平均次数(3–5 次);

  • 数据保存路径与命名规则。

正确的参数设置是确保光谱数据精度的关键。


六、空白校正与基线设置

6.1 空白校正目的

用于消除溶剂或容器的背景吸收,使样品测得的吸光度仅反映目标物质。

6.2 校正步骤

  1. 取空白溶液(如蒸馏水或缓冲液);

  2. 加入比色皿约 2/3 容量;

  3. 擦干外壁水迹与指纹;

  4. 放入样品架的参比位置;

  5. 点击“Blank”或“Zero”按钮;

  6. 仪器自动记录光强 I₀ 并设为基准线。

校正完成后,系统提示“Baseline Set”。

6.3 注意事项

  • 空白溶液成分必须与样品溶剂相同;

  • 校正期间应关闭样品舱盖以防外光干扰;

  • 每更换溶剂或波长区间都需重新校正。


七、样品测定流程

7.1 比色皿准备

  • 使用干净的石英或玻璃比色皿;

  • 光程长度应一致(通常 10 mm);

  • 放置方向统一(有标识面朝前);

  • 比色皿内液面高度相同。

7.2 样品装载

  1. 加入待测样品溶液约占比色皿 2/3;

  2. 检查是否有气泡,如有应轻轻敲击排出;

  3. 擦净外壁后放入样品架中对应位置。

7.3 测量操作

(1)固定波长测定

  • 设定波长(如 260 nm、595 nm 等);

  • 放入样品比色皿;

  • 点击“Measure”启动测量;

  • 系统自动显示吸光度 A 或透射率 %T。

(2)光谱扫描测定

  • 设定起始波长与终止波长(如 200–800 nm);

  • 执行空白校正;

  • 点击“Start Scan”,仪器自动扫描并绘制曲线;

  • λmax 自动标识。

(3)定量分析

  • 选择 Quant Mode;

  • 输入标准样浓度与测得吸光度;

  • 系统自动生成标准曲线方程 y = kx + b;

  • 测定未知样吸光度后自动计算浓度。

(4)动力学测定

  • 设定波长与测量时间(如 340 nm,300 s);

  • 设定采样间隔(1 s);

  • 点击“Start”,系统记录 A–t 曲线;

  • 软件自动计算反应速率(ΔA/min)。


八、数据处理与结果分析

8.1 实时数据观察

实验过程中,可在软件主界面实时监控吸光度变化或扫描曲线形态。

8.2 数据修正与平滑

  • 使用平滑算法(Savitzky–Golay 或 Moving Average);

  • 去除偶发噪声点,提高信号稳定性;

  • 不得随意修改原始数据。

8.3 数据导出

测量完成后,可将结果导出为:

  • CSV 文件:便于统计分析;

  • PDF 文件:用于报告归档;

  • INS 文件:原始实验格式,可重新载入分析。

8.4 结果判读

  • 吸光度在 0.1–1.0 A 之间表示最佳线性;

  • 若 A > 1.5,需稀释样品重测;

  • λmax 与标准物质一致,说明样品纯度良好;

  • 标准曲线相关系数 R² ≥ 0.995 为合格。


九、重复测定与误差控制

9.1 重复测定

同一样品至少重复测量 3 次,取平均值以消除偶然误差。

9.2 误差来源

类型主要原因控制方法
系统误差光源波动、光栅偏移定期校准
操作误差样品体积不一、比色皿不洁统一操作规范
随机误差环境温度波动控制恒温环境

9.3 精度验证

使用标准滤片或标准溶液(如 K₂Cr₂O₇)验证光度精度。
仪器偏差应小于 ±0.003 A。


十、实验结束与仪器关闭

10.1 关闭步骤

  1. 保存并导出实验数据;

  2. 退出软件系统;

  3. 关闭仪器主电源;

  4. 等待光源冷却 5 分钟;

  5. 拔除电源线(长期不使用时);

  6. 盖上防尘罩。

10.2 比色皿与样品处理

  • 倒空比色皿残液;

  • 用蒸馏水或乙醇清洗;

  • 干燥后放入干燥器保存;

  • 样品废液按实验室规定处理。


十一、实验记录与报告

11.1 记录内容

  • 实验日期与操作者;

  • 样品编号与溶剂类型;

  • 波长、带宽、积分时间等参数;

  • 吸光度、透射率、浓度或速率值;

  • 标准曲线方程与相关系数;

  • 异常情况说明。

11.2 报告生成

Evolution 软件可自动生成实验报告,包含:

  • 光谱曲线与吸光度表格;

  • 测量参数摘要;

  • 数据统计与分析结果。

报告可直接打印或保存为 PDF。


十二、维护与保养要点

  1. 每次实验后清洁样品舱与比色皿架;

  2. 定期校准波长与光度(建议每月一次);

  3. 更换老化光源灯(使用寿命约 1000 小时);

  4. 检查反射镜与光栅是否有灰尘;

  5. 每年由专业工程师进行性能验证。

良好的维护习惯是保持测定精度的保障。


十三、常见问题及处理

问题可能原因解决办法
吸光度读数不稳定光源未预热预热 15 分钟
光谱曲线异常光栅或反射镜污染清洁光学部件
吸光度为负空白校正错误重新校正空白
无信号输出比色皿插反或光路遮挡调整方向
测定重复性差比色皿未清洁或样品不均统一操作条件

十四、安全规范

  1. 不得直视光源,防止紫外灼伤;

  2. 使用仪器前确认接地良好;

  3. 清洁光学元件时禁止使用硬质材料;

  4. 实验过程中保持样品舱盖关闭;

  5. 操作结束后应记录维护日志。


十五、测定流程简要总结

阶段操作要点目标
1. 实验准备检查环境、清洁仪器保证测量稳定
2. 开机与预热启动仪器与软件稳定光源强度
3. 模式设置设定波长与参数确定测定条件
4. 空白校正测定基线消除背景影响
5. 样品测定测量吸光度或扫描曲线获取数据
6. 数据分析计算浓度、绘制曲线结果判定
7. 结果保存导出 CSV/PDF 文件数据存档
8. 关机维护清洁与记录延长寿命

整个过程科学有序,确保每次测定数据准确可靠。