赛默飞分光光度计Evolution使用步骤
质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司
一、概述
赛默飞 Evolution 系列分光光度计 是一款广泛应用于生物化学、药物检测、材料分析、食品安全及环境监测等领域的高精度紫外–可见光分析仪器。
其基本功能是通过测定样品对特定波长光的吸收强度，进而推算浓度、纯度或反应速率。
要保证实验结果的准确可靠，必须严格按照标准化的使用步骤执行。Evolution 系列仪器在设计上已高度智能化，但仍需操作者熟练掌握各环节的操作细节。
二、使用前的准备工作
2.1 实验环境要求
温度控制：室温保持在 20–25 ℃，波动不超过 ±2 ℃；
湿度范围：相对湿度 45%–60%，避免结露；
电源要求：AC 220 V ±10%，接地良好并使用稳压电源；
振动与光照：仪器应置于稳固台面，远离阳光直射与强电磁干扰；
洁净度：操作台应干燥、无灰尘与腐蚀性气体。
2.2 仪器检查
在开机前应完成以下自检：
检查电源线、接地线连接是否牢固；
确认光源灯（氘灯、钨灯）安装正确且完好；
样品舱清洁，无液体残留与灰尘；
比色皿架稳固、无松动；
显示屏与键盘操作响应正常。
2.3 预热与自检
打开电源，仪器自动执行系统自检，包括光源状态、光栅角度、检测器响应等。
自检通过后，软件界面显示“Ready”状态。
光源需预热 10–15 分钟，使光强稳定、光谱信号均匀。
三、仪器启动与软件登录
3.1 启动顺序
打开主机电源；
打开计算机，启动控制软件 Thermo Insight 或 Insight Pro；
仪器与软件自动连接，状态栏显示“Connected”；
检查光源模式是否为自动切换（氘灯用于 190–360 nm，钨灯用于 360–1100 nm）。
3.2 软件初始设置
在软件主界面中可进行以下设置：
实验人员信息与实验名称；
数据存储路径；
测定模式选择（固定波长、扫描、定量、动力学等）；
默认单位（A 或 %T）。
确认所有设置无误后进入测定准备阶段。
四、比色皿与样品准备
4.1 比色皿选择
| 波段范围 | 推荐材质 | 光程长度 |
|---|---|---|
| 紫外区 (190–350 nm) | 石英比色皿 | 1 cm |
| 可见区 (350–800 nm) | 光学玻璃比色皿 | 1 cm |
| 高浓度样品 | 短光程比色皿 | 0.2–0.5 cm |
| 微量样品 | 微量比色皿或毛细管比色皿 | ≤1 mm |
4.2 比色皿清洁
使用蒸馏水或乙醇冲洗干净；
擦干透光面，避免水滴与指纹；
不同溶剂测定间需更换比色皿或彻底清洗。
4.3 样品准备
样品应澄清透明，无悬浮颗粒与气泡；
若样品混浊，需过滤或离心；
样品温度应与空白溶液相同；
空白溶液与样品基质一致，仅不含分析物。
五、测量模式选择
Evolution 提供多种操作模式，适用于不同实验类型。
选择合适模式后，输入波长范围、步长、积分时间等参数。
六、空白校正
空白校正是确保测量精度的关键步骤。
操作流程：
将空白溶液加入比色皿，擦净外壁；
放入参比光路位置；
点击“Blank”或“Zero”键；
仪器自动测定空白光强并设为基准；
校正完成后提示“Baseline Set”。
注意事项：
空白溶液成分应与样品完全一致；
校正期间应关闭样品舱盖；
空白测定后不得更改波长或带宽参数。
七、样品测量步骤
7.1 固定波长测量
选择 Fixed Mode；
输入目标波长（如 595 nm、260 nm 等）；
放入样品比色皿并关闭舱盖；
点击“Measure”，系统显示吸光度 A 或透射率 %T；
若测多样品，可选择“Batch Measurement”实现自动测定与命名。
7.2 光谱扫描测量
选择 Scan Mode；
设定起始波长（如 200 nm）与终止波长（如 800 nm）；
步长一般设为 1 nm；
执行空白校正；
点击“Start Scan”，仪器自动扫描整个波段；
光谱图实时显示，可自动识别吸收峰 λmax。
7.3 定量分析
选择 Quant Mode；
设定测定波长为样品 λmax；
配制系列标准溶液（至少 5 点）；
测得各标准吸光度，软件自动生成 A–C 曲线；
测定未知样品吸光度，系统计算浓度；
输出标准曲线、方程式与相关系数 R²。
7.4 动力学测定
选择 Kinetics Mode；
输入波长、测量时间（如 300 s）与采样间隔（1 s）；
设定延迟时间（如 10 s）以排除加样误差；
点击“Start”，仪器自动记录 A–t 曲线；
软件计算反应速率（ΔA/min）。
八、参数设置详解
8.1 波长与带宽
波长范围：190–1100 nm；
带宽范围：0.5–5 nm（可调）；
常规分析建议使用 2 nm 带宽；
对分辨率要求高的实验可设 1 nm。
8.2 积分时间与平均次数
积分时间：0.5–1 s（信号平均时间）；
平均次数：3–5 次，可提高信噪比。
8.3 扫描速度与步长
扫描速度：600 nm/min；
步长：1 nm。
步长越小、速度越慢，曲线越平滑但耗时更长。
九、数据记录与保存
测定完成后，软件自动生成结果。可选择以下保存方式：
保存格式：CSV、TXT、PDF、Excel；
保存内容：样品名称、波长、吸光度、时间、日期、操作人；
自动命名：系统根据样品编号自动递增；
数据导出：可导入统计软件进行二次分析；
报告生成：可直接生成实验报告含光谱图与表格。
建议实验数据同时备份于本地和云端存储，以防丢失。
十、结果分析与判断
10.1 吸光度判断
A 值在 0.1–1.0 之间为最佳范围；
若 A > 1.5，应稀释样品重测；
负值或极低 A 值说明样品过稀或光路异常。
10.2 光谱分析
峰值 λmax 与标准物质一致表明样品纯度良好；
峰形对称说明光路正常；
多峰或平顶峰可能为样品混合或杂散光干扰。
10.3 定量分析
标准曲线 R² ≥ 0.995 表示线性关系理想；
截距接近零说明系统误差小；
若出现异常点，应排查样品操作一致性。
十一、实验结束与关机步骤
关闭软件，保存所有实验数据；
退出系统并关闭计算机；
关闭仪器主电源；
待光源冷却 5 分钟后再切断总电源；
清洁样品舱与比色皿架；
将比色皿洗净、晾干后放入干燥器保存；
盖上仪器防尘罩，填写实验日志。
十二、操作注意事项
每次实验前应执行空白校正；
样品测定间应保持比色皿方向一致；
光源未预热时不宜进行测量；
反应样需立即测定，防止时间误差；
操作中避免外光照射进入样品舱；
对高浓度溶液应分级稀释，防止非线性；
不得频繁开关仪器，以延长光源寿命。
十三、常见问题与解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 吸光度波动大 | 光源未稳定 | 预热 15 分钟后测定 |
| 吸光度为负 | 空白校正错误 | 重新校正空白 |
| 光谱断层 | 光源切换点异常 | 手动调整切换波长 |
| 无信号输出 | 光路遮挡、比色皿插反 | 检查比色皿方向与光路 |
| 基线漂移 | 环境温度波动或光栅污染 | 保持恒温并清洁光栅 |
| 光强不足 | 灯泡老化或反射镜污染 | 更换灯泡、清洁反射面 |
十四、安全规范
不得直视光源，防止紫外灼伤；
使用前确认电源接地良好；
禁止在仪器上方放置液体容器；
清洁光学元件时使用无尘镜头纸；
不得私自拆卸仪器内部光学组件。
十五、维护与保养
每日维护
清洁样品舱与外壳；
检查电源与显示屏；
记录光源使用时间。
每月维护
执行波长与光度校准；
检查光栅与反射镜表面；
验证比色皿一致性。
每年维护
更换老化光源；
由厂家进行系统检定；
更新软件与固件版本。
十六、典型实验举例
（1）DNA 浓度测定
波长：260 nm；
模式：Fixed Mode；
结果分析：A260 = 1.0 表示 DNA 浓度约为 50 μg/mL；
纯度判断：A260/A280 比值应为 1.8。
（2）蛋白质定量（Bradford 法）
波长：595 nm；
模式：Quant Mode；
标准溶液：0–100 μg/mL BSA；
建立标准曲线并计算未知样浓度。
（3）金属离子配合物测定
波长：480 nm；
模式：Scan + Fixed；
目的：确定 λmax 后进行定量分析。
十七、使用步骤总结
环境检查与仪器自检；
打开电源，预热光源；
启动软件并建立实验文件；
选择测定模式与参数；
执行空白校正；
测量样品并记录结果；
数据分析与保存；
关闭仪器并清洁维护。
该八步流程是 Evolution 系列仪器操作的标准规范，确保从样品准备到结果输出全过程的科学性与可重复性。
