赛默飞分光光度计Evolution实验操作
质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司
一、前言
赛默飞 Evolution 系列分光光度计是一款高精度的紫外—可见光分析仪器，广泛应用于生命科学、化学分析、药物检测、环境监测和材料研究。
其特点在于操作简便、灵敏度高、光谱范围宽（190–1100 nm）且可实现多模式测量。
为了确保实验数据准确可靠，操作人员应熟悉仪器结构、光学系统、测量模式及软件界面，并严格遵循标准化实验步骤。
本指南旨在提供完整的实验操作流程与规范，帮助使用者高效、安全地进行光谱测量与数据分析。
二、实验前准备
1. 环境条件
为获得稳定的测量结果，实验室应满足以下要求：
温度：20–25℃；
湿度：40%–70%，无冷凝；
电源：AC 220V ±10%，50/60Hz；
环境光线：避免阳光直射与强烈灯光照射；
放置要求：仪器应稳固地放置在防震实验台上，保持水平。
2. 检查仪器状态
确认电源线与接地线连接牢固；
打开仪器电源，等待系统自检完成；
检查光源工作状态，确认氘灯与钨卤素灯能量正常；
观察触控屏或软件界面，若显示“Ready”表示系统可用。
3. 光源预热
仪器启动后，氘灯与钨灯需预热约 15–20 分钟，以保证光强稳定。
预热期间可准备样品溶液及比色皿。
三、样品与比色皿准备
1. 比色皿要求
标准光程为 10 mm；
材质分为石英（用于紫外区）与玻璃（用于可见区）；
每次实验应使用干净、无划痕的比色皿；
若使用多个比色皿，应保证其透光性能一致。
2. 样品溶液准备
配制样品溶液与空白溶液；
若样品浓度较高，应稀释至吸光度 0.2–1.0 区间；
若含有悬浮物，应先离心或过滤。
3. 比色皿清洁与加样
使用前用蒸馏水或对应溶剂清洗比色皿；
加样量约为比色皿容积的 2/3；
避免产生气泡，可用吸管轻轻贴壁注入。
四、仪器操作流程
1. 启动与初始化
打开电源开关；
系统自动执行光源检测与波长自校准；
屏幕进入主界面，显示测量模式选项。
2. 选择测量模式
Evolution 系列提供多种测量模式，操作员可根据实验类型选择：
固定波长测量（Fixed Wavelength）；
波长扫描（Scan Mode）；
定量分析（Quantitative Mode）；
时间扫描（Kinetics Mode）；
多波长测量（Multi-Wavelength Mode）；
核酸/蛋白质测定模式（DNA/Protein）。
3. 设定实验参数
根据实验需求输入以下参数：
测量波长或扫描范围（如 200–800 nm）；
扫描步长（一般为 0.5–2 nm）；
扫描速度（Slow、Medium 或 Fast）；
测量单位（吸光度 A 或透过率 %T）；
若进行定量实验，需输入标准曲线点数与浓度值。
4. 空白校正
空白校正是实验的关键步骤。
在比色皿中加入纯溶剂或参比溶液；
将比色皿放入样品舱中；
点击“Blank”执行基线校正；
系统自动设定此信号为 0.000 A 或 100%T。
5. 样品测量
将样品比色皿放入样品舱；
点击“Measure”开始测量；
仪器自动采集光谱数据并显示曲线或数值；
若为扫描模式，系统自动绘制吸收光谱图；
测量完成后，可选择保存、打印或导出结果。
五、常用测量模式操作详解
1. 固定波长测定
用途：快速测定特定波长下样品的吸光度或透过率。
步骤：
输入测量波长（如 280 nm）；
执行空白校正；
测量样品并记录吸光度。
此模式常用于蛋白质含量或溶液浓度测定。
2. 波长扫描模式
用途：获取样品在整个波长范围内的吸收光谱。
操作流程：
设定扫描起止波长（如 200–800 nm）；
执行空白校正；
启动扫描，系统自动绘制光谱曲线；
可放大、平滑或标注峰位。
结果分析：
峰值位置即样品的最大吸收波长 λmax；
峰形变化反映样品结构特征或纯度。
3. 定量分析模式
用途：依据标准曲线法测定未知样品浓度。
步骤：
测量 3–7 个不同浓度标准溶液吸光度；
系统自动绘制 A–C 曲线并计算回归方程；
测量未知样品吸光度；
自动计算浓度并显示结果。
特点：自动计算 R² 值、斜率、截距，支持多点拟合。
4. 时间扫描模式
用途：监测反应过程中吸光度随时间的变化。
操作：
设定波长与采样时间间隔（如每 2 秒）；
启动测量，系统连续记录 A–t 曲线；
自动计算反应速率常数或反应初速。
应用：酶动力学实验、光降解研究、反应速率分析。
5. 多波长模式
用途：同时测定样品在多个波长下的吸光度，用于多组分分析。
示例：核酸纯度分析（A260/A280 比值）。
操作步骤：
输入待测波长（如 230、260、280 nm）；
执行空白校正；
测量后系统自动计算吸光度与比值。
六、数据处理与分析
1. 数据查看与统计
测量完成后，系统自动生成表格与光谱曲线。
用户可进行以下操作：
平均值与标准偏差计算；
曲线平滑、缩放与峰值标注；
光谱叠加比较；
计算吸光度差值与浓度转换。
2. 报告生成
系统可自动生成实验报告，包含参数设置、测量数据、标准曲线及光谱图；
报告格式支持 PDF、CSV、TXT 等；
可直接打印或导出至 U 盘与实验室服务器。
3. 数据保存与导出
内部存储可保存约 1000 组实验数据；
通过 USB 或网络接口导出数据；
部分型号支持云端同步与 LIMS 数据管理系统连接。
七、实验误差与质量控制
1. 仪器误差控制
定期进行波长校准（使用氧化钬滤光片）；
定期进行吸光度校准（使用重铬酸钾溶液）；
检查光源能量是否稳定。
2. 操作误差控制
保持比色皿方向一致；
避免样品表面有气泡；
保证溶液浓度在仪器线性范围内；
样品舱盖在测量时必须关闭，以减少杂散光。
3. 重复性与再现性检查
每个样品测定 3 次取平均值；
计算标准偏差（SD）与变异系数（CV%）；
若 CV% > 2%，需重新测量。
八、实验结束与仪器维护
1. 测量结束操作
完成测量后关闭光源；
退出软件并关闭主机电源；
取出比色皿，清洗干净并擦干；
盖上仪器防尘罩。
2. 光学系统维护
定期清洁光学窗口与样品舱；
禁止使用含氨或强碱性清洁剂；
若发现光强衰减，需检查光源并重新校准。
3. 光源保养
| 光源类型 | 寿命（小时） | 建议更换周期 |
|---|---|---|
| 氘灯 | 1000–1500 | 每 12 个月 |
| 钨卤素灯 | 2000 | 每 18 个月 |
4. 存放与停机
若仪器长期停用，应：
关闭电源并断开插头；
将样品舱清洁干净；
存放于干燥、避光环境；
每月通电预热一次以保持电子系统稳定。
九、安全操作规范
严禁在光源点亮状态下打开光源舱盖，以防紫外辐射伤害；
操作液体样品时避免溅入仪器内部；
禁止在高湿或高温环境下运行；
清洁仪器时须断电，严禁使用含氯溶剂；
定期检查接地装置，防止漏电。
十、实验实例：溶液吸收光谱测定
实验目的：测定有机染料溶液的吸收峰并确定 λmax。
实验步骤：
打开仪器并完成光源预热；
设置扫描范围 300–700 nm，步长 1 nm；
以蒸馏水为空白进行基线校正；
放入样品比色皿，点击“Scan”；
获取吸收光谱曲线，记录最大吸收波长；
导出光谱数据并打印报告。
结果分析：
λmax = 512 nm，为染料分子主要吸收峰；
吸光度值可用于浓度计算或结构分析。
十一、常见问题与解决方法
| 问题现象 | 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 仪器无法启动 | 电源连接不良 | 检查插头与保险丝 |
| 吸光度值不稳定 | 光源未预热、样品含气泡 | 预热充分、重新取样 |
| 光谱曲线畸变 | 比色皿污染或光路偏移 | 清洁比色皿、重新校准 |
| 数据无法保存 | 内存满或U盘异常 | 删除旧文件或更换设备 |
| 无法打印报告 | 接口未识别 | 检查打印机连接 |
十二、操作培训与质量管理
1. 操作培训内容
理论培训：光谱分析原理、仪器结构、测量模式；
实践培训：样品测量、基线校正、数据导出；
维护培训：光源更换、能量校准、软件更新。
2. 培训考核项目
操作规范性；
测量准确度与重复性；
报告生成与数据完整性；
安全操作执行情况。
3. 实验记录与档案管理
每次实验应填写《分光光度计实验记录表》，包括：
样品编号与操作人；
实验参数与模式；
测量结果与备注；
仪器状态与校准信息。
