赛默飞分光光度计Evolution实验指南
质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司
一、概述
赛默飞 Thermo Scientific Evolution 系列分光光度计是一款高性能的紫外–可见光分析仪器，广泛应用于生命科学、药物分析、环境检测及化学研究领域。
它采用双光束光学系统与高精度光栅，具有波长准确、扫描速度快、信噪比高等优点，能够进行吸光度测定、浓度计算、光谱扫描及反应动力学分析等多项实验任务。
为确保实验结果的准确性与可重复性，使用前必须熟悉仪器的结构、软件操作及标准化实验流程。
二、仪器组成与功能简介
2.1 光学系统
Evolution 系列采用双光束结构，光源经分光后同时照射样品与参比光路，通过检测器同步采集信号以消除光源波动误差。
2.2 控制与软件系统
配套使用 Insight / Insight Pro 软件，可完成波长设定、扫描控制、标准曲线建立、数据存储与结果计算等操作。
主要功能模块包括：
Fixed（固定波长）：单波长吸光度/透射率测定；
Scan（光谱扫描）：绘制样品吸收曲线；
Quant（定量分析）：建立标准曲线计算样品浓度；
Kinetics（动力学）：监测反应速率或酶活性变化；
Multi-Cell：多样比色皿架自动测定模式。
三、实验前准备
3.1 环境条件
温度控制在 20 – 25 ℃，相对湿度 45% – 60%；
避免阳光直射与强烈振动；
电源 AC 220 V ± 10%，接地良好；
远离酸碱性气体、挥发性溶剂或粉尘环境。
3.2 仪器检查
确认电源线与通信线连接牢固；
打开电源，仪器自检后进入待机状态；
打开配套软件，检查设备连接状态是否正常；
样品舱干净、比色皿架无灰尘；
预热光源 10 – 15 分钟，使光强稳定。
3.3 比色皿与样品准备
比色皿类型：石英比色皿（紫外区）、玻璃比色皿（可见区）；
光程：10 mm （标准），特殊需求可选 5 mm 或 1 mm；
清洁要求：清洗后用无绒纸擦干，外壁无指纹与水珠；
样品状态：溶液应澄清透明、无悬浮物或气泡；
空白溶液：与样品溶剂一致，用于基线校正。
四、实验模式选择与操作流程
4.1 固定波长吸光度测定（Fixed Mode）
应用场景：测定特定波长下样品的吸光度或透射率，如蛋白质 Bradford 法、染料浓度分析等。
步骤：
打开 Insight 软件，选择 “Fixed Mode”；
设置波长（如 595 nm 或 260 nm），选择光度单位（A 或 %T）；
进行空白校正：
将空白液放入比色皿架；
点击 “Blank” 完成校正；
取出空白液，换入样品；
点击 “Measure” 执行测定，软件显示吸光度值；
若测多样，可逐一替换比色皿并记录结果；
测定完成后保存数据文件。
注意事项：
样品吸光度建议控制在 0.1 – 1.0 A；
若吸光度超过 2.0 A，应稀释样品；
每批测定前都需重新做空白校正。
4.2 光谱扫描测定（Scan Mode）
目的：绘制样品在不同波长下的吸收曲线，确定最大吸收峰 λmax。
步骤：
选择 “Scan Mode”；
设定起始波长与终止波长（如 200 – 800 nm），步长 1 nm；
执行空白校正；
放入样品比色皿并点击 “Start Scan”；
扫描过程中软件实时绘制吸收曲线；
扫描完成后自动标注 λmax 与峰值吸光度；
可保存光谱图或导出为数据表。
结果分析：
主峰位置反映分子吸收特征；
若出现多峰或肩峰，说明样品中可能含杂质或结构差异；
λmax 位置可用于后续定量分析波长选择。
4.3 定量测定（Quant Mode）
目的：建立标准曲线，通过吸光度求样品浓度。
实验设计：
制备一系列已知浓度标准溶液（至少 5 组）；
吸光度应覆盖线性范围（0.1–1.0 A）。
步骤：
打开 Quant 模式，选择“新建方法”；
输入波长 λmax 或实验规定波长；
选择“多点校准”方式，输入标准浓度与测得吸光度；
软件自动拟合直线 A = aC + b，并计算相关系数 R²；
执行空白校正后测定未知样品；
程序自动计算浓度并输出结果表。
结果判断：
线性方程 R² ≥ 0.995 为理想；
若偏离线性范围，应调整浓度或波长；
测定重复三次取平均值。
4.4 动力学测定（Kinetics Mode）
用途：测定化学或酶反应速率。
步骤：
选择 “Kinetics” 模式；
设置固定波长（如 340 nm 或 405 nm）、总测定时间（如 300 s）与采样间隔（如 1 s）；
放入空白液进行校正；
加入底物与酶溶液后立即放入样品舱；
点击 “Start” 开始测定；
仪器自动记录 A–t 曲线；
软件根据线性区段计算 ΔA/min 并输出速率常数或酶活性值。
注意事项：
加样后操作应迅速，以减少反应延迟；
温度需恒定，以避免速率漂移；
可启用“预延时”功能用于稳定基线。
五、数据处理与报告生成
5.1 数据保存与导出
测定完成后点击“保存”按钮，文件可存入本地磁盘或 USB 设备。
支持 CSV、TXT、PDF 等格式，可导入 Excel、Origin 或实验室信息管理系统 (LIMS)。
5.2 图表与报告
软件可自动生成：
吸光度表格；
光谱扫描曲线；
标准曲线方程及 R² 值；
动力学变化曲线。
报告内容通常包括：样品名称、编号、波长、测定模式、结果数值、实验日期、操作人。
六、实验质量控制
6.1 仪器校准
波长准确度：使用钬滤光片或钕玻璃检测，偏差 ≤ ±0.3 nm；
光度准确度：使用中性密度滤片，偏差 ≤ ±0.005 A；
重复性：同一样品重复测定 3 次，标准偏差 ≤ 0.003 A。
6.2 空白与标准样控制
每批实验均应测定空白样品；
每日检测前测定标准溶液以确认仪器稳定性。
6.3 数据重复验证
对关键样品应测定三次取平均，并计算标准偏差与变异系数。
七、常见问题与处理
| 现象 | 可能原因 | 处理措施 |
|---|---|---|
| 吸光度波动大 | 光源未稳定、比色皿有气泡 | 预热光源、重新装样除泡 |
| 基线漂移 | 环境温差或光窗污染 | 控制温度、清洁光窗 |
| 吸光度偏高 | 比色皿未对齐、样品过浓 | 调整放置方向、稀释样品 |
| λmax 偏移 | 波长校准误差 | 重新执行波长校准 |
| 无信号 | 光路遮挡或比色皿放反 | 检查光路、正确放置比色皿 |
| 软件无法识别仪器 | 通讯线松动、驱动错误 | 重新连接或重启软件 |
八、安全与维护要点
8.1 安全操作
实验过程中避免强光直视样品舱；
更换灯源或内部部件时必须切断电源；
避免溶液溅入样品舱或电子接口；
使用完毕后及时擦拭仪器表面。
8.2 日常保养
样品舱保持干燥清洁；
每次使用后用镜头纸擦拭光窗；
定期检查风扇与通风口是否堵塞；
每半年进行波长与光度校准一次；
光源寿命到期后及时更换。
九、实验实例
实例 1：蛋白质浓度测定（Bradford 法）
模式：Quant Mode；
波长：595 nm；
制备标准蛋白溶液 (0 – 1 mg/mL)；
测定吸光度并建立标准曲线；
测未知样品吸光度并代入方程求浓度；
若 R² ≥ 0.999 说明线性良好。
实例 2：DNA 纯度测定
模式：Fixed Mode；
波长：230 nm、260 nm、280 nm；
空白：蒸馏水；
测 A260/A280 比值，理想值 ≈ 1.8 表明纯度良好。
实例 3：化学反应动力学
模式：Kinetics Mode；
波长：405 nm；
测定吸光度随时间变化曲线；
取初始线性区段计算 ΔA/min 或速率常数。
十、实验后处理
实验结束后关闭软件、退出操作界面；
清洗比色皿，擦干存入干燥器；
擦拭仪器外壳与样品舱；
关闭电源并盖上防尘罩；
记录实验日志：日期、实验类型、样品数量、异常情况。
十一、实验优化与技巧
光谱区选择：核酸检测选 260 nm 附近；蛋白质 280 nm ；染料类 400 – 700 nm。
光程控制：浓度过高时可用短光程比色皿。
温度管理：反应类实验应保持恒温。
多样测定：可利用自动多槽比色架提高效率。
背景修正：启用“Baseline Correction” 功能以提高精度。
