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赛默飞分光光度计BioMate操作规范

赛默飞(Thermo Scientific)BioMate 系列分光光度计是一款高精度、智能化的紫外–可见光分析仪器,广泛应用于生命科学、化学分析、环境检测、药物研究等领域。

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一、概述

赛默飞(Thermo Scientific)BioMate 系列分光光度计是一款高精度、智能化的紫外–可见光分析仪器,广泛应用于生命科学、化学分析、环境检测、药物研究等领域。
为保证仪器在长期运行中保持高稳定性和数据准确性,操作人员必须遵循规范的使用流程与管理制度。

本操作规范旨在建立统一的操作标准,使实验人员能够熟练掌握 BioMate 的使用方法,确保实验结果可重复、可追溯,并符合实验室质量管理体系要求。


二、使用前准备与环境要求

2.1 实验环境条件

  1. 温度:20~25 ℃,波动不超过 ±2 ℃;

  2. 湿度:45%~60%,避免结露;

  3. 光照:避免阳光直射和强光干扰;

  4. 电源:AC 220V ±10%,50/60 Hz,良好接地;

  5. 震动:远离离心机、压缩机、空调外机等振动源;

  6. 空气质量:无粉尘、腐蚀性气体或溶剂蒸气;

  7. 通风:空气流通但不得直吹仪器。

2.2 仪器放置

  • 将仪器置于稳固、防震的实验台上,水平放置;

  • 仪器背面距墙 ≥15 cm,便于散热;

  • 避免与高温或潮湿设备放在同一区域。

2.3 操作者要求

  • 应熟悉仪器构造、工作原理与软件操作;

  • 经过实验室培训与考核合格方可独立使用;

  • 佩戴防护手套与护目镜,遵守实验安全规范。


三、开机与系统检查

3.1 通电前检查

  1. 检查电源线、USB 数据线连接牢固;

  2. 确认样品舱内无杂物、水滴或试剂残留;

  3. 检查比色皿架是否安装到位;

  4. 若长期未用,应先开盖通风 10 分钟。

3.2 开机步骤

  1. 打开主机电源开关;

  2. 仪器自动执行系统自检,包括光源、光栅、检测器;

  3. 屏幕显示“System Ready”后方可进入操作界面

  4. 氙灯或氘灯预热 10~15 分钟以稳定光强。

3.3 软件与界面确认

BioMate 开机后进入主菜单界面,包括以下模块:

  • Abs/Trans(吸光度/透射率)

  • Concentration(浓度测定)

  • Kinetics(动力学分析)

  • Spectrum光谱扫描

  • BioTest(生物样品专用模式)

操作前确认软件版本、时间、用户登录信息均正确。


四、样品与空白准备规范

4.1 样品要求

  • 样品溶液应透明澄清,无悬浮物;

  • 浓度应控制在吸光度 0.1~1.0 A 之间;

  • 浓度过高需稀释,过低应适当浓缩;

  • 样品测量温度应与空白液相同。

4.2 空白溶液

  • 与样品溶剂相同且不含被测物;

  • 用于校正溶剂、容器与光路的背景吸收;

  • 每次更换溶剂或试剂后必须重新做空白。

4.3 比色皿管理

  1. 选用石英比色皿(190–1100 nm 范围);

  2. 清洗后用无绒纸擦干外壁;

  3. 测量前检查无划痕、水珠或污迹;

  4. 使用时保持放置方向一致(标记朝外);

  5. 测定结束后立即清洗并放入干燥器保存。


五、操作流程规范

5.1 模式选择

根据实验目的选择合适模式:

  • 吸光度模式:单波长测定;

  • 浓度模式:定量分析

  • 光谱扫描模式:确定吸收峰;

  • 动力学模式:监测反应速率;

  • BioTest:核酸、蛋白等生物样品测定。

5.2 参数设置

参数内容建议设置
波长 (nm)选择检测波长或范围200–800(根据实验)
光度单位A 或 %T吸光度(A)优先
带宽光谱带宽(nm)1.0
扫描步长光谱扫描间隔1 nm(普通),0.5 nm(高精度)
数据采样时间积分时间0.5–1 s
测量方式单次或多次根据样品数量设置

设置完成后点击“Confirm”进入测定界面。

5.3 空白校正

  1. 将空白液放入样品架;

  2. 关闭样品舱盖;

  3. 点击“Blank”键执行校零;

  4. 校正完成后屏幕显示“Blank Done”;

  5. 取出空白液比色皿。

空白校正应在更换溶剂、波长或模式后重新进行。

5.4 样品测定

  1. 将样品液装入比色皿(体积约 2/3);

  2. 轻轻敲击去除气泡;

  3. 放入样品架并关闭舱盖;

  4. 点击“Measure”键开始检测;

  5. 仪器自动显示吸光度或浓度结果;

  6. 多样测量时按顺序更换比色皿。

5.5 光谱扫描(如需)

  1. 选择“Spectrum”模式;

  2. 设置扫描范围(200–800 nm);

  3. 空白校正后点击“Start”;

  4. 仪器自动扫描并生成光谱曲线;

  5. 标注 λmax 并保存结果。

5.6 动力学检测(如需)

  1. 选择“Kinetics”模式;

  2. 设定波长与测量时间(如 5 min);

  3. 加入底物后立即点击“Start”;

  4. 系统记录吸光度–时间曲线并计算 ΔA/min;

  5. 保存结果。


六、结果记录与数据管理

6.1 数据显示

仪器可实时显示吸光度、透射率、浓度或曲线图。
若为定量模式,可输出计算方程与相关系数。

6.2 数据保存

  1. 点击“Save”保存当前结果;

  2. 文件命名格式建议为:样品名_日期(如 DNA_20251029);

  3. 可存储于内部内存或导出至 USB。

6.3 数据导出与打印

  • 导出格式:CSV、TXT、PDF;

  • 打印内容:波长、吸光度、浓度、样品编号、日期、操作者。

6.4 数据归档

实验结束后应将电子文件备份到实验室服务器;
打印纸质报告附实验记录表保存至少 3 年。


七、安全操作规范

  1. 不得在仪器附近使用易燃溶剂或明火;

  2. 清洁仪器前必须切断电源;

  3. 不得擅自拆卸光源和内部部件;

  4. 避免紫外光直射眼睛;

  5. 样品溶液若含腐蚀性或强酸碱,应使用密闭比色皿;

  6. 仪器工作时保持舱盖关闭,防止外光干扰。


八、常见问题与排查

现象可能原因解决方法
无显示或系统冻结电源故障或软件错误关闭电源后重启
吸光度不稳定光源未预热、样品有气泡预热充分、重新装样
吸光度偏高比色皿污染或放置错误清洗比色皿、统一方向
吸光度偏低样品浓度太高稀释样品重新测定
基线漂移环境温差大或灯源衰减保持恒温、更换灯源
无光信号光窗被遮挡或光源损坏清洁光窗或更换灯泡

九、仪器维护与保养

9.1 日常维护

  • 每次使用结束后清洁样品舱;

  • 使用干净棉签蘸乙醇擦拭光窗;

  • 保持样品舱干燥,盖上防尘罩;

  • 禁止使用含强酸碱的清洗剂。

9.2 光源维护

  • 光源寿命一般 2000–5000 小时;

  • 光强下降或基线波动增大时应更换;

  • 更换灯源时注意极性方向与接头牢固。

9.3 定期校准

  • 每月进行波长与光度准确度验证;

  • 使用钕玻璃或钬氧化物滤光片检测波长偏差;

  • 使用标准中性密度滤片验证光度线性;

  • 校准数据应记录存档。

9.4 年度维护

  • 检查光栅清洁度与光学系统对准;

  • 检查电源稳压性能;

  • 更新软件与系统固件。


十、实验质量控制

10.1 空白与标准样品控制

  • 每次实验前先测定空白样品,确保吸光度为 0.000 ±0.002;

  • 每周使用标准溶液(如钴铵溶液)检测光度准确度。

10.2 重复性测试

  • 同一样品重复测定 3 次,标准偏差应 ≤0.001 A;

  • 若偏差超限,应检查样品与光路。

10.3 环境监控

  • 每日记录室温与湿度;

  • 电压波动应小于 ±5%;

  • 保持实验台无振动与灰尘。


十一、关机与存放

  1. 完成测定后,返回主界面并关闭光源(若可独立控制);

  2. 关闭主机电源;

  3. 拔下电源线与外部接口;

  4. 清洁仪器表面并盖上防尘罩;

  5. 存放在干燥通风的环境中。

若长期停用,每月通电 30 分钟以防潮。


十二、操作规范实例(DNA 测定)

目的:检测 DNA 样品浓度与纯度。

操作步骤

  1. 打开仪器并预热 15 分钟;

  2. 选择“BioTest → Nucleic Acid”模式;

  3. 设定波长 230、260、280 nm;

  4. 用蒸馏水为空白校正;

  5. 放入样品测定吸光度;

  6. 仪器自动计算浓度与 A260/A280 比值;

  7. 保存结果并打印报告。

结果判断

  • 比值 1.8 表示纯 DNA;

  • 若小于 1.6,可能含蛋白杂质。


十三、操作规范实例(化学比色分析)

目的:测定 Fe³⁺–SCN⁻ 络合物浓度。

步骤

  1. 模式:Concentration;

  2. 波长:480 nm;

  3. 制备 5 组标准溶液(浓度 0.1–1.0 mg/mL);

  4. 测量吸光度生成标准曲线;

  5. 测定未知样并由方程计算浓度;

  6. 输出报告并保存。

要求:标准曲线相关系数 R² ≥ 0.999。


十四、错误操作与禁止事项

  1. 不得在仪器上方放置液体容器;

  2. 禁止使用含乙醚、丙酮的强挥发溶剂近距离操作;

  3. 不可自行拆卸光源或电路;

  4. 禁止在仪器运行时拔插 USB 设备;

  5. 不得使用湿布擦拭显示屏;

  6. 样品泄漏应立即清理并用乙醇消毒。


十五、仪器使用记录

每次使用须填写《仪器使用记录表》,内容包括:

  • 使用日期与时间;

  • 操作者姓名;

  • 样品名称与编号;

  • 检测模式与参数;

  • 异常情况与处理结果。

该记录作为设备维护与质量审查的重要依据。