赛默飞分光光度计BioMate使用步骤
正确掌握使用步骤，是确保测量准确性、避免系统误差与延长仪器寿命的关键。
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一、概述
赛默飞（Thermo Scientific）BioMate 系列分光光度计是一种高精度、多功能的紫外–可见光吸收分析仪器。它适用于核酸、蛋白质、细胞悬液、化学反应以及材料溶液等样品的光学测定。
正确掌握使用步骤，是确保测量准确性、避免系统误差与延长仪器寿命的关键。
本指南详细介绍从准备到数据输出的全流程操作，涵盖标准模式、预设程序、数据存储及注意事项，可作为教学与实验室操作规范的参考。
二、使用前准备
2.1 环境要求
温度：20–25 ℃；湿度 ≤70%。
光照：避免阳光直射或强光照入样品室。
震动：仪器应放置在坚固平稳的实验台上。
电源：220 V±10%，接地良好，配稳压电源更佳。
2.2 仪器外观检查
检查电源线、USB 接口、打印机连接是否牢固；
样品舱内应无尘、无液体残留；
比色皿、光窗和反射镜保持清洁透明；
确认比色皿架安装正确，无晃动或卡滞。
2.3 开机与预热
三、主界面认识
BioMate 采用触控式彩色显示界面，菜单简洁直观。
主界面通常包含以下功能区：
Abs/Trans：单波长吸光度或透射率测量；
Concentration：浓度计算（系数或标准曲线法）；
Kinetics：时间扫描与反应速率测定；
Spectrum：全波长扫描，生成光谱图；
BioTest：内置核酸、蛋白、细胞生长等生命科学程序；
Utilities：系统设置、打印、数据管理。
用户可根据实验需求选择相应模块进入操作界面。
四、基础测量模式的使用步骤
（一）单波长吸光度测量
进入模式：选择“Abs/Trans”。
设定波长：输入目标波长（如 260 nm 或 600 nm）。
设置单位：可切换为吸光度（A）或透射率（%T）。
装入空白：将溶剂或参比液注入比色皿，放入样品室。
校零：点击“Blank”键，系统设定零点。
测量样品：更换比色皿为样品液，关闭盖子，按“Measure”。
读取数据：仪器显示吸光度或透射率值。
保存与导出：可保存至内部存储或 USB。
此模式适用于单组样品的快速定量分析，如蛋白浓度测定或溶液颜色强度比较。
（二）浓度测量模式
BioMate 提供三种计算方式：系数法、单点法、标准曲线法。
1. 系数法（Factor Method）
选择“Concentration”；
设定波长；
输入吸收系数 K；
设定浓度单位（mg/mL、μg/mL、mmol/L 等）；
校零后测样；
仪器自动计算浓度 = 吸光度 × 系数。
适用于标准吸收系数已知的物质，如 NADH、BSA。
2. 单点校准法（Single Standard）
输入标准样品浓度；
测量标准吸光度；
系统自动计算系数；
测未知样，自动计算浓度。
3. 标准曲线法（Multi-Standard）
设定波长（如 595 nm）；
输入标准浓度序列；
依次测量各标准溶液吸光度；
系统生成标准曲线并显示方程；
测未知样，自动计算结果并显示线性相关系数 R²。
该方法适用于比色反应或溶液定量，如 Bradford、BCA 蛋白法。
（三）动力学（Kinetics）模式
用于监测反应随时间变化的吸光度曲线。
选择“Kinetics”；
设定波长（如 340 nm）；
设定采样间隔（如 5 s）与总时间（如 300 s）；
选择显示方式（曲线或表格）；
插入空白比色皿，校零；
启动测量后加入酶或底物；
仪器实时记录 A–t 曲线并计算初速率（ΔA/min）。
常用于酶动力学、氧化还原反应或药物降解速率研究。
（四）光谱扫描模式
适合研究化合物吸收峰或确定 λmax。
选择“Spectrum”；
设定起始波长与终止波长（如 200–800 nm）；
设定步进间隔（0.5–5 nm）与扫描速度；
以空白液校零；
测样，系统自动扫描全谱并绘制曲线；
可通过指针读取峰值波长及吸光度；
保存或打印光谱。
（五）生物样品测定（BioTest）
BioMate 内置专用生物学程序，包括 DNA、RNA、蛋白质及细胞生长曲线分析。
1. DNA/RNA 测定
选择“BioTest → Nucleic Acids”；
输入样品稀释倍数；
自动检测 260、280、230 nm 吸光度；
计算浓度及 A260/A280、A260/A230 比值；
判断纯度（DNA≈1.8、RNA≈2.0）。
2. 蛋白质测定
选择“Protein”；
设定方法（A280、Bradford、BCA 等）；
根据提示测定空白与样品；
自动输出蛋白浓度。
3. 细胞生长监测
选择“Cell Growth”；
设定波长（600 nm）；
测量细胞悬液 OD 值；
绘制生长曲线，评估对数期与稳定期。
五、数据保存与输出
5.1 内部保存
测定后点击“Save”；
系统自动生成文件编号和日期；
可在“Data Manager”中查看、重命名、删除或导出。
5.2 USB 导出
插入 U 盘；
选择“Export”；
输出格式可选 CSV、TXT、PDF；
数据可导入电脑进行后续分析或打印。
5.3 打印功能
若连接打印机，可直接打印测定报告：
吸光度或浓度表格；
光谱图或动力学曲线；
标准曲线与方程信息。
六、操作注意事项
6.1 样品与比色皿
使用石英比色皿进行紫外测定（190–350 nm）；
使用光学玻璃比色皿进行可见光测定（350–800 nm）；
每次加样体积一致，避免液面高度差异；
不同样品使用不同比色皿或彻底清洗后再用。
6.2 空白设定
空白液应与样品溶剂完全一致；
每次更换试剂体系应重新校零；
若长期测试多个样品，建议定期复测空白。
6.3 仪器稳定性
测定前预热光源；
若连续工作超过 4 小时，建议间歇休息 10 分钟；
检测结束后及时关闭光源，延长灯寿命。
6.4 避免污染
样品舱内严禁滴液或存放试剂瓶；
若溶液溅入舱内，应立即擦干并用乙醇清洁。
七、测定后的处理与维护
7.1 数据记录
每次测定结束后记录波长、吸光度、样品编号、稀释倍数及操作者；
形成实验日志，便于追溯。
7.2 仪器清洁
使用干净无绒布擦拭外壳；
光学窗口可用无水乙醇轻拭；
清除样品舱内灰尘与残液。
7.3 光源维护
光源寿命到期或亮度减弱时应更换；
记录更换日期；
更换后执行波长与光度校准程序。
7.4 存放与防护
长期不使用时关闭电源，盖上防尘罩；
存放在干燥通风处；
每月通电运行 10 分钟以防潮。
八、常见问题及解决方法
| 现象 | 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 吸光度不稳定 | 光源未预热、样品有气泡 | 预热 15 分钟、去除气泡 |
| 基线漂移 | 灯老化、环境温差大 | 更换灯源、保持恒温 |
| 无光信号 | 比色皿未放好、灯未点亮 | 重新放置比色皿、检查灯源状态 |
| 波长偏移 | 光栅错位或污染 | 执行自动校准或清洁光路 |
| 测量误差大 | 样品浑浊或稀释倍数错误 | 重新制样并核对稀释比例 |
| 软件卡顿 | 文件太多或U盘异常 | 清理存储空间或更换U盘 |
九、使用示范实例
实例 1：测定 DNA 浓度与纯度
模式：BioTest → DNA。
稀释倍数：20×。
校零：使用 TE 缓冲液。
测样：放入样品比色皿，点击“Measure”。
结果：显示 A260/A280、A260/A230 比值与浓度。
输出：保存为 CSV 文件或打印报告。
实例 2：测定酶反应速率
模式：Kinetics。
波长：340 nm；采样间隔：10 s；时间：180 s。
校零：以空白溶液校正。
反应：加入底物后立即启动测量。
结果：系统自动计算 ΔA/min。
实例 3：光谱扫描分析
模式：Spectrum。
范围：200–800 nm；步长：1 nm。
扫描：测得曲线并标记 λmax。
应用：确定化合物吸收峰，用于后续定量。
十、安全操作须知
避免直视光源：紫外光对眼睛有伤害。
切勿擅自拆机：光学系统精密，非工程师不得开启。
防溶液腐蚀：操作时防止酸碱溅入仪器内部。
使用防护措施：必要时佩戴防护眼镜和手套。
断电维护：清洁、换灯或调整前务必切断电源。
十一、标准操作流程汇总（SOP）
| 阶段 | 操作要点 |
|---|---|
| 1. 环境检查 | 保持干燥、稳定、清洁 |
| 2. 开机自检 | 仪器通过自检后方可操作 |
| 3. 预热灯源 | 等待 10–15 分钟 |
| 4. 模式选择 | 根据实验目标选择程序 |
| 5. 参数设置 | 输入波长、采样间隔、单位等 |
| 6. 空白校零 | 用参比液设定基准 |
| 7. 样品测定 | 依次放样、记录结果 |
| 8. 数据处理 | 保存、导出或打印 |
| 9. 清洁维护 | 擦拭比色皿与样品舱 |
| 10. 关机存放 | 关闭灯源、电源，盖防尘罩 |
执行以上 10 步，可确保实验数据准确、操作高效。
十二、延伸操作与系统维护建议
多池位操作：若配有 6 位或 8 位池架，可批量测定；系统自动切换样品位，适合教学或高通量实验。
温控附件使用：对于温度敏感反应（如蛋白变性），可在菜单中设定 25–60 ℃ 控温，保持反应一致性。
定期校准：每月执行波长与光度校准，每半年检测噪声与线性。
软件更新：定期安装厂家发布的固件，保持最佳性能。
实验记录规范化：保存日期、模式、波长、吸光度、浓度与操作者，形成完整数据档案。
