质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

赛默飞（Thermo Scientific）BioMate 系列分光光度计是一种高性能紫外–可见光吸收检测仪器，常用于核酸、蛋白质、细胞培养、化学分析及比色反应测定。
其核心原理基于比耳–朗伯定律，通过测量特定波长下样品对光的吸收强度，推算其浓度或反应程度。
为了获得准确稳定的实验数据，科学规范的测定步骤尤为重要。以下将详细介绍 BioMate 在各种应用场景下的标准化测定流程。

二、测定前的准备工作

2.1 仪器环境条件

• 仪器应放置在稳定、防震、干燥的实验台上。

• 避免阳光直射、强风及高湿环境。

• 实验室温度保持在 20–25 °C，相对湿度不超过 70%。

• 电源电压应稳定，仪器需可靠接地。

2.2 仪器检查与开机

1. 接通电源，按下开关，仪器自动执行自检。

2. 检查屏幕是否显示启动界面，自检项目（光源、光栅、检测器）应全部通过。

3. 若出现异常提示，如光源未点亮或波长校准失败，应停止操作并排查原因。

4. 开机后需等待约 10–15 分钟，使氙灯或氘灯稳定。

2.3 样品池与附件安装

BioMate 可配置单池架、多池架或自动换样器：

• 确认池架类型（1 位、3 位、6 位或 8 位）。

• 用无绒纸擦拭样品池外壁，保持干净。

• 若测微量样品，需安装微量池或光纤附件。

• 对温控实验，安装 Peltier 恒温池架并设定温度。

2.4 仪器初始化设置

• 设定语言、日期、时间、打印格式、单位（Abs、%T 或浓度）。

• 检查默认波长、带宽、采样时间及输出格式是否符合实验需求。

• 对多池架进行池位匹配校正，消除透射率差异。

三、测定模式简介

BioMate 提供多种测量模式，用户应根据实验目的选择合适程序。

掌握不同模式的适用条件是正确测定的前提。

四、通用测定流程

4.1 准备样品与空白

1. 空白液：使用与样品相同溶剂或缓冲液；若含添加剂（盐、缓冲盐、试剂），空白中需完全一致。

2. 样品液：浓度应在仪器线性范围内（吸光度一般 0.1–1.5）。必要时稀释。

3. 样品池清洁：每次使用后以去离子水冲洗，再用乙醇擦拭干燥。

4. 排除气泡：加样后轻敲或用移液器吸排数次，防止气泡影响透射。

4.2 校零与空白测定

1. 在仪器主菜单选择测定模式（如“Abs”）。

2. 将空白液装入比色皿，放入参比位或样品位。

3. 关闭样品舱盖，点击“Blank”或“Set Zero”。

4. 屏幕显示“Blank Done”或吸光度 A=0.000，即完成空白校正。

4.3 样品测定

1. 取出空白池，放入样品池。

2. 输入或确认目标波长（如 260 nm、280 nm、600 nm 等）。

3. 点击“Measure Sample”或“Read”。

4. 仪器显示吸光度、透射率或浓度结果。

5. 若有多样品，逐一测定并记录。

4.4 结果保存与导出

• 测定后可选择“Save”将数据存入内部存储或 USB。

• 亦可打印或导出为 CSV 文件，方便后续分析。

五、核酸样品测定步骤

5.1 测定原理

核酸在 260 nm 波长吸收最强，利用吸光度可计算浓度并评估纯度。
BioMate 提供 DNA、RNA、寡核苷酸模式，可自动完成 260/280 比值运算。

5.2 操作流程

1. 选择“BioTest → DNA/RNA”测定模式。

2. 用纯水或 TE 缓冲液装入空白池，执行空白校正。

3. 将样品置入池中，确保液面平稳。

4. 仪器自动测 260、280、230 nm 吸光度并显示结果。

5. 屏幕输出浓度、A260/A280、A260/A230 三项指标。

6. 若需保存数据，点击“Save”或“Print”。

5.3 注意事项

• A260/A280≈1.8（DNA）或 2.0（RNA）表示纯度良好。

• 若 A260>1.5，建议稀释重测以保证线性。

• 池材质应为石英，以确保紫外透光。

六、蛋白质样品测定步骤

6.1 直接紫外法

1. 选择“Protein A280”模式。

2. 用相应缓冲液作空白。

3. 测量样品吸光度，仪器根据吸收系数计算浓度。

4. 若未知系数，可输入经验值（一般 1 mg/mL ≈ 1 A280）。

6.2 比色法（Bradford、BCA、Lowry）

1. 在试管或孔板中制备一系列标准浓度蛋白溶液。

2. 加入比色试剂，混匀后反应（保持温度与时间一致）。

3. 以空白样品校零。

4. 依次测量标准组和未知样组吸光度（一般波长 595 nm 或 562 nm）。

5. 仪器自动生成标准曲线，并计算未知样浓度。

6.3 校验

• 检查 R² 值，线性应大于 0.995。

• 若超出曲线范围，稀释样品重新测定。

七、细胞生长曲线与 OD 测定

7.1 原理

OD600（或特定波长）用于反映细胞悬液的浊度，与细胞密度成正比。

7.2 操作步骤

1. 选择“Cell Growth”模式。

2. 以培养基作空白。

3. 将培养样品加入池中，混匀避免沉降。

4. 测定吸光度（OD600）。

5. 若连续监测，定时记录结果绘制生长曲线。

7.3 注意事项

• 测量后及时清洗池，避免残留培养物。

• 对高 OD 样品应稀释至 0.1–1.0 区间。

• 同批样品应使用相同池、相同路径以保持一致性。

八、化学与比色反应测定步骤

8.1 单波长终点法

1. 选择“Abs”或“Concentration”模式。

2. 在设定波长（如 510 nm）处校零。

3. 反应完成后立即测样。

4. 若使用标准曲线，可自动计算未知浓度。

8.2 动力学连续测定

1. 选择“Kinetics”模式。

2. 输入波长、采样间隔与总测定时间。

3. 加样后立即启动“Start”。

4. 仪器自动记录吸光度随时间变化。

5. 结果显示曲线及初始速率（ΔA/min）。

8.3 典型应用

• 酶活性测定（如 NADH 在 340 nm 的变化）。

• 化学反应速率研究。

• 药物降解或配位反应动力学分析。

九、标准曲线测定步骤

9.1 原理

标准曲线通过测定一系列已知浓度标准品的吸光度，建立浓度与吸光度线性关系，用于未知样定量。

9.2 操作步骤

1. 选择“Concentration – Standard Curve”模式。

2. 输入标准样浓度序列（如 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL）。

3. 逐一测定各标准样的吸光度。

4. 仪器自动生成 A–C 曲线，显示方程 A=kC+bA = kC + bA=kC+b。

5. 测定未知样品，自动计算浓度。

6. 检查 R² 值确认线性良好。

9.3 注意事项

• 标准样应新鲜配制并充分混匀。

• 吸光度应分布于 0.1–1.0 之间。

• 若低浓度点偏差大，可适度增加测量次数取平均。

十、光谱扫描测定步骤

10.1 全谱扫描

1. 选择“Scan”模式。

2. 设定起止波长（如 200–800 nm）、步进间隔（1 nm 或更小）。

3. 以空白校零后启动扫描。

4. 仪器绘制吸收曲线并自动标注峰值 λmax。

10.2 差谱与多波长测定

• 选择“Multi-Wavelength”模式。

• 输入多个波长值（如 230、260、280、320 nm）。

• 仪器同时输出各波长吸光度及比值结果。

10.3 数据应用

• 用于确定化合物吸收峰位置。

• 判断样品纯度与结构变化。

• 选择合适波长用于后续定量。

十一、数据记录与结果输出

11.1 数据存储

测定结束后可选择：

• 内部存储：保存至仪器文件夹。

• USB 导出：生成 CSV 或 TXT 格式文件。

• 网络导出：通过以太网或 Wi-Fi 上传。

11.2 打印与报告

若配备打印机，可直接打印报告，内容包括：

• 仪器型号与日期

• 波长与吸光度

• 浓度计算结果

• 比值分析与统计数据

• 操作者签名

11.3 数据审核

核对稀释倍数、波长设置及空白信息；若吸光度异常或负值，需重新校零或更换样品。

十二、质量控制与重复性检测

12.1 校准与验证

• 每周检查波长准确性：使用标准滤光片或校准溶液。

• 每月检测光度线性：测不同吸光度标准液。

• 定期验证基线漂移与噪声水平，确保稳定。

12.2 重复性实验

• 对同一样品重复测定 3–5 次，计算标准偏差。

• RSD ≤ 2% 为良好重复性。

12.3 标准操作记录

记录所有实验条件：温度、池光程、稀释倍数、测定模式、波长、时间等，确保可追溯性。

十三、常见问题及对策

十四、安全与保养要点

1. 测量结束后关闭光源，避免灯泡过度使用。

2. 清洁样品舱，防止液体溅入内部光学系统。

3. 长期不使用时，拔掉电源插头并覆盖防尘罩。

4. 每半年进行一次全面维护，包括光学检查、电子检测及灯源更换。

5. 所有操作人员应接受培训，熟悉各模式操作及安全注意事项。

十五、实例化流程举例

以下以“测定酶促反应速率”为例，说明完整操作步骤：

1. 准备阶段：

• 仪器预热 15 分钟；

• 设定波长 340 nm；

• 使用缓冲液为空白校零。

2. 实验执行：

• 在比色皿中加入反应体系（底物 + 缓冲液 + 酶）；

• 立即放入样品架并启动测量；

• 仪器记录吸光度随时间变化曲线。

3. 结果处理：

• 软件自动计算 ΔA/min；

• 根据摩尔消光系数 ε 换算反应速率；

• 输出图表与数值报告。

此类流程可扩展到其他测定，如 DNA 纯度检测或细胞 OD600 测量，只需更改波长与模式。