质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、引言

分光光度法是一种以光吸收特性为基础的定量分析技术，广泛用于化学、生物学、药学及环境科学等领域。赛默飞（Thermo Fisher Scientific）推出的 BioMate 系列分光光度计，凭借高精度光学系统、灵敏检测器与智能化操作软件，已成为实验室中执行紫外可见光谱分析的标准仪器之一。

本章将详细介绍使用 BioMate 进行实验操作的完整流程，从开机准备、样品测定、光谱分析到数据处理与结果验证，帮助科研人员和技术人员掌握规范、精准的实验操作方法。

二、实验前准备

1. 实验环境要求

为保证测定的准确性，BioMate 应安装在符合以下条件的实验室中：

• 温度：15–30℃，相对湿度低于70%；

• 电源：220 V±10%，接地良好，避免电磁干扰；

• 环境：远离强光、震动及高浓度酸碱气体；

• 台面：坚固、水平、防滑，确保仪器稳定运行。

2. 仪器检查

在每次实验前，应按以下步骤完成仪器自检：

1. 检查电源线和数据接口是否连接牢固；

2. 确认光源状态正常，灯管无异常闪烁；

3. 确认样品舱内部清洁、无灰尘或液体残留；

4. 打开仪器电源，待系统完成自检和光源预热（约15分钟）。

3. 比色皿与样品准备

• 比色皿选择：紫外区分析使用石英比色皿，可见区可使用玻璃或塑料比色皿；

• 清洗方法：用无水乙醇或蒸馏水冲洗后擦干，避免指纹或水珠；

• 样品制备：根据实验要求稀释样品至合适浓度，使吸光度范围处于0.2–1.0 A 之间；

• 空白液：与样品溶剂一致，用于零点校正。

三、仪器开机与系统初始化

1. 启动程序

打开电源后，BioMate 自动执行系统检测，包括光源亮度、波长校准、光路扫描和基线测试。待主界面显示“Ready”或“待机完成”后，方可进行操作。

2. 光源预热

• 氘灯（紫外光源）预热时间：约15–20分钟；

• 钨卤素灯（可见光源）预热时间：约10分钟；
  光源达到稳定状态后，光强波动小于 ±0.5%，可保证吸光度测量的重现性。

3. 软件登录

在触控界面选择操作模式：

• 固定波长测定：单波长吸光度或透过率测试；

• 波长扫描：绘制样品吸收光谱；

• 定量分析：测定浓度或计算标准曲线；

• 时间扫描：用于酶反应或动力学研究。

四、固定波长测定

1. 波长设定

点击“波长设置”输入目标波长（如280 nm或600 nm），仪器自动移动单色器至指定位置，并完成波长校准。

2. 空白校正

将装有空白液的比色皿放入样品槽，点击“设零”或“Blank”，系统自动调节基线并记忆透过率100%或吸光度0。

3. 样品测定

取出空白液比色皿，放入样品比色皿，点击“测量”。仪器显示实时吸光度值。
若进行多样品测量，可启用批量测定功能，自动记录每个样品编号与结果。

4. 结果处理

测定完成后，软件可自动计算平均值、标准偏差及相对误差，并生成表格输出。

五、光谱扫描操作

1. 扫描参数设定

在“波长扫描模式”中，设置：

• 起始波长与终止波长（如190–800 nm）；

• 扫描速度（慢速用于高精度分析，快速用于概览）；

• 步长间隔（0.2–1 nm）；

• 平滑算法（选择“中等平滑”以减少噪声）。

2. 扫描执行

放入样品后点击“开始扫描”，仪器将在设定波长区间内连续采集数据，绘制吸收光谱曲线。

3. 数据分析

扫描完成后，系统自动识别峰值与谷值位置，并计算对应波长与吸光度。用户可在曲线上标注特征峰，用于物质定性分析。

4. 图谱保存与导出

扫描光谱可保存为 .csv 或 .pdf 文件，支持导出至U盘或实验室数据库。

六、定量分析实验

1. 标准曲线建立

将不同浓度的标准溶液分别测定吸光度，软件自动生成吸光度–浓度曲线。系统计算回归方程：

$$A=kC+b$$

并给出相关系数 R² 值。

2. 样品浓度测定

输入未知样品的吸光度值，系统根据回归方程自动计算其浓度。结果可直接显示在屏幕上，并可输出至报告文件。

3. 曲线管理

BioMate 支持多达 20 条标准曲线的保存与调用，适合长期进行相同分析项目。

七、时间扫描实验

1. 应用场景

时间扫描常用于酶活性测定、反应动力学分析或物质降解速率研究。

2. 操作步骤

1. 设定固定波长（如340 nm）；

2. 输入采样间隔与总时间（如每2秒采样，持续300秒）；

3. 启动测量，仪器自动记录吸光度随时间变化；

4. 系统生成A–t曲线并计算反应速率常数。

3. 数据处理

可通过线性或非线性拟合分析反应规律，软件自动计算斜率及速率常数。

八、样品测量的注意事项

1. 比色皿方向统一：所有比色皿应保持相同方向放置，避免光程差异。

2. 样品澄清透明：若存在悬浮颗粒，应先离心或过滤。

3. 样品体积适中：确保液面高于光路中心线；不足可能导致信号偏低。

4. 温度控制：若反应对温度敏感，可选用配套恒温比色池。

5. 定期校正：使用标准滤光片或标准溶液定期验证波长与吸光度准确性。

九、数据保存与报告生成

1. 数据存储

实验数据可自动保存在内部存储器中，用户可命名文件并添加备注。

2. 数据导出

通过USB、以太网或Wi-Fi导出数据至计算机，可选择Excel、PDF或图像格式。

3. 报告输出

系统可自动生成实验报告，包含：

• 实验参数与模式；

• 样品信息与编号；

• 吸光度与浓度结果；

• 光谱图与统计数据；

• 实验人员与时间。

十、常见误差来源与控制方法

十一、实验后操作与仪器维护

1. 实验结束后的关机流程

1. 完成所有测定后，先退出软件主界面；

2. 关闭光源，让风扇继续运行3分钟以散热；

3. 最后关闭电源开关并拔下插头。

2. 清洁与保养

• 擦拭样品舱内部，清除液体残留；

• 比色皿用蒸馏水冲洗干净并晾干；

• 外壳用干布擦拭，避免使用腐蚀性清洁剂。

3. 定期维护

十二、典型实验应用举例

1. 核酸浓度与纯度测定

使用260 nm与280 nm双波长测量核酸溶液，系统自动计算260/280比值以判断纯度。

2. 蛋白质含量测定

采用Lowry法或Bradford法，在特定波长下测定吸光度，通过标准曲线计算蛋白质浓度。

3. 药物成分定量

测定药品溶液特征吸收峰处吸光度，利用标准曲线法确定含量。

4. 环境样品分析

检测水体中COD、氨氮或重金属离子浓度，应用比色法结合多波长分析功能实现快速测定。

十三、安全操作注意事项

1. 禁止在光源未冷却时打开光学舱盖；

2. 严禁液体溅入仪器内部；

3. 操作时避免直视光源，防止紫外线灼伤；

4. 断电前应先关闭光源，防止电流冲击；

5. 若出现异常噪音、气味或电流不稳，应立即停机并联系维修人员。

十四、结果验证与质量控制

1. 标准物质验证

定期使用标准溶液（如重铬酸钾溶液）验证仪器准确度。吸光度误差应在 ±0.005 A 以内。

2. 重复性测试

连续测定同一样品五次，相对标准偏差应小于0.3%，表明仪器性能稳定。

3. 长期漂移评估

在连续运行2小时后测量同一样品，其吸光度变化不超过 ±0.002 A，即可视为长期稳定。