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赛默飞分光光度计BioMate操作步骤

赛默飞(Thermo Fisher Scientific)BioMate 系列分光光度计是一类高精度紫外-可见光(UV-Vis)分析仪器,广泛应用于分子生物学、化学分析、环境监测、药物检测等领域。该设备通过测定样品对特定波长光的吸收程度,推算出物质浓度、纯度或反应动力学等信息。

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一、设备概述

赛默飞Thermo Fisher Scientific)BioMate 系列分光光度计是一类高精度紫外-可见光(UV-Vis)分析仪器,广泛应用于分子生物学、化学分析、环境监测、药物检测等领域。该设备通过测定样品对特定波长光的吸收程度,推算出物质浓度、纯度或反应动力学等信息。

BioMate 分光光度计具有光源稳定、检测范围宽、操作简便、支持多种检测模式(如DNA/RNA浓度测定、蛋白质分析、动力学测定等)等优点,适合科研实验室及教学用途。


二、仪器主要组成与功能简介

  1. 光学系统

    • 光源一般包括氘灯(用于UV区)和钨灯(用于可见光区)。

    • 光经单色器分离后以特定波长照射样品。

    • 检测器(如硅光二极管)将透射光信号转换为电信号,用于吸光度计算。

  2. 样品室与比色皿

    • 样品仓可容纳标准1cm光程的石英或塑料比色皿。

    • BioMate 配备自动识别样品位置及温控功能(部分型号)。

  3. 控制界面

    • 彩色触摸屏,内置多种测定程序。

    • 支持USB数据导出、网络传输及外接打印机。

  4. 软件功能

    • 自动波长扫描、时间扫描、浓度计算、DNA/蛋白质浓度换算等。

    • 可保存标准曲线及实验方法,便于重复实验。


三、操作前准备

  1. 环境条件

    • 放置在干燥、无尘、避免阳光直射的实验台上。

    • 室温保持20–25°C,相对湿度不超过70%。

  2. 设备检查

    • 检查电源线及数据线连接是否牢固。

    • 确保比色皿清洁透明,无气泡或划痕。

    • 光源工作正常(氘灯和钨灯指示灯亮)。

  3. 预热

    • 开机后预热10–20分钟,待光源稳定。

    • 进入主界面前系统会自动进行自检和波长校准。


四、基本操作步骤

1. 开机与初始化

  • 打开电源开关,等待自检完成。

  • 屏幕显示主菜单后,选择所需模式(如“波长扫描”“定点测量”“DNA/RNA分析”等)。

  • 若为首次使用,可在“设置”中调整语言、单位、数据保存格式等参数。

2. 空白校准

空白校准是测量前的关键步骤,用于扣除溶剂或比色皿自身吸光。

  • 取空白溶液(通常为缓冲液或蒸馏水),注入比色皿。

  • 将比色皿放入样品室指定位置。

  • 关闭样品盖后,点击“空白”或“Blank”键进行校准。

  • 仪器自动记录透射率并设为基准值。

3. 样品测定

  • 用移液枪吸取样品溶液,装入干净比色皿中。

  • 确保比色皿外壁无液滴或指纹,可用无绒纸擦拭。

  • 放入样品仓,关闭盖子。

  • 在界面选择测定模式:

    • 单波长模式:输入测量波长(如260nm、280nm)。

    • 扫描模式:设定起止波长与扫描间隔。

    • 动力学模式:设定时间间隔与测定周期。

  • 点击“测量”键开始测试。

4. 读取与保存数据

  • 测量完成后,屏幕显示吸光度(A)、透过率(T)或浓度(C)。

  • 可选择保存、打印或导出结果。

  • 若使用标准曲线法,系统自动计算样品浓度。


五、常用测定模式操作详解

1. 波长扫描模式

用于分析化合物的光谱特征。

  • 设置起始波长与终止波长(如200–800 nm)。

  • 设定扫描速度(Slow/Medium/Fast)。

  • 插入样品比色皿并执行空白校准。

  • 点击“开始扫描”,系统绘制吸收光谱曲线。

  • 可在图上标注峰值波长并输出数据。

2. 浓度测定模式

通过标准曲线求得未知样品浓度。

  • 测定一组标准溶液的吸光度,建立浓度—吸光度线性关系。

  • 保存曲线后,输入未知样品吸光度,仪器自动计算浓度。

  • 适用于离子、金属离子或染料类溶液定量分析

3. DNA/RNA浓度测定

BioMate 内置核酸分析程序,常用于检测样品纯度。

  • 测量波长:260nm 与 280nm。

  • 系统自动计算 A260/A280 比值,用于判断纯度。

    • A260/A280 ≈ 1.8 表示 DNA 纯度较高;

    • A260/A280 ≈ 2.0 表示 RNA 较纯。

  • 可显示浓度(ng/μL)并保存结果。

4. 蛋白质测定模式

常见方法包括 Bradford、Lowry 或 Biuret 法。

  • 选择对应测定程序。

  • 通过标准品建立吸光曲线。

  • 系统自动计算样品浓度并生成报告。

5. 动力学测定模式

用于研究反应速率或酶活性。

  • 设定波长与采样时间间隔。

  • 仪器连续记录吸光度变化并绘制曲线。

  • 可自动计算反应速率(ΔA/min)。


六、结果导出与打印

  • 结果可直接保存至USB或内存中,文件格式常为.csv.txt

  • 连接打印机可输出测定报告及光谱图。

  • 在PC端使用Thermo Scientific INSIGHT或VISION软件进行数据分析与归档。


七、维护与保养

  1. 比色皿清洗

    • 使用蒸馏水或无离子水冲洗后晾干。

    • 避免使用强酸、强碱清洗剂。

  2. 光源维护

    • 若灯光闪烁或能量下降,应及时更换氘灯或钨灯。

    • 替换后进行光路校准。

  3. 仪器清洁

    • 定期擦拭外壳,避免液体渗入内部。

    • 样品舱保持干燥,防止霉变或腐蚀。

  4. 软件更新与备份

    • 定期更新系统程序,确保兼容性。

    • 实验数据及时导出保存,防止丢失。


八、常见故障与排查

问题现象可能原因解决方法
吸光度不稳定比色皿有污渍或气泡清洁比色皿,重新装样
无法校零空白溶液选择错误使用正确缓冲液重新校准
光谱偏移光源老化或波长校准误差更换光源并重新校正
屏幕无显示电源接触不良或主板异常检查电源连接,联系售后
数据异常未完成空白校准重新进行Blank设置

九、安全与注意事项

  • 操作时避免用手直接触摸比色皿透光面。

  • 不得用有机溶剂擦拭显示屏或塑料外壳。

  • 禁止在开盖状态下更换光源。

  • 使用后应关闭电源并盖好防尘罩。


十、附录:使用建议与优化技巧

  1. 比色皿一致性
    同批实验尽量使用同类型、同厂家比色皿,避免因透光率差异造成误差。

  2. 样品体积与浓度控制
    样品体积一般为1 mL 左右,过高浓度需稀释后测量。

  3. 波长选择原则

    • 分析峰吸收最强处的波长(λmax)。

    • 进行多组分分析时,应选择干扰最小的波长。

  4. 重复测定与均值计算
    每个样品至少测定2–3次,取平均值作为最终结果,以提高准确性。

  5. 温度控制
    若实验对温度敏感,可配合恒温比色皿或水浴系统,确保测定条件一致。