质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

Invitrogen Countess 3 FL 自动细胞计数仪是赛默飞公司推出的第三代智能化细胞分析系统，结合了明场成像与多通道荧光检测技术，可实现快速、精确的细胞计数、活性分析与荧光标记检测。
该设备采用高分辨率CMOS成像、LED光源与智能识别算法，具有操作简便、检测速度快、数据输出多样化等优点，适用于细胞培养、药物筛选、转染实验及免疫研究等多种生物学领域。

本操作指南详细介绍从开机准备到结果导出的全流程规范，帮助科研人员高效、安全地使用该仪器，确保获得准确、可重复的检测结果。

二、操作前准备

1. 环境要求

• 操作温度：20°C–25°C（推荐）

• 相对湿度：30%–70%

• 避免阳光直射、强风或震动环境

• 仪器应放置在稳固、水平的实验台上，保持通风良好

2. 电源与设备检查

• 确认电源为220V ±10%，并配有稳压保护装置

• 检查仪器电源线、USB接口、网口是否连接牢固

• 确保样品槽、透镜及外壳表面无尘污

• 开机前应让仪器在实验室环境中静置10分钟，以防温差造成光学结露

3. 耗材与试剂准备

• 一次性细胞计数芯片（Countess Cell Counting Chamber Slide）

• 专用移液枪与无菌枪头

• 染色试剂（如Trypan Blue、Calcein-AM/PI、GFP荧光样品等）

• PBS缓冲液或培养基
  所有耗材需洁净无污染，避免交叉使用

三、仪器启动

1. 按下仪器侧面电源键，等待系统自检完成

2. 屏幕亮起后进入主界面（Main Menu），系统自动检测光源与摄像模块状态

3. 若出现提示“System Ready”，说明仪器可正常使用

4. 若显示“Calibration Required”或“Focus Error”，应执行自动校准（System Calibration）

四、软件界面介绍

Countess 3 FL配备7英寸高清触控屏，主界面包括以下功能模块：

• Count：细胞计数模式入口

• Fluorescence：荧光检测模式

• Saved Results：历史结果与数据管理

• Settings：系统设置与用户配置

• Maintenance：校准与系统诊断

• Export：数据导出与报告生成

触控操作灵敏，可通过滑动、点击完成所有设定；屏幕左上角显示当前检测模式与温度状态。

五、样品制备

样品制备是影响检测精度的重要步骤。

1. 样品浓度控制

推荐检测浓度为 1×10⁵–1×10⁷ cells/mL。
若浓度过高，应使用PBS稀释；过低则可适当离心浓缩。

2. 染色步骤（以台盼蓝为例）

1. 取10 µL细胞悬液加入等体积0.4% Trypan Blue溶液；

2. 混匀后静置2分钟，使死细胞充分染色；

3. 使用移液枪取10 µL混合液加载到计数芯片的检测腔中。

对于荧光检测，可根据染料特性调整染色时间和比例，如使用Calcein-AM/PI时推荐5–10分钟反应。

3. 样品均匀性

在加载前应轻轻颠倒混匀，确保细胞均匀分布；避免气泡或沉降影响图像识别。

六、样品加载

1. 打开计数芯片包装，确认清洁无刮痕

2. 使用移液枪在芯片入口加入10 µL样品

3. 确保样品沿毛细通道自动填充，不可用力压入

4. 避免产生气泡或溢出；若有气泡，应重新制备样品

5. 插入芯片至仪器样品舱底部，听到轻微“咔”声即表示放置到位

七、模式选择与设置

1. 明场计数模式（Bright Field）

• 点击主界面“Count”

• 选择样品类型（Suspension / Adherent）

• 设置检测参数（如对比度、细胞直径范围、聚团分割选项）

• 点击“Focus”启动自动聚焦

2. 荧光检测模式（Fluorescence）

• 点击“Fluorescence”

• 选择所需通道（Blue / Green / Red）

• 根据染料类型调整曝光时间与增益（系统默认自动优化）

• 可勾选“Overlay”选项以显示明场+荧光叠加图像

3. 双模式检测

Countess 3 FL支持明场与荧光同步采集。
在同一样品下，系统会自动完成两次成像并生成综合分析报告。

八、自动聚焦与图像采集

1. 自动聚焦

仪器内置快速聚焦算法，用户点击“Auto Focus”后系统会在2秒内完成焦点定位。
若样品较稀或光照过强，可使用“Manual Fine Tune”进行微调。

2. 成像与识别

聚焦完成后点击“Capture”，系统将自动采集图像并启动智能识别：

• 识别细胞边界与数量

• 区分活细胞与死细胞

• 计算平均直径与分布曲线

• 生成直方图与统计数据

3. 检测时间

单样品检测约需8–12秒，荧光模式略延长至12–15秒。

九、结果查看与分析

检测完成后，屏幕自动显示以下信息：

• 总细胞数（Total Cells/mL）

• 活细胞数（Viable Cells/mL）

• 死细胞数（Non-viable Cells/mL）

• 活性百分比（Viability %）

• 平均直径与分布范围

• 荧光阳性比例（若开启荧光模式）

用户可通过点击“Graph”查看细胞直径分布直方图或荧光强度曲线。

结果验证

若结果异常（如细胞数过高或活性过低），应重新检查样品混匀状态与芯片是否充满。

十、数据保存与导出

1. 数据保存

检测结束后点击“Save Result”：

• 输入样品名称、操作者、日期与备注；

• 系统自动保存至内置存储器（128 GB SSD）。

2. 数据导出

在“Export”菜单中可选择导出格式：

• PDF：完整报告，含图像与图表

• CSV/XLSX：原始数据格式，便于统计分析

• TIFF/JPEG：图像文件，用于论文或记录

3. 导出路径

支持以下方式：

• USB外接存储设备

• 局域网（LAN）共享

• Thermo Fisher Connect 云端同步

数据导出速度约80 MB/s，可在3秒内完成报告输出。

十一、校准与性能检查

1. 自动校准

每次开机后仪器自动执行光源与传感器校准。
若检测过程中出现“Calibration Required”提示，可手动进入“Maintenance → Calibration”执行。

2. 荧光通道校准

建议每半年使用标准荧光微球进行通道验证：

• 插入标准样品

• 启动“Fluorescence Calibration”程序

• 系统自动调整曝光时间与通道增益，确保信号一致性

3. 聚焦精度验证

可使用标准细胞样本检测，检查成像清晰度与焦点准确性。

十二、清洁与关机

1. 清洁流程

• 取出芯片并丢弃至生物废物容器

• 用无尘布蘸70%乙醇擦拭样品舱

• 不可使用丙酮、氨水等腐蚀性清洁剂

• 擦拭触控屏与外壳，保持干燥洁净

2. 关机步骤

1. 点击主界面右上角“Power Off”；

2. 系统提示“Shutting Down”，完成数据保存后自动断电；

3. 关闭电源按钮，拔下插头（如长时间不使用）。

3. 每日维护建议

• 清洁光学窗口与芯片槽

• 检查通风口是否堵塞

• 记录当天使用情况与维护状态

十三、操作安全要点

1. 避免在仪器运行时拔插USB或网络连接；

2. 不得将液体直接滴入仪器内部；

3. 使用官方认证的计数芯片和试剂；

4. 处理荧光样品时佩戴防护手套，避免荧光染料接触皮肤；

5. 若仪器出现高温警告或异常声音，应立即停止操作并联系技术支持。

十四、常见问题与解决方案

十五、使用技巧与效率提升

1. 批量检测模式：
   可连续检测多个样品，系统自动编号并保存，适合高通量实验。

2. 快速模板设置：
   在“Settings → Preset Templates”中可预设常用参数，一键加载。

3. 荧光叠加分析：
   启用“Overlay”功能可在明场与荧光图像上进行信号共定位分析。

4. 自动报告生成：
   检测完成后系统自动生成完整实验报告，减少人工统计时间。

5. 云端同步功能：
   启用Thermo Fisher Connect后可直接上传结果，便于团队共享。

十六、维护周期与管理建议

所有维护记录应登记在《仪器使用与维护日志》中，以便追溯与质量管理。

十七、操作注意事项

• 仪器运行时禁止震动或移动；

• 不可在极端温湿度环境下使用；

• 检测结束后应立即移除芯片，防止样品干固；

• 若长时间不使用，应关闭电源并加盖防尘罩；

• 软件更新后需重新校准光源与传感器；

• 操作过程中保持双手清洁干燥，避免触控屏误触。