质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

在使用 赛默飞细胞计数仪 Invitrogen Countess 3 Automated Cell Counter 进行检测时，样品加载（Sample Loading）是影响检测准确性与重复性的重要环节。
虽然仪器配备了高精度光学系统与智能算法，但若样品加载不规范，可能造成图像模糊、气泡干扰、细胞分布不均或检测误差。因此，掌握标准化的样品加载流程，是确保数据可靠的关键步骤。

Countess 3 的设计理念强调“即插即测”，通过合理的样品制备与正确的加载方式，可以在数十秒内完成一次完整的检测。本文将从加载原理、计数板类型、加样流程、注意事项到质量控制等方面，对样品加载进行全面讲解。

二、样品加载的基本原理

Countess 3 采用光学成像法进行自动计数，仪器通过显微镜镜头捕捉计数板中细胞图像并利用算法分析细胞特征。
样品加载的目的，是在计数板内形成厚度均一、细胞均匀分布的检测层，使光线通过时能够稳定成像。

加载过程中必须保证：

1. 样品层厚度一致，不产生液体梯度；

2. 样品完全填充检测腔，无气泡；

3. 细胞在检测区域分布均匀，避免聚集或空白区域。

正确的样品加载不仅保证图像质量，也能减少重复操作时间，提高结果精度与实验效率。

三、计数板类型与结构

Countess 3 支持两种计数板形式：

1. 一次性计数板（Disposable Slide）

• 材质：光学级塑料或玻璃复合结构；

• 特点：预制检测腔，使用后可直接弃置，避免交叉污染；

• 优势：操作简便，适用于生物安全要求较高的实验。

2. 可重复使用计数板（Reusable Slide）

• 材质：高透明玻璃板，带有硅胶密封垫；

• 特点：可清洗重复使用，成本低；

• 要求：使用前需彻底清洁并干燥，防止残留液影响检测。

两种计数板的检测腔厚度均约为 100 µm，可容纳 10 µL 样品。根据实验需求选择合适类型，是保证操作效率与数据准确的前提。

四、样品预处理与准备

在正式加载样品前，应确保样品质量符合检测标准。

1. 样品混匀

细胞在悬液中易沉降，导致浓度不均。
检测前应轻轻颠倒或使用低速涡旋混匀，使细胞均匀分布。

2. 样品稀释

确保浓度在 1×10⁴ – 1×10⁷ cells/mL 范围内。
若浓度过高，可使用 PBS 或培养基稀释；浓度过低则可能导致统计意义不足。

3. 染色准备

若需要区分活细胞与死细胞，应使用 0.4% 台盼蓝（Trypan Blue） 按 1:1 比例混合样品。静置 2 分钟后进行加载。

4. 环境要求

• 操作温度 20–25 ℃；

• 避免气流干扰与强光直射；

• 加样时保持平台水平。

五、标准样品加载步骤

以下为 Countess 3 推荐的标准操作流程：

步骤 1：准备计数板

• 取出计数板，放置于洁净操作台上；

• 检查表面是否有灰尘或液滴；

• 若使用可重复计数板，应用无菌水清洗并擦干。

步骤 2：取样

• 使用移液器吸取 10 µL 样品；

• 轻轻按压吸头顶端，避免产生气泡；

• 若样品含染料，确保混合均匀后立即取样。

步骤 3：加载样品

• 将样品缓慢滴入计数板的进样孔；

• 样品应沿计数板自动扩散，直至检测腔完全充满；

• 若使用一次性计数板，轻轻合上上盖，使液体均匀分布；

• 若为可重复使用板，注意避免过量样品溢出。

步骤 4：检查样品状态

• 观察计数板中是否存在气泡或空白区域；

• 若出现气泡，可用移液枪重新吸取后加载；

• 确认液体铺展均匀后再放入仪器。

步骤 5：放置计数板

• 打开仪器样品仓，将计数板平放在插槽中；

• 向内推入直至卡槽固定；

• 关闭样品仓门，避免外部光干扰。

步骤 6：启动检测

• 在仪器界面选择检测模式；

• 启动自动对焦与分析程序；

• 检测过程通常在 20–30 秒内完成。

六、加载质量判断标准

优质样品加载应符合以下标准：

1. 检测区域完全填充，无气泡、无干扰；

2. 细胞在视野中分布均匀，边缘与中心密度接近；

3. 成像清晰，背景平滑，无明显亮斑或阴影。

若加载不当，常见异常表现如下：

七、不同类型样品加载技巧

1. 贴壁细胞

需先经胰酶消化并离心重悬。

• 消化时间应充分，确保细胞分离；

• 重悬后混匀再取样，防止团聚影响计数。

2. 悬浮细胞

直接取样即可，但需注意混匀。
若细胞密度高，可先行稀释；若细胞较小（如淋巴细胞），建议在软件中调整直径范围。

3. 酵母与真菌孢子

这类细胞颗粒小、光学对比度低，应降低光源亮度以增强成像对比。
必要时可进行适度染色。

4. 含血细胞或复杂样品

建议先离心去除杂质或血浆，再重悬后检测，以防光学干扰。

八、样品加载中的常见错误

1. 加样过量

样品溢出检测腔会造成厚度不均或污染外壳。
处理方法：立即擦拭溢出液，重新加载。

2. 加样不足

液体未完全填充检测区域，导致部分视野缺失。
处理方法：补加少量样品至检测腔完全充满。

3. 加样速度过快

容易形成气泡并产生湍流，使细胞聚集。
处理方法：控制注入速度，保持稳定推液。

4. 样品沉降

加载前静置时间过长，导致取样不均。
处理方法：检测前立即混匀，操作全程保持连续。

九、计数板清洁与维护

1. 一次性计数板

使用后直接丢弃，避免重复使用。若含生物危害样品，应按照生物安全要求处理。

2. 可重复使用计数板

每次检测后应立即清洁：

• 用无菌蒸馏水冲洗计数腔；

• 再用 70% 乙醇擦拭；

• 用无绒布轻轻擦干；

• 放置于干燥处备用。

计数板若出现划痕、污渍或透光性下降，应及时更换。

十、加载操作的安全规范

1. 操作时佩戴一次性手套，防止污染；

2. 使用独立移液枪，避免交叉样品；

3. 对含潜在风险样品，应在生物安全柜中操作；

4. 若出现溢液或样品泄漏，应立即清理并消毒；

5. 检测结束后关闭样品仓门，保持光学系统清洁。

十一、提高样品加载质量的优化建议

1. 保持恒定操作节奏
   每次加载用时应控制在 10 秒内，避免样品干燥或沉降。

2. 选择合适的计数板类型
   高频实验可使用可重复板以降低成本；生物安全级样品应使用一次性板。

3. 控制样品温度
   高温会导致液体蒸发，低温会影响流动性，保持室温操作最佳。

4. 避免强光干扰
   外部光线可能影响仪器对比度，应保持样品仓关闭状态。

5. 建立标准操作模板
   建议在实验室内部建立 SOP（标准操作程序），统一加样体积、速度与顺序。

十二、加载后检测前的确认步骤

在将计数板放入仪器前，应进行以下确认：

• 检查液体是否完全覆盖检测区域；

• 无明显气泡或杂质；

• 样品腔边缘未有溢液；

• 计数板两面干燥无指纹或液痕；

• 样品名称与编号对应正确。

这些细节可有效防止检测错误或样品混淆。

十三、样品加载失败的排查流程

通过规范排查，可以快速定位并解决问题，减少重复检测。

十四、批量加载与高通量检测

对于需要检测多组样品的实验，可采用批量加载策略：

1. 准备多个计数板并编号；

2. 依次加载样品，间隔不超过 2 分钟；

3. 检测顺序与记录编号保持一致；

4. 结果导出时按编号排序归档。

此方法可显著提高检测效率，同时保证数据对应准确。

十五、样品加载在实验流程中的作用

样品加载不仅是实验的起点，更是数据可靠性的保障。
它影响的关键环节包括：

• 光学成像质量；

• 自动识别准确性；

• 活性分析稳定性；

• 实验间可重复性。

规范的样品加载操作能够最大限度发挥 Countess 3 的性能，使实验人员在短时间内获得真实可信的结果。