质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

赛默飞细胞计数仪 Invitrogen Countess 3 Automated Cell Counter 是实验室中常用的自动化细胞计数设备。它以高精度光学系统和智能算法实现快速、可靠的细胞计数和活性分析。
然而，在长期使用过程中，由于样品状态、操作方式、环境条件或软件设置等因素，用户可能会遇到一些常见问题。这些问题若未及时处理，容易导致计数误差、成像异常或系统报错。

本文系统归纳了该设备在 样品制备、检测操作、图像识别、结果分析、软件系统与维护管理 等阶段的常见问题，并提供了科学的排查与解决方案。

二、样品准备相关问题

1. 样品检测结果偏差大

现象：同一样品重复检测结果差异明显。
原因分析：

• 样品混匀不充分，细胞沉降造成分布不均；

• 加样体积不一致；

• 样品浓度过高或过低，导致系统采样统计不足。
  解决方法：

• 检测前轻轻混匀样品；

• 使用移液枪确保加样体积准确（10 µL）；

• 若浓度超出 1×10⁷ cells/mL，应进行 5–10 倍稀释。

2. 细胞聚集或成团

现象：图像中出现明显细胞团，识别结果偏低。
原因分析：

• 胰酶消化不完全；

• 细胞团聚特性强，未充分分散。
  解决方法：

• 延长消化时间或轻轻吹打；

• 可短时使用温和振荡或超声分散处理。

3. 台盼蓝染色不均

现象：图像中出现部分细胞深染，部分细胞未显色。
原因分析：

• 染色比例或混合时间不当；

• 染料失效或放置时间过久。
  解决方法：

• 严格按照 1:1 比例混合细胞与 0.4% 台盼蓝溶液，静置 2 分钟；

• 使用新鲜染料并避光保存。

4. 样品含气泡

现象：图像中出现亮斑或黑环，误识别为细胞。
原因分析：

• 加样时操作过快或计数板未平整。
  解决方法：

• 缓慢注入样品并轻压封闭计数板；

• 检测前轻敲计数板边缘以排气。

三、图像采集与成像质量问题

1. 图像模糊或对焦不清

现象：细胞边缘模糊，识别精度下降。
原因分析：

• 对焦系统未锁定；

• 样品层厚度不均；

• 镜头或窗口表面有污迹。
  解决方法：

• 启动自动对焦功能并确认焦点；

• 更换新的计数板或调整加样量；

• 使用镜头纸和 70% 乙醇清洁光学表面。

2. 图像亮度异常

现象：图像过亮或过暗，导致细胞轮廓不清。
原因分析：

• 光源亮度或曝光时间设置不当；

• 样品背景浑浊。
  解决方法：

• 在“图像设置”中调节亮度 50–70%；

• 清洗样品，保持背景澄清。

3. 图像出现斑点或阴影

现象：背景存在随机黑点或灰区。
原因分析：

• 计数板内残留液滴或灰尘；

• 光学系统污染。
  解决方法：

• 检查并更换计数板；

• 定期维护光路并清除灰尘。

四、识别与分析问题

1. 细胞识别数量偏少

现象：实际视野内细胞明显多于系统识别结果。
原因分析：

• 识别灵敏度过低；

• 细胞直径范围设置不当；

• 细胞染色不均导致算法误判。
  解决方法：

• 在参数设置中提高灵敏度；

• 调整直径范围使其覆盖目标细胞大小；

• 重新染色并混匀样品。

2. 细胞识别数量偏高

现象：系统将杂质或碎片识别为细胞。
原因分析：

• 背景噪声过大；

• 灵敏度过高或背景校正未启用。
  解决方法：

• 启用“背景修正”选项；

• 降低识别灵敏度；

• 清洗样品或更换缓冲液。

3. 活死细胞区分错误

现象：死细胞未被识别或活细胞误判为死细胞。
原因分析：

• 染色时间不均或过长；

• 光线设置导致色差识别异常。
  解决方法：

• 染色后立即检测；

• 调整光源亮度并校正曝光；

• 检查染料纯度。

五、数据与结果问题

1. 浓度异常偏高

现象：检测浓度明显高于实际值。
原因分析：

• 样品稀释倍数未正确输入；

• 重复识别杂质。
  解决方法：

• 在检测界面输入准确稀释倍数；

• 启用“杂质剔除”算法选项。

2. 活性比例异常

现象：系统报告活性比例低于预期。
原因分析：

• 样品放置过久导致部分细胞死亡；

• 染料反应过度。
  解决方法：

• 检测前重新制备新鲜样品；

• 减少染色反应时间。

3. 平均直径波动大

现象：相同样品重复检测直径值差异明显。
原因分析：

• 样品分层或聚集；

• 光学对焦不稳定。
  解决方法：

• 检测前重新混匀；

• 手动微调焦距后再检测。

4. 图像标记错误

现象：识别圈偏移或未覆盖细胞。
原因分析：

• 图像算法缓存异常；

• 参数模板不匹配。
  解决方法：

• 重启仪器并重新选择模板；

• 删除缓存数据后重新检测。

六、软件与系统问题

1. 系统死机或卡顿

现象：检测中界面无响应。
原因分析：

• 内部缓存溢出或外接 USB 设备异常。
  解决方法：

• 拔除外设并重启仪器；

• 定期清理历史记录，避免数据占用过大。

2. 无法保存结果

现象：检测完成后无法保存或提示失败。
原因分析：

• 存储空间不足；

• USB 设备格式不兼容。
  解决方法：

• 删除旧数据或更换新存储设备；

• 使用 FAT32 格式的 USB 驱动器。

3. 无法导出文件

现象：CSV 或 JPEG 文件导出错误。
原因分析：

• 文件名包含非法字符；

• 外部存储设备接触不良。
  解决方法：

• 检查文件名并避免使用特殊符号；

• 重新插入或更换接口。

4. 软件更新失败

现象：升级后系统提示错误。
原因分析：

• 更新文件损坏或版本不匹配。
  解决方法：

• 下载正确版本更新包；

• 使用 USB 更新时确保断电前不拔除设备。

七、硬件维护与环境问题

1. 光源不亮或闪烁

现象：成像区域无光或亮度不稳定。
原因分析：

• LED 模块老化；

• 电源接口松动。
  解决方法：

• 检查电源连接并固定；

• 若持续闪烁，应更换光源组件。

2. 屏幕触控不灵敏

现象：触控无反应或延迟。
原因分析：

• 屏幕表面污迹或静电干扰。
  解决方法：

• 使用干净的无绒布擦拭；

• 避免带电物品靠近屏幕。

3. 风扇噪声过大

现象：运行过程中出现异响。
原因分析：

• 内部灰尘堆积或轴承磨损。
  解决方法：

• 使用压缩空气清理通风口；

• 定期维护或更换风扇。

八、实验误差与结果稳定性

1. 重复性差

现象：同一批次样品结果波动大。
原因分析：

• 样品处理时间间隔过长；

• 不同计数板厚度或批次差异。
  解决方法：

• 使用统一计数板型号；

• 控制检测间隔时间。

2. 背景干扰过强

现象：结果中含大量假阳性点。
原因分析：

• 培养基中残留血清或杂质。
  解决方法：

• 用 PBS 清洗细胞；

• 启用背景校正功能。

3. 长时间检测性能下降

现象：检测速度变慢或识别错误率上升。
原因分析：

• 存储满载导致处理延迟；

• 软件缓存堆积。
  解决方法：

• 定期清理历史数据；

• 重启系统刷新内存。

九、维护与预防建议

1. 日常清洁
   每次使用后清洁计数板与光学窗口，避免盐分或染料残留。

2. 定期校准
   建议每月使用标准样品进行性能验证，确保光学系统与算法精度。

3. 软件更新维护
   保持软件版本最新，以获得更稳定的识别算法与功能优化。

4. 存储管理
   定期导出并清空旧数据，防止空间不足导致系统异常。

5. 环境控制
   保持仪器工作环境温度 20–25 ℃，避免高湿和强光。

6. 操作规范
   严格遵守样品体积、稀释倍数及检测时间要求，建立标准化操作流程。

十、疑难问题深度解析

1. 活性数据长期偏低

长期检测中若活性始终低于预期，应从以下方向排查：

• 检查培养体系 pH 和气体浓度；

• 评估胰酶处理方式是否过度；

• 检查染料是否影响细胞膜通透性。

2. 检测结果重复性高但与显微镜手动计数不符

说明算法识别阈值偏差。可调整直径范围、灵敏度或手动比对样品进行校正。

3. 图像识别滞后

若检测延迟明显，可能因系统缓存占满或 USB 设备读写速度过慢。可拔除外设并清空历史记录。

十一、故障排查流程建议

当仪器出现异常时，推荐按以下顺序排查：

1. 检查样品 —— 是否混匀、浓度合适、无气泡；

2. 检查计数板 —— 是否清洁、平整、无污染；

3. 检查光学系统 —— 是否对焦准确、亮度正常；

4. 检查软件设置 —— 参数模板是否匹配样品；

5. 检查存储状态 —— 是否满载或接口异常；

6. 重启仪器 —— 若问题仍存，联系技术支持。