质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、仪器总体概述

赛默飞细胞计数仪 Invitrogen Countess 3 Automated Cell Counter 是一款高性能明场成像自动细胞计数仪，结合数字光学系统与智能算法，能够实现快速、精确的细胞浓度与活性分析。其参数设置系统灵活，可根据不同细胞类型、样品特征、染色方式和实验需求进行优化。合理设置参数不仅能提高计数准确性，还能增强图像识别效果、减少误判率和重复误差。

Countess 3 的核心理念是“自动化分析+用户可调节优化”。用户可通过触控界面在“参数设置”界面中自定义检测模式、图像采集参数、细胞识别阈值及统计范围，从而在不同实验场景中实现最优性能表现。

二、参数设置界面结构说明

仪器在启动后进入主菜单界面，点击“设置（Settings）”或“参数（Parameters）”即可打开系统配置模块。该模块主要包含以下功能区：

1. 图像采集设置（Image Acquisition）
   控制光源亮度、对焦方式、曝光时间及视野范围。

2. 细胞识别参数（Cell Detection）
   负责细胞大小阈值、识别灵敏度、边缘增强与背景滤波调整。

3. 染色与模式选择（Mode Selection）
   包括普通明场模式与 Trypan Blue 模式，适用于不同实验类型。

4. 统计与计算参数（Analysis Options）
   定义计数区域、结果单位、数据平均方式与输出格式。

5. 系统与用户配置（System Preferences）
   涉及语言设置、屏幕亮度、数据存储路径及单位制。

三、图像采集参数设置详解

图像采集质量直接决定了细胞识别的准确度。以下是关键参数的调整说明：

1. 光源亮度（Illumination Intensity）

光源亮度控制样品曝光程度。过亮可能导致细胞边界模糊，过暗会造成识别失败。
建议：

• 对于透明度高的贴壁细胞，适当提高亮度。

• 对于高密度或染色样品，适度降低亮度以防过曝。
  默认亮度一般设定在 50–70% 区间，可根据图像对比度实时调整。

2. 曝光时间（Exposure Time）

曝光时间影响图像亮度与细节层次。较短曝光适用于高亮样品，较长曝光用于弱信号或染色不均的细胞。
典型设置范围为 5–50 ms。自动模式下系统会根据实时图像自动优化曝光值。

3. 对焦方式（Focus Mode）

Countess 3 提供自动对焦与手动微调两种模式。自动对焦可在 3 秒内完成扫描，确保细胞边界清晰；如样品厚度不均，可通过触控屏上下滑动手动微调焦距。

4. 视野范围（Field of View）

仪器默认采集中心区域图像，但用户可选择单点视野或多点平均视野模式。多点模式能有效减少样品不均匀性造成的偏差。建议在统计学实验中启用多视野采集。

四、细胞识别与分析参数设置

这是仪器核心参数模块，用于定义算法识别标准与计数精度。

1. 细胞直径范围（Cell Size Range）

系统默认检测直径为 4–60 µm。用户可根据细胞类型调整：

• 哺乳动物细胞（如 HEK293、CHO）：8–25 µm

• 淋巴细胞或小型细胞：5–15 µm

• 巨噬细胞或大型细胞：20–40 µm
  若检测范围设定过宽，背景噪点可能被误判为细胞；过窄则可能漏检。

2. 识别灵敏度（Detection Sensitivity）

此参数决定算法对边界、亮度变化的敏感程度。

• 高灵敏度：适合透明、边界模糊的细胞。

• 中灵敏度：常规细胞检测默认模式。

• 低灵敏度：适合密度高或杂质较多样品，减少误检。

3. 边缘增强（Edge Enhancement）

通过图像锐化算法强化细胞边缘线条，提升识别精度。通常设为中等强度（Level 2），避免过度增强导致假阳性。

4. 背景校正（Background Correction）

用于消除非均匀光照或染色造成的背景干扰。系统自动计算背景亮度值并进行平滑补偿，用户可启用“自动背景修正”选项，以提高图像清晰度。

5. 活/死识别模式（Viability Detection）

若使用台盼蓝（Trypan Blue）染色，可启用该选项。系统会基于染色强度及透光差异自动区分活细胞与死细胞，结果显示为蓝色与透明色差异。

五、统计与计算参数设置

1. 结果单位（Units）

可选择 cells/mL 或 ×10⁶ cells/mL，建议根据实验习惯设定统一单位，以便数据对比。

2. 平均计算模式（Averaging Mode）

在多次计数情况下，可选择：

• 单次测量：输出单次检测结果。

• 自动平均：系统自动取多次检测平均值。

• 手动平均：用户选择指定结果计算平均值。

3. 统计区域（Region of Interest, ROI）

用于限定计数范围，避免边缘效应。可选全视野或自定义矩形区域模式。若样品中存在沉积或聚集区域，建议启用 ROI 调整功能。

4. 细胞直径分布图

系统自动生成直方图，展示不同直径范围内细胞数量分布。用户可调整分辨区间宽度（如 2 µm、5 µm）以匹配分析精度。

5. 数据导出格式

支持 CSV（数据）与 JPEG（图像）格式导出。用户可在“导出设置”中定义文件命名规则（样品名+日期+编号），以便批量追踪。

六、系统与用户参数配置

1. 语言与时间格式

仪器支持多语言界面，可根据实验室环境选择中文、英文等。时间格式可选 24 小时制或 12 小时制，用于记录检测时间。

2. 屏幕亮度与休眠时间

屏幕亮度默认 70%，可根据环境光线调整；休眠时间可设置为 5–30 分钟，节约能耗并延长屏幕寿命。

3. 数据存储路径

可设定内部存储或 USB 外部设备。若启用自动保存模式，系统将按照样品名称自动创建文件夹。

4. 安全与权限控制

部分版本支持用户分级管理，可设置操作员与管理员权限，防止误删或参数篡改。

七、参数优化策略与实验建议

1. 根据细胞类型优化尺寸范围
   不同细胞类型应设置相匹配的直径范围。例如 T 细胞通常较小，而肿瘤细胞体积较大，若使用统一标准可能导致误差。

2. 调整灵敏度以适应样品质量
   高密度样品或含碎片的悬液容易引起误判，适度降低灵敏度并启用背景校正能显著提高结果稳定性。

3. 保持计数板厚度一致
   样品层厚度影响焦点和成像质量，应使用相同品牌与批次的计数板。

4. 避免气泡干扰
   加样时操作应平稳，气泡可能被误识别为细胞。

5. 定期校准
   每周用标准细胞悬液或校准样品验证仪器偏差，必要时重设焦距与亮度。

6. 重复测量并取平均值
   对于关键实验，建议至少进行三次独立计数，采用平均值减少偶然误差。

八、示例设置流程

以下为一个典型哺乳动物细胞（CHO）计数实验的参数设置示例：

• 检测模式：Trypan Blue

• 光源亮度：65%

• 曝光时间：15 ms

• 细胞直径范围：8–25 µm

• 灵敏度：中等

• 背景修正：启用

• ROI：全视野

• 结果单位：cells/mL

• 平均方式：自动平均

• 图像保存格式：JPEG

• 数据输出格式：CSV

该设置在大多数哺乳动物细胞检测中可获得高质量图像和稳定结果。

九、参数保存与模板管理

Countess 3 支持多组参数模板保存功能。用户可根据不同实验场景保存预设模板，如“贴壁细胞模式”“血液细胞模式”“酵母检测模式”等，方便快速调用。每个模板包含光学、识别、统计三类参数，调用后可直接进入检测界面，无需重新设置。

在“模板管理”中还可进行：

• 模板复制与重命名

• 模板共享导出至 U 盘

• 默认模板设置与锁定

此功能尤其适合多人员共用实验室，避免设置混乱造成误差。

十、常见错误与设置优化技巧

1. 图像过亮导致识别失败
   解决：降低亮度或缩短曝光时间。

2. 背景噪声影响计数
   解决：启用背景校正或重新制样。

3. 部分细胞未被识别
   解决：扩大直径检测范围或提高灵敏度。

4. 死细胞比例异常
   解决：检查台盼蓝比例与混匀步骤，确保染色充分。

5. 重复性差
   解决：固定参数模板并确保加样体积一致。