一、概述

QuantStudio 3实时荧光定量PCR仪是Thermo Fisher Scientific推出的中通量定量PCR系统，其数据分析与报告生成功能是实验结果可视化与标准化的重要环节。实验报告（Experiment Report）是整个实验过程的总结与结果呈现，包含实验设定、扩增曲线、熔解曲线、标准曲线、Ct值统计、扩增效率、定量结果与实验结论。

一份完整的QuantStudio 3实验报告不仅反映仪器检测性能与样品质量，也体现实验设计的科学性与数据分析的严谨性。报告可导出为PDF、Excel或CSV格式，用于科研发表、质量监控及临床检测备案。

二、报告的组成结构

QuantStudio 3实验报告由系统自动生成，主要包括以下七个部分：

1. 实验信息（Experiment Information）

2. 热循环参数（Thermal Cycling Parameters）

3. 扩增曲线（Amplification Plot）

4. 熔解曲线（Melt Curve, 若为SYBR体系）

5. 标准曲线与效率（Standard Curve & Efficiency）

6. Ct值表与定量结果（Ct and Quantification Data）

7. 结果分析与结论（Result Interpretation）

每一部分在报告中都有固定格式与内容字段，可根据实验类型（绝对定量、相对定量、基因分型等）自动调整。

三、实验信息

1. 基本信息

报告首页展示实验名称、创建日期、操作者、仪器型号、软件版本、反应板类型与荧光检测体系（SYBR Green或TaqMan Probe）。

2. 实验类型

QuantStudio 3支持以下实验模式，报告会自动标注：

• Standard Curve Quantification（标准曲线定量）

• Comparative Ct（ΔΔCt相对定量）

• Genotyping（基因分型）

• Presence/Absence（阳性/阴性检测）

• Melt Curve Analysis（熔解曲线分析）

3. 板布局信息

报告中附有样品板示意图（Plate Map），显示每个孔位的样品名、靶基因、通道染料、复制孔信息及对照设置（如NTC、标准品、阳性对照等）。

四、热循环参数

报告自动记录QuantStudio 3的完整程序设置，包括：

• 初始变性温度与时间；

• 循环次数；

• 退火/延伸温度与时间；

• 荧光采集点；

• 熔解曲线范围与升温速率（若适用）。

示例（TaqMan体系）：

mathematica复制编辑Stage 1：95°C 20秒  
Stage 2（40 cycles）：95°C 1秒 → 60°C 20秒（荧光采集）

报告中该部分通常以表格形式显示，并注明是否采用Fast模式或Standard模式。

五、扩增曲线分析

1. 图形呈现

扩增曲线（Amplification Plot）是实验报告的核心图形部分。横轴为循环数，纵轴为荧光强度（ΔRn）。系统自动生成每个样品的实时荧光变化曲线，并以不同颜色区分通道或样品组。

2. 阈值与基线

系统会自动设置基线范围（通常为循环3–15）与阈值线位置。阈值线的交点即为Ct值。用户也可在软件中手动调整阈值，报告中会注明调整方式。

3. 曲线特征判定

• 指数期：曲线开始迅速上升的阶段，代表扩增进入稳定期；

• 平台期：荧光信号达到饱和后趋于平稳；

• 无扩增曲线：说明模板不足或反应失败；

• 异常曲线：可能存在气泡、加样错误或非特异扩增。

报告中附带扩增曲线图、阈值线及每孔Ct值统计表，以评估实验重复性与反应一致性。

六、熔解曲线分析（SYBR Green体系）

当使用SYBR Green染料体系时，报告自动生成熔解曲线（Melt Curve）。

1. 图形展示

• 横轴：温度（°C）；

• 纵轴：荧光导数（–dF/dT）。

2. 主要功能

用于判断扩增产物的特异性。单一尖锐峰表示扩增产物单一；多峰或肩峰提示引物二聚体或非特异扩增。

3. 报告内容

系统会给出熔解峰温度（Tm值），通常在80–90°C范围。不同Tm值产物表示序列差异。

七、标准曲线与扩增效率

1. 适用场景

当实验采用绝对定量方法时，报告将展示标准曲线结果。

2. 数据内容

• 标准模板浓度梯度（10⁷–10¹ copies）；

• Ct值平均值；

• 线性拟合方程（y = kx + b）；

• R²（线性相关系数）；

• 扩增效率（E）。

3. 计算方式

E=(10−1/斜率−1)×100%E = (10^{-1/斜率} - 1) × 100\%E=(10−1/斜率−1)×100%

理想扩增效率为90–110%，R²应≥0.99。

4. 图形与结果

报告中附带标准曲线图（Ct vs. log(拷贝数)）及线性方程，展示系统线性范围与重复性。

八、Ct值与定量数据

1. Ct值定义

Ct（Cycle threshold）为荧光信号首次超过阈值的循环数，反映样品中目标基因的初始模板量。

2. 报告形式

报告列出每个样品在不同通道的Ct值及其平均值、标准差（SD）。

3. 数据筛选

系统自动标记异常孔，如无信号、背景高或Ct超限。可选择剔除无效数据后重新计算均值。

九、定量结果计算

1. 绝对定量

报告自动根据标准曲线计算样品模板拷贝数，输出结果表：

2. 相对定量（ΔΔCt法）

报告计算目标基因相对表达量：

ΔCt=Ct目标基因−Ct内参基因ΔCt = Ct_{目标基因} - Ct_{内参基因}ΔCt=Ct目标基因−Ct内参基因ΔΔCt=ΔCt样品−ΔCt对照ΔΔCt = ΔCt_{样品} - ΔCt_{对照}ΔΔCt=ΔCt样品−ΔCt对照表达倍数=2−ΔΔCt表达倍数 = 2^{-ΔΔCt}表达倍数=2−ΔΔCt

表格示例：

3. 结果图形化

报告自动生成柱状图、散点图或折线图展示表达差异或拷贝数变化，支持导出高分辨率图片用于论文或汇报。

十、基因分型报告（若适用）

1. FAM/VIC双通道检测

基因分型实验报告采用散点图显示不同等位基因分布。

• FAM高、VIC低：AA型；

• FAM低、VIC高：BB型；

• 双通道信号中等：AB型。

2. 结果表

3. 群体分布

报告附有群体分型比例统计图，便于基因多态性分析。

十一、质量控制与误差分析

1. 阴阳性对照检查

报告自动判定对照结果：

• 阳性对照应出现典型扩增曲线；

• 阴性对照（NTC）无信号表示体系无污染。

2. 重复性验证

重复孔Ct值标准差≤0.3为合格；若偏差过大，报告将提示“Repeatability Warning”。

3. 温度与通道校准状态

报告中可附校准记录，包括光学通道均衡性与热循环模块校正时间。

4. 异常样品说明

若部分样品Ct异常、熔解曲线不单一或信号延迟，报告会自动添加警示标识并在备注中说明。

十二、数据导出与格式

QuantStudio 3实验报告可通过以下方式导出：

1. PDF报告：完整呈现实验结果、曲线与图表；

2. Excel/CSV文件：便于后续统计分析；

3. EDS原始文件：供QuantStudio Design & Analysis软件再次编辑与分析；

4. 云端同步：通过Thermo Fisher Cloud在线查看与共享。

导出的PDF报告包含封面、摘要、主要结果、图表和结论，并自动生成页眉页脚与实验签章区域。

十三、报告审查与归档

1. 审查要求

实验报告需由操作者和实验室负责人审核签字，确认数据准确、程序完整、仪器运行正常。

2. 归档标准

• 电子版：保存至指定服务器或云端；

• 纸质版：打印签字后归档保存3年以上；

• 文件命名规则：

  复制编辑日期_项目名称_操作者_QS3.pdf

3. 数据安全

QuantStudio 3报告文件均可设置访问权限，防止误删或篡改。

十四、报告在科研与检测中的应用

1. 科研论文支撑：提供定量结果与图表，可直接用于实验部分。

2. 临床检测备案：可作为分子诊断定量检测的原始记录。

3. 质量控制评估：用于仪器稳定性及试剂批次验证。

4. 教学培训演示：展示扩增曲线、熔解曲线及数据分析过程。

十五、常见问题与解决方法

十六、实验报告质量要求

1. 完整性：包含实验设定、曲线、Ct表格、结论；

2. 一致性：重复孔结果一致，Ct差异≤0.3；

3. 可追溯性：报告注明实验日期、操作者与设备编号；

4. 准确性：标准曲线R²≥0.99，扩增效率90–110%；

5. 规范性：报告格式统一，符合实验室质量体系标准。