荧光定量PCR(qPCR)技术是现代分子生物学、医学检验、食品安全和环境监测中不可或缺的核心技术。博日荧光定量PCR仪FQD-16B作为一款小通量的高性能平台,具有操作简便、数据准确、运行稳定的特点,非常适合科研实验室、教学实验室以及临床检测的多样化应用。
本操作手册旨在为实验人员提供系统性指导,帮助使用者掌握设备的操作方法和维护要点,确保实验数据的科学性和可靠性。
通量:16孔反应模块,适用于小规模实验。
温控范围:4℃–100℃,升降温速率快。
光学检测系统:支持多通道检测,兼容多种常用荧光染料。
界面:触控式操作,配合智能分析软件,简化实验流程。
定量检测:支持绝对定量和相对定量。
熔解曲线分析:检测扩增产物特异性。
自检功能:开机时自动检测温控和光学系统状态。
数据分析:自动生成扩增曲线、Ct值表格及熔解曲线。
确保设备置于稳固台面,避免震动。
环境温度保持在18℃–28℃,湿度35%–70%。
接通电源,确认电压稳定并接地良好。
打开电源开关,等待系统启动并进入主界面。
设备自动执行自检,包括温控模块、光学检测模块、电源稳定性。
自检无异常后,系统进入待机状态,可开始实验设置。
在主界面选择“新建实验”。
输入实验名称、日期及操作者信息,便于后续数据追踪。
预变性阶段:95℃,2–3分钟。
循环阶段(通常30–40个循环):
变性:95℃,10–15秒
退火:50–65℃,20–30秒
延伸:72℃,20–30秒
荧光采集点:根据探针类型选择退火或延伸阶段进行信号采集。
熔解曲线:从60℃逐步升温至95℃,每步0.5℃,实时记录荧光信号。
根据实验染料选择合适的检测通道,例如:
FAM:常用于SYBR Green或TaqMan探针。
HEX/VIC:用于多重检测中的第二目标。
ROX:可作为被动荧光参考。
每孔推荐20µL体系,包括:
Master Mix:10µL
上下游引物:各0.5–1µL
模板DNA/cDNA:1–2µL
荧光染料/探针:按实验方案添加
无核酸水补足体积
使用无酶枪头,避免交叉污染。
保证各孔体积一致。
避免气泡进入反应孔,如有气泡可轻敲或离心消除。
使用光学封板膜或透明管盖,确保密封。
将样品离心,使液体集中孔底。
放入FQD-16B反应模块,保持平整。
确认程序设置与样本信息无误。
点击“运行”,系统自动执行预设循环程序。
实验过程中可实时查看:
各孔扩增曲线
荧光信号强度
温度曲线运行状态
若出现异常,如温控不稳定、光学信号弱,设备会发出提示。此时应暂停或终止实验并检查问题。
标准的“S”型曲线表示扩增成功。
平缓或无明显上升曲线提示扩增失败或模板过少。
系统自动计算Ct值,Ct值越小代表模板浓度越高。
单一尖锐峰:扩增特异性良好。
多个峰:可能存在非特异性扩增或引物二聚体。
绝对定量:通过标准曲线计算拷贝数。
相对定量:采用ΔΔCt方法计算不同样本间的表达差异。
系统自动生成报告,包含:
样本编号与Ct值表
扩增曲线、熔解曲线
PCR效率、R²值
报告可导出为PDF、Excel等格式。
检查反应体系是否正确配置。
确认模板质量与浓度是否合适。
检查加样体积是否准确。
样品保存条件是否导致降解。
检查是否存在气泡。
核实引物设计与反应条件是否优化。
检查封板膜是否透光良好。
清洁光学检测窗口,避免灰尘影响。
实验后清洁反应模块,保持干燥。
定期擦拭外壳,避免灰尘堆积。
避免用手触碰光学窗口。
定期检查并用无尘布清洁。
每半年进行一次温度校准。
确保散热口畅通,避免过热。
定期更新分析软件。
定时备份实验数据。
操作过程中需佩戴实验服和手套,避免污染。
使用无RNAse、无DNAse耗材,减少降解风险。
废弃样品和耗材需按照生物安全规范处理。
设备运行时勿随意开关舱盖,避免光学干扰或温控异常。
博日荧光定量PCR仪FQD-16B凭借其稳定的温控系统、灵敏的光学检测和友好的操作界面,为小通量实验提供了强有力的技术支持。通过规范的操作流程和定期的维护保养,实验人员能够充分发挥该仪器的性能,获得高质量、可重复的实验结果。
FQD-16B不仅适用于基础科研,也广泛应用于临床检测、教学实验和食品安全领域,是一款集精准、稳定和高效于一体的可靠平台。
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