博日 FQD-16A 实时荧光定量 PCR 仪在科研、医学诊断、食品安全、环境监测等多个领域得到广泛应用。实时荧光定量 PCR（qPCR）技术因其高灵敏度、高特异性和高精度，被广泛应用于 基因表达分析、病原体检测、基因突变检测、转基因检测 等方面。FQD-16A 实时荧光定量 PCR 仪结合高效的温控系统和精准的荧光检测系统，为用户提供了可靠的实验支持。
本篇将介绍博日 FQD-16A 在多个实际应用中的成功案例，包括基因表达分析、病原体检测、基因突变检测和转基因检测等，展示 FQD-16A 在各领域的应用价值和技术优势。
基因表达分析是现代分子生物学研究中的重要内容，常用于研究不同环境条件或疾病状态下基因的表达变化。实时荧光定量 PCR（qPCR）因其高灵敏度和精确度，被广泛应用于基因表达定量研究。
本案例通过使用博日 FQD-16A 实时荧光定量 PCR 仪，研究了 某种植物在不同温度下对特定基因表达的响应。
目标基因：植物中的抗逆基因。
内参基因：使用 GAPDH 作为内参基因，以便进行相对定量分析。
样品类型：提取自不同温度处理下的植物叶片样本。
实验方法：使用 ΔΔCt 方法 进行相对定量分析。
| 组分 | 用量 |
|---|---|
| 2× Master Mix | 10 μL |
| 上游引物（10 μM） | 0.4 μL |
| 下游引物（10 μM） | 0.4 μL |
| 模板 DNA | 1–2 μL |
| 无核酸酶水 | 补足至 20 μL |
温度程序设置：
预变性：95℃，3 分钟
循环：95℃，10 秒；60℃，30 秒（采集荧光信号），共 40 次循环
延伸：72℃，30 秒
提取植物叶片中的总 RNA，使用反转录试剂合成 cDNA。
配置 PCR 反应体系，确保每个样本的反应体系准确无误。
在 FQD-16A 上进行 PCR 扩增，设置程序参数，实时监测扩增曲线和熔解曲线。
根据扩增曲线计算 Ct 值，使用 ΔΔCt 方法进行定量分析，比较不同温度处理下基因的相对表达量。
通过 qPCR 实验，FQD-16A 生成了清晰的扩增曲线，所有样品的 Ct 值具有较高的重复性。实验结果表明，在较低温度处理下，抗逆基因的表达量显著增加，与对照组相比表现出更高的表达水平。
标准曲线法：用于验证实验数据的准确性，标准曲线呈现出线性关系，符合预期。
熔解曲线分析：显示出单一的熔解峰，表明扩增产物的特异性良好。
通过该实验，FQD-16A 展现了在基因表达分析中的高效能。若出现非特异性扩增，可以通过优化引物设计、调整退火温度来提高特异性。此外，增加模板浓度和优化反应体系也有助于提高实验的灵敏度和稳定性。
病原体检测是公共卫生领域的重要任务，尤其是针对快速传播的病毒、细菌或真菌等致病微生物的早期检测。实时荧光定量 PCR 技术由于其高灵敏度，已广泛用于病毒载量检测、细菌感染诊断等领域。
本案例展示了博日 FQD-16A 在 新型冠状病毒（SARS-CoV-2） 检测中的应用，通过定量 PCR 检测患者样本中的病毒 RNA。
目标基因：SARS-CoV-2 的 N 基因。
内参基因：使用人类的 GAPDH 基因 作为内参。
样品类型：采集自疑似感染者的咽拭子样本。
实验方法：采用 TaqMan 探针法 进行定量分析。
| 组分 | 用量 |
|---|---|
| 2× Master Mix | 10 μL |
| N 基因引物（10 μM） | 0.4 μL |
| GAPDH 引物（10 μM） | 0.4 μL |
| TaqMan 探针（10 μM） | 0.4 μL |
| 模板 RNA | 1–2 μL |
| 无核酸酶水 | 补足至 20 μL |
温度程序设置：
预变性：95℃，3 分钟
循环：95℃，10 秒；60℃，30 秒，40 次循环
延伸：72℃，30 秒
提取患者样本中的 RNA，使用反转录试剂合成 cDNA。
配置 PCR 反应体系，将样品添加到反应管中。
在 FQD-16A 上设置实验程序，启动 PCR 扩增并实时监测荧光信号。
根据 Ct 值和标准曲线法，定量样本中 SARS-CoV-2 的病毒载量。
实验结果显示 SARS-CoV-2 的 N 基因在患者样本中的表达量显著，大部分患者的 Ct 值低，表明病毒载量较高。通过比较对照组和实验组的 Ct 值，进一步确认了患者样本的病毒感染情况。
标准曲线法：验证了实验数据的准确性，并用标准曲线计算了病毒的拷贝数。
熔解曲线分析：显示所有扩增产物均为单一峰，表明扩增产物特异性良好。
FQD-16A 以其高灵敏度和准确性，成功检测到 SARS-CoV-2 的病毒载量。通过优化引物设计、调整 PCR 条件等方法，能够进一步提高病毒检测的灵敏度。
基因突变检测在遗传学研究、癌症诊断以及药物研发中起着重要作用。通过检测特定基因的突变类型，能够判断疾病的发生与发展机制。本案例展示了博日 FQD-16A 在 KRAS 基因突变检测 中的应用，KRAS 基因突变是癌症研究中的重要标志之一。
目标基因：KRAS 基因的 G12V 突变位点。
内参基因：使用 β-Actin 作为内参基因。
样品类型：癌症患者的外周血样本。
实验方法：采用 定性 PCR 方法，使用突变特异性引物进行检测。
| 组分 | 用量 |
|---|---|
| 2× Master Mix | 10 μL |
| G12V 突变引物（10 μM） | 0.4 μL |
| β-Actin 引物（10 μM） | 0.4 μL |
| 模板 DNA | 1–2 μL |
| 无核酸酶水 | 补足至 20 μL |
温度程序设置：
预变性：95℃，3 分钟
循环：95℃，10 秒；60℃，30 秒，40 次循环
提取患者外周血中的 DNA。
配置 PCR 反应体系，确保所有试剂的准确配比。
在 FQD-16A 上启动 PCR 扩增，实时监测扩增曲线。
根据扩增曲线判断样本中是否存在 KRAS G12V 突变。
通过扩增曲线和熔解曲线的分析，成功检测到了 KRAS G12V 突变的患者样本。对照组中无突变的样本未显示任何扩增信号，而突变样本的扩增曲线明显早于对照组，表明突变基因的浓度较高。
熔解曲线分析：突变样本显示了特异性的熔解峰，而对照组无显著峰值。
FQD-16A 能够快速、准确地检测到 KRAS 基因的突变。优化引物设计、提高 PCR 反应的特异性是提高实验准确性的关键。
博日 FQD-16A 实时荧光定量 PCR 仪在多个领域的成功应用展示了其强大的检测能力。从基因表达分析到病原体检测、基因突变分析，FQD-16A 提供了可靠的技术支持。通过不断优化实验设计、反应条件和数据分析方法，用户能够充分发挥该设备的性能，获得准确、可靠的实验数据。
黑马仪器网 浙江栢塑信息技术有限公司
