博日（Bioer）FQD-16A 实时荧光定量 PCR 仪是一款基于荧光定量技术的小型高效设备，适用于分子生物学实验室、医学检测机构、科研单位等场景。该型号具备 16 孔位设计，体积小巧，操作简便，能够进行核酸扩增和实时荧光信号采集，并结合配套软件实现数据处理与结果输出。其核心优势包括：升降温速率快、温度均一性好、荧光检测灵敏度高，能够兼顾科研与应用检测需求。
在使用 FQD-16A 前，需要先做好实验环境与样品准备。
实验环境要求
实验室应保持空气洁净，无明显粉尘和腐蚀性气体。
环境温度一般控制在 18–30℃，湿度 30–75%。
应避免仪器直接暴露在阳光下，远离强磁场和震动源。
样品准备
核酸提取需在分子生物学基础实验平台完成，可使用商业化提取试剂盒。
提取后的核酸需确认纯度，A260/280 在 1.8–2.0 之间为宜。
样品应短期存放于 4℃，长期需置于 -20℃ 或 -80℃ 保存。
试剂与耗材
荧光定量 PCR 试剂（如 SYBR Green 或探针法试剂）。
高纯度去离子水。
八联管或单管耗材（需适配 FQD-16A 型号）。
无 RNA/DNA 酶污染的枪头、移液器。
荧光定量 PCR 实验体系的合理设计直接影响结果的可靠性。以常见的 SYBR Green 体系为例：
体系总体积：20 μL
反应组分：
2× Master Mix：10 μL
上游引物（10 μM）：0.4 μL
下游引物（10 μM）：0.4 μL
模板 DNA：1–2 μL
ddH2O 补足至 20 μL
注意事项：
体系配置需在冰上操作，减少酶失活与非特异性扩增。
每次实验需设置阴性对照（NTC），必要时添加阳性对照，便于结果对比。
体系配置结束后应轻轻混匀并瞬时离心，避免气泡影响荧光采集。
开机与软件启动
接通电源，打开 FQD-16A 主机电源。
在计算机中启动配套软件，确认设备与电脑通信正常。
样品上机
打开仪器加热模块盖板。
将 PCR 管按孔位顺序放入反应模块中，确保接触良好。
关闭盖板，避免异物夹入。
程序设定
95℃ 预变性 3 min
95℃ 变性 10 s
60℃ 退火/延伸 30 s，荧光采集，循环 40 次
在软件界面新建实验文件。
输入扩增反应的程序参数，例如：
若需溶解曲线，则在扩增完成后设定 65–95℃ 梯度升温，每步 0.5℃ 并采集荧光。
检测通道选择
FQD-16A 支持多色荧光通道，用户根据试剂选择对应的检测通道。
常见 SYBR Green 通道为 FAM，探针法可用 FAM/HEX/ROX 等。
实验运行
参数设置完毕后保存实验方案。
点击运行，仪器开始升温、扩增及实时荧光检测。
扩增曲线
软件会自动绘制荧光信号随循环数变化的曲线。
正常阳性样品应出现典型“S 型”扩增曲线，阈值线交点即为 Ct 值。
溶解曲线
对于 SYBR Green 法，可通过溶解曲线判定扩增特异性。
单一尖锐峰表明产物单一，多峰提示引物二聚体或非特异性扩增。
定量结果
根据标准曲线可计算样品初始模板量。
ΔCt 或 ΔΔCt 方法可用于相对定量分析。
数据导出
分析完成后，可将实验结果导出为 Excel、PDF 或图片格式，便于归档和发表。
无扩增信号
检查模板是否加入，酶或引物是否失活。
核对程序设置是否正确。
曲线拖尾或平台不明显
可能为模板浓度过高或抑制剂存在。
适当稀释样品，或优化反应体系。
多峰或异常溶解曲线
引物设计不合理或体系污染。
需重新设计引物或严格区分操作区域。
荧光基线异常
仪器光学组件需清洁。
样品管中若有气泡，应重新离心消除。
使用后及时关闭电源，保持仪器干燥清洁。
定期用无尘布擦拭加热模块表面，避免残留污染物。
光学检测窗口应避免触摸或刮伤。
建议每 6–12 个月进行一次专业维护校准。
样品前处理与扩增体系配制应分区操作，避免交叉污染。
佩戴一次性手套与实验服，必要时使用生物安全柜。
使用完毕的 PCR 管需进行高压灭菌或按实验室规定处理。
软件数据应定期备份，确保实验信息安全。
博日 FQD-16A 实时荧光定量 PCR 仪凭借小型化设计与灵敏的检测性能，成为科研与应用实验中的重要工具。正确掌握操作流程，包括环境准备、试剂体系设计、程序设定、数据分析与结果解读，能够保证实验结果的可靠性与重复性。同时，良好的日常维护与规范化操作习惯，有助于延长仪器使用寿命，提升实验室整体工作效率。
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