博日实时荧光定量pcr仪FQD-16A操作手册
时间:2025-08-27

一、仪器概述

博日实时荧光定量PCR仪 FQD-16A 是一款基于实时荧光信号检测技术的核酸扩增与定量检测设备。它通过在PCR反应过程中采集荧光信号,实现扩增过程的动态监控与定量分析。相比传统PCR只能在终点进行检测,FQD-16A 能在每一循环过程中记录信号变化,准确反映核酸扩增趋势,从而实现更快速、灵敏和高效的实验结果。

FQD-16A 在科研和应用领域都具有广泛用途,包括病原体核酸检测、转基因检测、基因表达分析、药物靶点研究、食品安全监控以及临床分子诊断等。由于其体积适中、操作简便、软件功能强大,适合科研实验室和应用检测中心使用。


二、功能与性能特点

  1. 实时检测:在扩增反应的每个循环过程中采集荧光信号,生成完整扩增曲线。

  2. 多通道荧光检测:支持常见荧光染料和探针,包括FAM、HEX、ROX、CY5等,可进行单重或多重检测。

  3. 温控系统精准:采用先进的半导体热循环控制技术,温度均一性良好,确保每个孔反应一致。

  4. 高灵敏度:最低可检测数个拷贝的核酸分子,满足临床和科研对微量样品的需求。

  5. 操作简便:配套软件直观,支持模板导入、实验设计、自动分析及报告输出。

  6. 数据处理多样化:内置标准曲线法、相对定量法、基因分型及熔解曲线分析等功能。

  7. 结构紧凑:体积较小,适合在常规实验室条件下安装与使用。

  8. 安全可靠:具有过温报警、数据自动保存和断电保护等功能,保证实验连续性与安全性。


三、安装与调试

1. 环境条件

  • 温度范围:18–30℃

  • 相对湿度:40%–80%

  • 电源:AC 220V ±10%,50Hz

  • 实验台:稳固、平整、防震,避免阳光直射及强气流干扰

  • 环境清洁,远离强磁场和腐蚀性气体

2. 安装步骤

  1. 从包装箱中取出仪器,放置在实验台上。

  2. 检查电源线及配件是否齐全,确认电源接地良好。

  3. 将计算机与仪器通过USB或网络接口连接。

  4. 启动仪器进行自检,确保光学和温控模块正常工作。

  5. 在计算机上安装配套软件,确认通信正常。

3. 初始校准

  • 执行光学系统校准,保证各通道检测一致性。

  • 使用厂家提供的标准样品进行检测验证,确认扩增效率与曲线线性符合要求。


四、实验前准备

  1. 试剂准备

  • 反应液需低温保存,避免反复冻融。

  • 荧光探针、引物及酶应严格按照说明书比例配制。

  1. 样品准备

  • 核酸提取后需检测纯度和浓度,OD260/280 值应在1.8–2.0之间。

  • 建议新鲜样品立即使用,必要时低温保存。

  1. 耗材准备

  • 使用专用PCR反应管或反应板,保证光学透过率和密封性。

  • 配备无气泡移液枪头,避免交叉污染。

  1. 反应体系配置

  • 根据实验目的选择反应体系(绝对定量或相对定量)。

  • 确保体系总量、模板用量及引物浓度合适。


五、操作流程

1. 实验方案建立

  • 打开软件,新建实验文件。

  • 选择实验类型:绝对定量、相对定量、熔解曲线或基因分型。

  • 设置循环条件,包括变性、退火、延伸温度与时间。

2. 样品板配置

  • 将反应体系分装至PCR反应管或反应板。

  • 加入模板DNA、阴性对照与阳性对照。

  • 盖紧封膜,避免液体蒸发。

3. 仪器加载

  • 打开样品仓,将反应板放入并摆放平整。

  • 关闭仓门,避免外界光线影响检测。

4. 启动实验

  • 点击软件“运行”,仪器开始循环扩增与荧光采集。

  • 实验过程中可实时查看扩增曲线。

5. 数据采集与分析

  • 实验结束后,软件自动生成Ct值。

  • 通过标准曲线计算拷贝数,或使用ΔΔCt法分析相对表达量。

  • 生成熔解曲线,判断扩增产物的特异性。


六、注意事项

  1. 严格区分样品区、配液区和扩增区,避免交叉污染。

  2. 每次使用后,清洁仪器表面和样品仓。

  3. 实验中必须佩戴一次性手套和实验服。

  4. 不要在仪器运行过程中随意开关样品仓。

  5. 使用移液器前需校准,确保加样准确。

  6. 实验结果应及时导出并保存。


七、维护与保养

  1. 日常保养

  • 每次使用后用干净无尘布擦拭仪器表面。

  • 样品仓保持清洁干燥,避免液体泄漏。

  1. 光学系统

  • 定期检查通道透镜,防止灰尘遮挡。

  • 若荧光信号明显减弱,应联系专业人员校准。

  1. 温控系统

  • 保持通风口畅通,定期清理灰尘。

  • 避免长时间连续高负荷运行。

  1. 软件维护

  • 定期更新软件版本。

  • 建立数据备份机制,防止文件丢失。


八、常见问题与解决

  1. 无扩增信号

  • 检查试剂是否失效或体系是否正确配置。

  • 样品浓度是否过低或降解。

  1. 曲线异常

  • 存在气泡或加样不均。

  • 光学通道可能被污染。

  1. 熔解曲线杂峰

  • 产物存在非特异性扩增或引物二聚体。

  • 建议优化退火温度与引物设计。

  1. Ct值偏差大

  • 样品分装不均,或反应体系出现误差。

  • 移液器需重新校准。


九、安全规范

  1. 遵循实验室生物安全管理制度。

  2. 临床或病原体样品应在二级防护条件下操作。

  3. 废液与耗材需经高压灭菌后弃置。

  4. 仪器周边应保持干燥,避免液体进入电路。


十、应用场景

  1. 病原微生物检测:快速识别病毒、细菌核酸。

  2. 转基因检测:食品与农业样本的基因修饰成分分析。

  3. 基因表达研究:对比不同实验条件下基因的相对表达水平。

  4. 药物研发:监控药物对基因表达或病原体复制的影响。

  5. 临床诊断:辅助疾病诊断与个体化治疗研究。


十一、总结

博日实时荧光定量PCR仪 FQD-16A 集成了先进的光学检测与温控技术,具备高灵敏度、多功能和操作简便的优势。通过正确的安装调试、科学的实验操作及规范的维护保养,用户能够获得可靠的核酸定量分析结果。熟练掌握操作步骤和常见问题的处理方法,将显著提升实验效率和数据准确性,使该设备在科研、临床和检测领域发挥更大价值。


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