宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P使用说明
时间:2025-08-24

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P使用说明

一、设备概述

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量实时荧光定量PCR系统,可同时进行48个样品的扩增和检测。该设备结合精确的温控系统高灵敏度光学检测系统,能够实时监测荧光信号变化,从而实现核酸定量检测、基因表达分析、突变筛查和基因分型等多种功能。其结构紧凑、操作简便、功能全面,特别适合中小型实验室、临床检验科室及科研院所使用。


二、技术特点

  1. 通量适中:48通量满足日常检测与科研实验需要,既保证效率,又节省耗材。

  2. 控温精准:升降温速率快,温度均一性好,确保扩增结果一致性。

  3. 光学检测灵敏:支持多通道荧光信号采集,兼容多种染料和探针。

  4. 软件智能:界面直观,功能丰富,支持扩增曲线、熔解曲线、Ct值分析和自动报告生成。

  5. 操作便捷:模块化设计,实验流程简化,适合初学者快速掌握。


三、实验准备

1. 环境条件

  • 实验室温度保持在18–30℃,湿度30%–80%。

  • 实验台稳固、防震,远离强磁场和电磁干扰源。

  • 环境洁净,无尘或气溶胶污染。

2. 仪器检查

  • 确认电源线和通信线连接牢固。

  • 检查样品仓是否清洁,无液体残留。

  • 打开电源,观察系统自检是否正常。

3. 耗材准备

  • 48孔反应管或配套反应板。

  • 光学透明封膜或专用盖子。

  • 无RNA酶、DNA酶污染的枪头与离心管

4. 试剂与样品

  • PCR预混液、引物、探针或荧光染料。

  • 模板DNA或RNA(RNA需反转录为cDNA)。

  • 阴性对照和阳性对照。


四、反应体系配置

1. 体系组成(以20µL为例)

  • 预混液:10µL

  • 上游引物:0.5µL

  • 下游引物:0.5µL

  • 探针/染料:0.5–1µL

  • 模板:2–5µL

  • ddH₂O补足至20µL

2. 配置要点

  • 在洁净区操作,防止污染。

  • 每次加样需更换枪头。

  • 配置完成后使用离心机短暂离心,去除气泡。


五、操作流程

1. 开机与软件启动

  • 打开SLAN-48P电源。

  • 在电脑上启动配套软件,确认仪器连接正常。

2. 新建实验

  • 点击“新建实验”,输入实验名称和保存路径。

  • 在界面中设置实验参数。

3. 程序设置

  • 初始变性:95℃,2–3分钟。

  • 循环阶段:

    • 变性:95℃,10–15秒;

    • 退火:55–65℃,20–30秒;

    • 延伸:72℃,20–30秒。

  • 循环次数:35–45次。

  • 荧光采集点:通常选择在退火或延伸阶段。

4. 样品布局

  • 在软件的48孔板界面中,输入样品编号。

  • 标注阴性对照、阳性对照。

  • 为不同实验组分配不同颜色。

5. 装载样品

  • 将反应管放入样品仓,方向正确。

  • 关闭并锁紧舱盖。

6. 启动运行

  • 点击“开始运行”。

  • 软件实时显示扩增曲线和实验进度。


六、软件功能

1. 实时曲线显示

  • 扩增曲线随循环进程动态生成。

  • 状态栏显示循环次数与剩余时间。

2. Ct值计算

  • 软件自动识别阈值线并计算Ct值。

  • 用户可手动调整阈值位置。

3. 标准曲线绘制

  • 输入标准模板浓度,软件自动绘制曲线。

  • 显示相关系数R²和扩增效率。

4. 熔解曲线分析

  • 判断扩增产物特异性。

  • 单峰说明特异性良好,多峰表示可能存在非特异性扩增。

5. 数据导出

  • 支持Excel、PDF、Word、图像等格式。

  • 报告包含曲线图、Ct值表和实验参数。


七、实验结果分析

1. 扩增曲线

  • 阳性对照应在合理Ct值范围内,呈S型曲线。

  • 阴性对照应无明显信号。

2. Ct值解读

  • Ct值与模板浓度成反比。

  • 小于35为常见有效信号,大于40可能为背景噪音。

3. 标准曲线与效率

  • R²≥0.98为理想。

  • PCR效率在90%–110%之间为合格。

4. 熔解曲线

  • 单峰表示特异性产物。

  • 杂峰提示需优化引物或实验条件。


八、常见问题与处理

  1. Ct值过高或无扩增

  • 检查模板浓度、纯度。

  • 确认引物与试剂有效性。

  1. 熔解曲线杂峰

  • 可能为非特异性扩增。

  • 解决方法:提高退火温度或优化引物。

  1. 重复性差

  • 确认加样一致,避免气泡。

  • 检查封膜是否严密。

  1. 信号异常

  • 检查光学窗口是否污染,及时清洁。

  • 确认样品仓温控正常。


九、维护与保养

1. 日常清理

  • 实验结束后清理样品仓。

  • 用无水乙醇擦拭光学窗口。

2. 定期检测

  • 定期校准温控系统与光学系统。

  • 检查电源与散热系统。

3. 存放与停机

  • 长期不用时切断电源,覆盖防尘布。

  • 存放环境干燥通风,避免潮湿。


十、应用拓展

  1. 临床应用

  • 病毒检测(新冠、流感、乙肝等)。

  • 遗传病基因筛查与携带者检测。

  • 肿瘤基因突变检测。

  1. 科研应用

  • 基因表达定量分析

  • 突变筛查、SNP分型。

  • 药物作用机制研究。

  1. 食品与环境

  • 食源性致病菌检测。

  • 转基因成分检测。

  • 环境核酸监测。


十一、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P凭借精准的控温系统、灵敏的光学检测、直观的软件平台和便捷的操作流程,为中小型实验室提供了高效的分子检测解决方案。通过严格遵循使用说明,用户能够快速上手并获得可靠结果。同时,结合日常维护与合理保养,SLAN-48P将长期保持稳定性能,为临床诊断、科研研究及食品安全检测提供有力支持。


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