宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P操作手册
时间:2025-08-24

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P操作手册

一、设备概述

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款48孔中通量的实时荧光定量PCR系统,适合临床检测、科研实验与教学培训。该仪器在设计上兼顾精准性与便捷性,内置高精度温控模块和多通道光学检测系统,支持绝对定量、相对定量、多重检测及熔解曲线分析。
其主要特点包括:

  • 体积适中:适合中小型实验室。

  • 高稳定性:温控均一性好,光学系统灵敏度高。

  • 操作便捷:图形化界面,支持模板调用。

  • 结果可靠:数据可追溯,符合质量管理体系要求。


二、实验准备

  1. 实验环境

    • 温度保持在18–28℃,湿度40%–70%。

    • 放置在稳固的实验台上,避免震动和阳光直射。

    • 保持空气流通,避免灰尘进入设备。

  2. 人员要求

    • 操作者需接受培训,掌握分子生物学基础。

    • 全程穿戴实验服、手套及防护眼镜。

  3. 耗材与试剂

    • 使用适配的48孔反应板或管。

    • 模板需通过标准核酸提取步骤获得,保证纯度。

    • PCR反应体系需新鲜配置,避免试剂反复冻融。


三、标准操作流程

  1. 开机与自检

    • 打开电源,系统自动进行光学与温控模块检测。

    • 若发现异常,软件界面会提示。

  2. PCR体系配置

    • 在无核酸酶环境中准备反应体系。

    • 成分包括模板、引物、探针或染料、缓冲液、Mg²⁺、dNTP和酶。

  3. 上样与封板

    • 将体系加入反应孔,每孔体积20–50 μL。

    • 使用透明封板膜密封,避免蒸发和污染。

  4. 样品放置

    • 打开样品仓,放置反应板,方向与定位标识必须正确。

    • 确保反应板平稳,不可倾斜。

  5. 实验程序设定

    • 输入循环程序参数,包括变性、退火、延伸阶段温度与时间。

    • 设定荧光采集点和熔解曲线条件。

  6. 实验运行

    • 点击“启动”,系统自动运行PCR循环并实时采集荧光信号。

    • 实验进程可在界面上实时监控

  7. 实验完成

    • 系统自动保存实验数据。

    • 取出反应板,妥善处理实验废弃物。


四、系统设置

  1. 循环程序

    • 预变性:95℃,1–2 min。

    • 变性:95℃,15–30 s。

    • 退火/延伸:55–65℃,30–60 s。

    • 循环次数:35–45次。

  2. 荧光采集

    • SYBR Green体系:退火或延伸阶段采集。

    • TaqMan探针体系:延伸阶段采集信号最佳。

  3. 熔解曲线

    • 升温范围:60–95℃。

    • 升温速率:每步0.3–0.5℃。

  4. 样品管理

    • 软件支持手动输入样品编号与批量导入。

    • 界面直观显示48孔布局。


五、数据与结果分析

  1. 扩增曲线

    • Ct值反映模板丰度,Ct越低说明浓度越高。

    • 曲线应平滑,指数期上升明显。

  2. 标准曲线

    • 根据系列稀释标准品建立,斜率与相关系数评估扩增效率。

    • 理想效率在90%–110%。

  3. 熔解曲线

    • 单峰说明扩增特异性好。

    • 多峰提示引物二聚体或非特异性扩增。

  4. 统计与分析

    • 软件支持ΔCt、ΔΔCt方法。

    • 提供均值、标准差和显著性分析功能。


六、注意事项

  1. 上样操作需避免气泡,防止干扰荧光检测

  2. 每个实验必须设置阳性、阴性和无模板对照。

  3. 实验运行中不得随意开关样品仓。

  4. 封膜必须紧密,避免反应体系蒸发。

  5. 实验结束后立即导出数据并备份。


七、常见问题排查

  1. 无扩增信号

    • 检查模板浓度与质量。

    • 确认程序设置与荧光通道是否正确。

  2. 曲线异常

    • 可能是试剂降解或体系污染。

    • 更换试剂并重新配置。

  3. 重复性差

    • 检查移液是否准确,孔板密封是否良好。

    • 避免边缘效应。

  4. 熔解曲线多峰

    • 调整退火温度,重新优化引物。

    • 选择探针体系以提升特异性。


八、维护与保养

  1. 日常维护

    • 实验后清洁设备外表与样品仓。

    • 保持环境干燥通风。

  2. 光学系统

    • 定期擦拭光学窗口,避免灰尘积累。

    • 光源衰减时需更换并重新校准。

  3. 温控系统

    • 检查风扇是否正常工作。

    • 每年进行温控一致性校准。

  4. 软件与数据

    • 定期升级软件。

    • 建立多重数据备份机制。


九、安全规范

  1. 电源管理

    • 使用稳压电源,避免电压波动损坏设备。

    • 实验结束后应正确关机并切断电源。

  2. 样品与废弃物处理

    • 遵守生物安全规范,分类收集和灭活处理。

    • 防止核酸污染扩散。

  3. 人员安全

    • 操作人员必须佩戴个人防护用品。

    • 不得在运行中开启光学模块仓门。


十、应用价值

  1. 临床检测

    • 用于病原体核酸快速检测,适合中小规模实验。

    • 自动生成检测报告,符合临床规范。

  2. 科研应用

    • 支持基因表达研究、突变检测、药物反应评估。

    • 灵活的多重检测功能满足复杂实验需求。

  3. 教学培训

    • 界面直观、操作简便,适合课堂展示和学生实训。

    • 有助于培养分子检测技能和实验思维。


总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款兼具高性能与易用性的实时荧光定量检测设备。通过科学的实验准备、规范的操作流程、合理的程序设置和严格的数据分析,用户能够在临床、科研和教学中获得准确可靠的结果。本操作手册为使用者提供了系统化的操作指南,有助于提升实验室的工作效率与标准化水平。


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