在使用SLAN-48P之前，必须进行充分的前期准备，以保证实验顺利进行。
实验环境
室温保持在18–28℃之间，相对湿度30–70%；
实验区域应分区管理：试剂准备区、样品提取区、扩增区严格分开，避免污染；
桌面保持整洁，无灰尘与液体残留。
耗材与试剂
96孔反应板、0.2 mL八联管或单管；
透明光学封板膜或封管盖；
一次性滤芯枪头、专用移液器；
PCR反应液（含缓冲液、dNTP、MgCl₂等）、引物、探针、Taq酶；
模板DNA或RNA。
设备检查
开机自检，确保温控模块和光学模块正常；
确认样品舱干净无灰尘和残液；
检查电源与数据线连接稳定。
PCR反应体系的配置直接影响实验成败。
常规组分
反应缓冲液：提供合适pH与离子环境；
dNTP混合物：合成DNA所需原料；
Mg²⁺：影响酶活性与特异性；
引物：特异性识别目标序列；
探针或荧光染料：用于信号检测；
Taq DNA聚合酶或逆转录酶（若检测RNA需RT步骤）；
模板：待扩增的DNA或cDNA。
体系体积
通常每孔20–50 µL，根据实验目的调整。
配置注意事项
操作全程在冰上进行，避免酶活性提前启动；
使用滤芯枪头，减少气溶胶污染；
严格按照SOP执行，避免遗漏或超量。
分装反应液
将PCR体系加入反应管或反应板，每孔体积一致；
确认加样顺序与实验设计一致。
加入模板
将DNA或RNA模板加入相应孔中；
每次加入后轻轻混匀，避免飞溅。
加盖与密封
使用透明封板膜，确保无气泡；
若使用八联管，需确保管盖完全扣合；
封板后可轻微离心，使液体集中于管底。
新建实验文件
在SLAN-48P软件中选择“新建实验”；
输入实验名称、批次号、操作人员信息。
设定循环程序
初始变性：95℃，2–5分钟；
扩增循环（35–45次）：
变性：95℃，15–30秒；
退火：55–65℃，20–40秒；
延伸：72℃，20–40秒。
选择检测通道
根据探针类型选择FAM、HEX、ROX、CY5等通道；
多重检测实验需合理分配通道。
录入样本信息
标记每孔样品名称、类型（阳性对照、阴性对照、待测样品）；
可手动输入或批量导入Excel文件。
放置样品
将反应板放入样品舱；
确认方向与软件设置一致；
关闭舱盖，确保紧密。
启动运行
点击“开始运行”；
软件显示实时扩增曲线；
实验中避免频繁开关样品舱。
监控进程
可实时观察温控曲线与扩增曲线；
若发现异常，可暂停或终止实验。
扩增曲线解读
理想扩增曲线应呈“S”型；
阴性对照不应出现扩增；
阳性对照应在预期Ct值范围内。
Ct值判定
Ct ≤ 30：高浓度模板；
31–35：中等浓度；
≥ 36：低浓度或可疑结果。
熔解曲线分析
单峰：特异性产物；
多峰：提示引物二聚体或非特异性扩增。
软件自动生成数据报告；
可导出Excel、PDF或Word文件；
报告中包含Ct值、标准曲线、扩增与熔解曲线。
阴阳性判定
阳性对照必须扩增，阴性对照不得扩增；
样本Ct值在设定阈值内且曲线正常，即为阳性。
绝对定量：通过标准曲线计算拷贝数；
相对定量：采用2^-ΔΔCt方法计算基因表达差异。
科研应用
基因表达分析、突变检测、基因分型；
细胞或组织在不同条件下的转录水平研究。
无扩增曲线
检查样本质量和反应体系；
核对循环参数。
Ct值偏高
模板浓度不足；
反应体系中存在抑制剂。
阴性对照扩增
存在污染，应重做实验。
重复孔差异大
排查移液误差与耗材质量。
实验安全
样品操作在生物安全柜内进行；
使用一次性耗材，避免交叉污染。
每次实验后清洁样品舱；
定期检查温控与光学系统；
每半年校准一次温控模块。
实验结束后及时备份数据；
定期整理与归档，避免数据丢失。
宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P的实验步骤涵盖了 前期准备、反应体系配置、上样、仪器设置、运行、数据采集与分析、结果判定、常见问题处理与维护 的全流程。通过严格遵循规范化步骤，用户不仅能够快速获得准确结果，还能保证实验的重复性和设备的长期稳定性。
在科研与临床工作中，规范的实验步骤是保证数据可靠的核心。SLAN-48P凭借其稳定性能和易操作的软件平台，为实验人员提供了清晰的操作路径。
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