宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P系统操作

一、引言

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量实时定量PCR检测设备，支持48孔板操作，广泛应用于分子诊断、临床检验、科研实验、食品与环境检测。其系统操作包括实验前准备、程序设置、运行监控、数据分析、维护与安全管理等多个步骤。熟练掌握系统操作规程，是确保实验成功与结果可靠的重要前提。

二、系统结构与功能模块

1. 温控系统

• 核心技术：采用Peltier半导体控温，实现快速升温和降温。

• 特点：温控精度±0.1℃，孔间温度差异极小。

• 功能：支持多点退火温度设定，方便引物优化。

2. 光学检测系统

• 激发光源：发射特定波长光激发荧光。

• 滤光系统：精确分离多种荧光信号。

• 探测器：高灵敏度光电探测器，捕捉微弱荧光信号。

• 多通道支持：可同时监测不同荧光染料，实现多重检测。

3. 控制与软件系统

• 人机交互界面：操作界面简洁，支持触控或电脑端操作。

• 数据分析模块：自动生成扩增曲线、熔解曲线、Ct值表格与标准曲线。

• 存储与导出：支持多格式数据保存和报告输出。

三、运行准备

1. 实验环境

• 实验室温度保持在18–28℃，湿度适宜。

• 应分区操作：试剂准备区、样本处理区、扩增区、产物分析区。

• 避免阳光直射及强电磁干扰。

2. 仪器准备

• 接通电源并检查接地。

• 开机后进行自检，确认温控与光学模块正常。

• 检查热循环模块表面是否清洁平整。

3. 耗材准备

• 使用厂家推荐的48孔反应板和透明封板膜。

• 准备无RNA/DNA酶污染的移液枪头和纯水。

4. 样品与试剂准备

• 核酸提取应符合标准操作流程，RNA需进行反转录。

• 配制反应体系时，需准确加入缓冲液、引物、探针、dNTP和酶。

• 设置阳性对照、阴性对照和无模板对照。

四、操作流程

1. 反应体系配置

• 按照实验设计计算各组分体积。

• 建议采用主混合液方式，减少移液误差。

• 分装至反应孔中，避免气泡。

2. 封板与装载

• 使用透明膜封板，确保密封性良好。

• 将反应板轻轻离心，去除气泡。

• 平稳放入热循环模块。

3. 程序设置

• 扩增程序：设置变性、退火、延伸温度与循环次数。

• 荧光通道：选择相应检测染料（如FAM、HEX、ROX）。

• 样本信息：输入样品编号、批次、检测项目。

4. 实验运行

• 启动扩增程序，仪器自动运行。

• 软件实时显示扩增曲线，可监控实验进度。

五、数据分析

1. 扩增曲线

• 标准“S”型曲线：基线期、指数期、平台期。

• 异常曲线提示操作或样本问题。

2. Ct值计算

• 软件自动设定阈值，Ct值需人工复核。

• Ct值越小，模板浓度越高。

3. 定量分析

• 绝对定量：利用标准曲线推算拷贝数。

• 相对定量：使用ΔΔCt方法进行基因表达比较。

4. 熔解曲线

• 单一峰值表示特异性好。

• 多峰提示非特异性扩增或引物二聚体。

六、维护与保养

1. 日常维护

• 每次实验结束后清洁热循环模块表面。

• 定期检查光学通道是否有灰尘或残留物。

• 清理风扇与通风口，保持散热良好。

2. 定期维护

• 每季度校准温控系统。

• 每半年进行光学系统检测与校准。

• 建议每年由厂家进行一次全面检修。

七、安全注意事项

1. 严格分区操作，避免核酸扩增产物污染。

2. 操作过程中佩戴实验服、手套、护目镜。

3. 废弃产物需高压灭菌后再丢弃。

4. 避免液体进入仪器内部。

八、常见问题与解决方案

1. 无扩增曲线

• 检查模板是否降解。

• 确认试剂是否失效。

• 核对通道设置。

2. 背景信号过高

• 检查光学通道清洁度。

• 更换高纯度试剂。

3. Ct值偏高

• 样本浓度不足。

• 移液误差大。

4. 熔解曲线异常

• 优化引物设计。

• 提高退火温度。

九、系统操作优势

• 灵活性强：适合中小规模实验室。

• 经济高效：运行成本低。

• 智能化：自动分析数据，减少人工计算。

• 可靠性：温控与光学系统稳定，结果准确。

十、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P系统操作涵盖从实验准备、反应配置、程序设置到数据分析与结果输出的全过程。规范的操作可确保实验数据的准确性和重复性，降低实验风险。通过科学的维护与质量控制，SLAN-48P不仅能够满足科研与临床的检测需求，还能在食品安全和环境监测领域发挥重要作用。