宏石荧光定量PCR仪 SLAN-48P 操作规范

一、前言

宏石荧光定量PCR仪 SLAN-48P 是一款中通量实时荧光定量检测平台，广泛应用于临床检测、科研实验、食品与环境安全等领域。其特点在于通量适中（48 孔），适合中小规模实验室使用。本规范旨在为实验人员提供标准化操作流程，保证实验结果的准确性和可重复性，同时保障设备安全运行与使用寿命。

二、实验环境与人员要求

1. 环境要求

• 室温保持在 18–30℃，避免剧烈波动。

• 相对湿度控制在 40–70%。

• 实验室应分为三个区域：试剂准备区、样品处理区、扩增检测区，禁止交叉操作。

• 环境保持清洁，无灰尘和气溶胶污染。

2. 人员要求

• 操作人员需经过 PCR 实验与 SLAN-48P 使用培训。

• 实验全程佩戴手套、口罩、实验服，避免样品污染。

• 严格遵守“单向操作原则”，即样品由准备区向检测区流动，不可逆流。

三、实验前准备

1. 仪器检查

• 启动电源，确认自检程序无异常。

• 检查热循环模块表面是否干净平整。

• 确认光学检测窗口无灰尘、油迹或指纹。

• 热盖温度默认设为 105℃。

2. 耗材准备

• 使用专用的光学透明 PCR 管、八联管或 48 孔板。

• 采用带滤芯枪头，避免气溶胶污染。

• 封板膜应保证密封良好，防止蒸发。

3. 试剂与样品准备

• 核酸提取需在专门区域进行，避免交叉污染。

• 反应体系采用“主混液 + 模板”的配置方式。

• 设置阴性对照、阳性对照和标准品。

• 所有试剂应在使用前充分融解、混匀，并短暂离心。

四、反应体系配置规范

1. 基本组成

• 预混液（含缓冲液、酶、dNTPs）。

• 引物与探针。

• 模板核酸。

• 无核酸酶水。

2. 配制要求

• 按体系要求准确移液，不得随意调整比例。

• 每次移液后更换枪头，避免交叉污染。

• 配制完成后轻轻混匀并短暂离心，保证液滴集中于管底。

3. 对照设置

• 阴性对照（NTC）：检测污染。

• 阳性对照：验证体系有效性。

• 标准品：用于绘制标准曲线，实现定量分析。

五、样品上机操作

1. 放置样品

• 打开热盖，将 PCR 板或管放入样品槽。

• 确认方向正确，避免放置错误。

• 样品板与模块紧密接触，确保温度均一。

2. 软件操作

• 启动配套软件，新建实验任务。

• 输入实验名称、日期、样品编号。

• 选择实验类型：定性检测、绝对定量、相对定量或熔解曲线分析。

• 设置温度循环程序（预变性、变性、退火、延伸），以及循环次数（一般 40–45 次）。

• 设置荧光通道（FAM、HEX/VIC、ROX、Cy5 等）。

• 保存实验方案并检查无误。

3. 启动实验

• 点击运行，仪器自动完成热循环与荧光信号采集。

• 实验过程一般耗时 1.5–2 小时。

• 实验过程中不得随意开盖或移动设备。

六、数据分析规范

1. Ct 值判定

• Ct 值（阈值循环数）应在合理范围。

• 阴性对照无扩增曲线，若有异常扩增说明存在污染。

• 阳性对照 Ct 值稳定，验证体系有效性。

2. 标准曲线

• 梯度稀释标准品绘制曲线，R² ≥ 0.99。

• 扩增效率在 90–110% 范围内为合格。

3. 熔解曲线

• 单一峰说明产物特异性好。

• 多峰提示非特异性扩增或引物二聚体。

4. 报告生成

• 软件自动生成实验报告，包括扩增曲线、熔解曲线和 Ct 值表。

• 可导出 PDF 或 Excel 格式，便于存档与分析。

七、实验注意事项

1. 防止污染

• 严格区分试剂区与样品区。

• 阴性对照全程设置，实时监控污染情况。

• 使用专用移液器，定期更换滤芯枪头。

2. 温控管理

• 热循环模块保持清洁，避免因残留物导致温控不均。

• 热盖温度应略高于反应体系退火温度，防止蒸发。

3. 光学检测

• 光学窗口避免划痕和灰尘。

• 实验中不要开盖，否则可能导致光学检测异常。

4. 软件操作

• 参数设定需严格按照实验设计。

• 文件命名规范，避免数据混乱。

八、安全规范

• 样品、耗材均视为潜在污染物，实验结束后统一处理。

• 含荧光染料的体系避免直接接触皮肤和眼睛。

• 废弃物必须经过高压灭菌后再处理。

• 仪器周围保持整洁，不得堆放无关物品。

九、常见问题与解决

1. 无扩增曲线

• 检查模板是否降解。

• 确认反应体系完整。

• 检查通道选择是否正确。

2. Ct 值偏高

• 模板量不足。

• 退火温度过高。

• 移液误差导致体系不足。

3. 阴性对照出现扩增

• 存在气溶胶污染，应更换试剂并重新实验。

• 检查实验区隔离是否到位。

4. 熔解曲线多峰

• 优化退火温度。

• 检查引物设计与浓度。

十、维护与保养

1. 日常维护

• 实验结束后用无水乙醇清洁热循环模块。

• 光学窗口如有污染，用镜头纸轻拭。

• 保持设备外部整洁，定期除尘。

2. 定期保养

• 每 3–6 个月进行温度校准。

• 每年进行光学校准，确保通道灵敏度。

• 检查软件是否为最新版本，及时更新。

3. 存放要求

• 长期不用时关闭电源并覆盖防尘罩。

• 存放在干燥环境，避免阳光直射和腐蚀性气体。

十一、总结

宏石荧光定量PCR仪 SLAN-48P 操作规范涵盖了实验准备、反应体系配置、上机运行、数据分析、安全管理和维护保养的全流程。严格遵循这些规范，不仅能确保实验结果的准确性和可重复性，还能有效延长仪器的使用寿命，提升实验室整体工作效率。

在临床诊断、科研研究、食品安全与公共卫生领域，SLAN-48P 已成为可靠的分子检测工具。通过标准化的操作规范，实验室可以实现检测质量的持续稳定，为科学研究和健康保障提供坚实的支撑。