宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中等通量的实时荧光定量PCR系统，专为分子诊断和科研实验设计。为了确保其发挥最佳性能，初次安装或长时间停机后必须进行系统调试。调试过程不仅是对设备硬件与软件状态的检测，也是建立稳定运行参数、验证结果可靠性的关键步骤。
本文将从系统构成出发，逐层展开SLAN-48P的调试方法，涵盖硬件检测、软件设置、温控校准、光学系统验证、实验验证与数据比对，并结合常见问题给出解决建议，为实验室人员提供系统化的参考。
实验室环境检查
温度保持在18–28℃，湿度40%–70%。
实验室需分区，避免扩增产物污染影响调试。
台面平整稳固，防止设备震动。
设备检查
确认电源电压稳定，与设备要求匹配。
检查电缆和接口是否牢固。
光学仓和温控模块应无灰尘和液体残留。
软件与计算机准备
安装最新版配套软件，检查驱动是否正常。
设置正确的时间和日期，确保数据记录可追溯。
管理员预设账户，分配权限。
耗材与试剂准备
使用推荐的光学管或反应板。
预备标准DNA或RNA样品，供性能验证。
试剂需在有效期内，避免反复冻融。
打开加热模块，运行一次升降温测试（4–95℃范围）。
检测孔间温差，确保不超过±0.3℃。
通过传感器记录温度曲线，验证升温速率（2–4℃/秒）是否符合标准。
开启LED光源，检测各通道是否正常激发。
通过测试板或标准荧光样品，验证检测器的灵敏度和均一性。
若某通道信号弱，需检查光路是否有污染或老化。
核实样品仓是否开合顺畅。
检查散热风扇运转是否正常。
确认传动机构无异常噪音。
预变性：95℃，2–3分钟。
循环：95℃ 10–15秒；55–60℃ 30秒；共40–45次循环。
梯度温控功能调试时，应在±10℃范围内测试退火温度。
在软件中选择各通道对应染料，如FAM、HEX/VIC、ROX、Cy5。
验证通道设置与实验设计一致，避免信号错配。
输入样品编号与分组信息。
设置阴性对照、阳性对照和内参位置。
保存为模板，以便重复使用。
启动测试运行，实时观察扩增曲线。
检查基线稳定性和信号强度。
使用外部温度探针记录升降温速率。
确认速率与设备说明一致。
在所有孔中加入相同体系，运行一次qPCR程序。
比较各孔Ct值差异，标准差应小于0.5。
长时间运行（>2小时）后，重复性实验应保持一致。
检查是否有过热报警或程序中断。
使用标准荧光染料，观察各通道响应强度。
确认荧光峰值对应波长无偏移。
对比阴性孔与阳性孔信号，信噪比应大于10。
若背景值过高，需清洁光学窗口。
使用含有多种探针的样品，验证多通道是否能稳定分辨。
检查是否存在光谱串扰。
采用系列稀释的标准模板，绘制Ct值与浓度对数关系。
扩增效率应在90%–110%之间。
相关系数R²应大于0.99。
对单一产物进行熔解曲线分析，应出现单一峰值。
出现多个峰值时，需检查引物设计或退火温度。
同一样品在多个孔的Ct值差异应小于0.5。
若差异较大，应排查移液操作与耗材问题。
对照样本分析
阴性对照应无扩增曲线。
阳性对照Ct值应在预期范围内。
重复性分析
多次运行相同样品，Ct值应稳定。
若波动大，说明调试未完成。
跨平台比对
与其他已验证设备对比结果，Ct值差异应在±1以内。
若偏差明显，需重新检查温控与光学模块。
无信号输出
检查通道设置是否正确。
确认光学模块是否正常工作。
Ct值普遍偏高
样品浓度不足或酶失活。
温控不均导致扩增效率下降。
熔解曲线多峰
非特异性扩增，需优化引物。
Mg²⁺浓度过高，建议调整体系。
通道间干扰
光学串扰，需更换荧光染料组合。
检查光学系统密封性。
SLAN-48P系统调试是确保设备运行稳定和实验结果可靠的前提。调试内容涵盖硬件检测、软件设置、温控与光学验证、实验性能测试和数据评估。通过规范调试，可以：
保证温控均一，提升扩增一致性；
确认光学检测灵敏度，减少误判；
建立标准曲线，确保定量分析准确；
通过对照与比对，验证结果的可靠性。
实验室人员应在初次安装、长时间停机、关键实验前均进行完整调试，并记录调试报告。这样既能延长设备寿命，也能为科研与临床检测提供高质量的数据支持。
黑马仪器网 浙江栢塑信息技术有限公司
