宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P教学资料

一、设备概述

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量实时荧光定量PCR系统，专为临床分子诊断和科研检测设计。它在体积、操作简便性和检测精度之间实现了平衡，能够在一次实验中完成48个样品的扩增与检测，适合中小型实验室的常规使用。

SLAN-48P采用高灵敏度光学检测系统和精准的温控模块，支持多种荧光通道，能够进行多重检测。无论是定性分析、绝对定量还是相对定量，仪器都能提供可靠的数据支持。

二、结构特点

1. 样品仓：容纳48孔反应管，密封性好，确保加热与荧光采集稳定。

2. 光学系统：配备多通道激发光源与检测滤光片，可同时检测多种荧光染料。

3. 温控模块：升降温速率快，控温精度高，确保扩增反应的特异性。

4. 软件平台：直观的操作界面，具备强大的数据分析与报告功能。

5. 设计特点：结构紧凑，占地小，操作友好，易于教学和培训。

三、实验原理

SLAN-48P基于聚合酶链式反应（PCR）原理，通过温度循环实现DNA或cDNA的指数扩增。其核心在于实时监控荧光信号：

• 荧光染料模式：如SYBR Green，结合双链DNA后发出荧光。

• 探针模式：如TaqMan探针，在扩增过程中被酶切割释放荧光基团。

软件实时记录荧光强度随循环次数的变化，绘制扩增曲线，计算Ct值，并进一步进行定量分析。

四、操作流程

1. 实验前准备

• 环境条件：温度18–30℃，湿度30%–80%。

• 仪器检查：电源、线缆和样品仓状态正常。

• 耗材准备：48孔反应管、光学透明封板膜。

• 试剂准备：预混液、引物、探针、酶、样品DNA或RNA。

2. 反应体系配置

• 常见体系为20µL：包含预混液、引物、探针、模板。

• 加样需轻柔，避免气泡，使用离心机短暂离心。

• 设置阴性对照（NTC）和阳性对照。

3. 软件设置

• 新建实验，命名文件。

• 设定循环程序：初始变性95℃，循环35–45次，退火温度55–65℃。

• 选择荧光通道：如FAM、HEX、ROX。

• 在布局界面输入样品编号，标注对照孔。

4. 样品装载

• 将反应管放入样品仓，方向正确。

• 关闭舱盖，确认密封。

5. 实验运行

• 点击“开始运行”，仪器自动进行热循环与荧光采集。

• 实时监控扩增曲线，观察对照孔状态。

五、软件功能

1. 实时曲线显示：随循环进行，扩增曲线逐渐生成。

2. Ct值计算：自动识别阈值线，输出各孔Ct值。

3. 标准曲线：输入标准模板浓度，绘制标准曲线，计算扩增效率。

4. 熔解曲线分析：判断扩增产物特异性，区分非特异扩增。

5. 基因分型：通过不同荧光通道识别不同等位基因。

6. 结果导出：支持Excel、PDF、Word、图片等格式，便于归档与分享。

六、数据分析

1. 扩增曲线

• 阳性对照Ct值合理，曲线呈S型。

• 阴性对照应无扩增信号。

2. Ct值解读

• Ct值与模板浓度呈负相关。

• 小于35为常见有效扩增，大于40可能为背景噪音。

3. 标准曲线与定量

• R²≥0.98表示线性良好。

• PCR效率在90%–110%为理想值。

4. 熔解曲线

• 单一峰表示产物特异性强。

• 多峰说明存在非特异性产物。

七、常见问题与解决

1. Ct值偏高：模板量不足或降解；需提高浓度或优化引物。

2. 无扩增信号：检查试剂是否失效；确认模板是否加入。

3. 熔解曲线杂峰：退火温度过低；引物设计不合理。

4. 重复性差：加样不均；封膜不严导致蒸发。

5. 软件连接异常：检查通信接口，重启仪器与软件。

八、维护与保养

1. 日常维护

• 每次实验后清理样品仓，防止液体残留。

• 使用无水乙醇擦拭光学检测窗口。

2. 定期检查

• 定期进行温控与光学校准。

• 检查电源、风扇和散热口，确保运行稳定。

3. 长期停机

• 切断电源，覆盖防尘布。

• 存放于干燥通风环境中。

九、教学应用与价值

1. 实验教学

• 可作为PCR教学的直观工具，展示从样品到数据的全过程。

• 结合实时曲线和熔解曲线，帮助学生理解PCR原理。

1. 临床培训

• 帮助新进检验人员快速掌握核酸检测操作。

• 演示不同对照的意义和数据解读方法。

1. 科研训练

• 用于训练研究生和科研人员进行基因表达分析。

• 提供标准化操作流程，提升实验 reproducibility。

十、应用拓展

1. 病原体检测：新冠病毒、流感、结核等核酸检测。

2. 遗传学研究：突变检测、SNP分型。

3. 肿瘤学：基因突变位点和融合基因检测。

4. 药物研发：基因表达水平监测、药效评估。

5. 食品安全：转基因检测、食源性病原体筛查。

十一、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P以其稳定的性能、直观的软件平台和高效的检测能力，在临床、科研和教学中都具有重要价值。通过本教学资料，学习者可以全面理解其实验原理、掌握详细操作步骤，并能够正确解读数据和解决常见问题。规范化的操作不仅能提升实验质量，还能为实验室管理和人员培训提供标准化依据。