聚合酶链式反应（PCR）自20世纪80年代问世以来，极大地推动了分子生物学和临床诊断的发展。实时荧光定量PCR（qPCR）则在此基础上，通过实时监测扩增过程中的荧光信号，实现了核酸分子的定量检测。宏石SLAN-48P是宏石公司推出的一款中等通量的实时荧光定量PCR设备，适用于临床检测、科研实验、食品安全和环境监测等领域。其实验原理是PCR扩增循环与荧光探针检测的有机结合，依托精确的温控系统和高灵敏光学检测，实现核酸扩增的可视化与定量化。
PCR反应依靠耐高温的DNA聚合酶，在温度循环条件下完成DNA片段的指数扩增。其核心步骤包括：
变性（Denaturation）：在94–95℃条件下，使双链DNA解链成单链。
退火（Annealing）：在50–65℃条件下，引物与模板DNA互补结合。
延伸（Extension）：在72℃条件下，DNA聚合酶利用dNTP合成新链。
一个循环结束后目标序列数量理论上翻倍。经过30–40个循环，可以将极少量的DNA扩增到足够检测的水平。
PCR在指数期产物累积速度最快，理论倍增，但受限于酶活性衰减、底物耗竭和副反应干扰，后期曲线会进入平台期。
实时荧光定量PCR不同于传统PCR的事后检测，它在扩增过程中实时采集荧光信号，通过曲线变化来判断核酸扩增情况。这使得结果更加直观，并支持定性与定量分析。
荧光染料或探针与扩增产物结合后发光，荧光强度与核酸浓度成正比。通过监测荧光强度随循环数的变化，可以判断：
目标序列是否存在；
不同样品中模板含量的差异；
根据标准曲线计算核酸的拷贝数。
SYBR Green I染料：可与双链DNA结合，经济实用，但易受非特异性产物干扰。
TaqMan探针：利用荧光基团与淬灭基团的分离实现信号释放，特异性高。
分子信标与FRET探针：通过能量转移实现多重检测，适用于复杂实验设计。
SLAN-48P采用半导体控温技术（Peltier效应），通过电流方向切换实现快速升温与降温。
温度精度：误差控制在±0.1℃。
孔间一致性：确保48孔各位置温度均匀，减少扩增差异。
梯度退火功能：可同时测试多个退火温度，用于引物优化。
SLAN-48P光学模块由激发光源、滤光片组与高灵敏光电探测器组成：
激发光源：发出特定波长光，激发荧光分子。
滤光系统：分离不同荧光信号，避免通道串扰。
探测器：将荧光信号转化为电信号，再由软件记录。
多通道设计允许在同一孔位检测多种荧光标记，实现多重扩增。
扩增曲线生成：记录每循环荧光强度。
阈值设定：在指数扩增期设定阈值，计算Ct值。
定量方法：通过标准曲线或ΔΔCt计算样品浓度或相对表达水平。
Ct值是指扩增曲线荧光信号超过阈值的循环数。Ct值与模板初始浓度成反比：模板越多，Ct值越小。
绝对定量：利用已知浓度标准品建立Ct值与拷贝数的标准曲线，推算未知样品浓度。
相对定量：常用于基因表达分析，通过比较目标基因与参考基因的Ct值差异，得出相对表达量。
在扩增完成后逐步升高温度，使PCR产物逐渐解链。SYBR Green染料在双链DNA存在时发光，解链时荧光降低，形成熔解曲线。
单一尖锐峰：说明产物特异性好。
多峰或杂峰：提示存在非特异性扩增或引物二聚体。
峰值偏移：反映GC含量差异或体系不稳定。
验证扩增特异性。
区分基因型或突变。
系统在前几个循环记录背景荧光，并在后续分析中自动扣除，提高检测灵敏度。
通过数学模型拟合扩增曲线，修正异常点，确保Ct值准确。
软件可自动生成Ct值表、扩增曲线图、熔解曲线和统计结果，并支持导出为Excel或PDF文件。
通量适中，灵活高效，适合常规实验。
光学与温控系统高度集成，结果稳定。
软件智能化，操作简便。
支持多重扩增和多通道检测。
临床检测：病原体核酸检测、遗传病突变筛查。
科研实验：基因表达谱分析、分子功能研究。
食品安全：转基因检测、致病菌筛查。
环境监测：污染源微生物检测。
样本制备需避免降解，特别是RNA实验。
严格分区操作，避免扩增产物污染。
对照必须齐全，确保数据可解释。
试剂与耗材应符合设备推荐标准。
宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P实验原理是PCR扩增循环、荧光信号检测与计算机数据分析的综合应用。其核心在于利用精准温控实现核酸扩增，依靠光学系统捕捉荧光变化，再通过Ct值与熔解曲线进行结果解读。SLAN-48P不仅在技术上保证了实验的高灵敏度和高准确性，还在应用层面兼顾科研与临床的多种需求。通过严格遵循实验原理并规范操作，研究者能够最大限度地发挥该设备的性能优势，为分子生物学和医学检测提供可靠的数据支持。
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