宏石荧光定量PCR仪 SLAN-48P 系统操作指南

一、前言

宏石荧光定量 PCR 仪 SLAN-48P 是一款中等通量的实时荧光定量 PCR 仪器，适用于临床检测、科研实验、食品与环境安全监测等多种应用。该设备具备 48 个反应孔、多通道荧光检测系统以及智能化分析软件，能够在一次实验中完成多个样品的扩增与定量检测。

为了保证实验结果准确可靠，实验人员必须熟悉 SLAN-48P 的系统组成、操作流程和参数设置。本指南将全面介绍 SLAN-48P 的操作规范，帮助使用者掌握从样品上机到数据分析的全过程。

二、系统组成与基本功能

1. 仪器结构

• 热循环模块：负责样品的温度控制，确保 DNA 扩增过程准确。

• 光学检测模块：包含多通道检测系统（常见 FAM、HEX/VIC、ROX、Cy5 等）。

• 热盖系统：防止样品蒸发，保证信号稳定。

• 计算机与软件：实现实验设计、参数设置、曲线采集与结果分析。

2. 功能特点

• 中通量检测：支持 48 个样品的同时检测，适合中小规模实验室。

• 多通道检测：可进行多重反应，适合病原体联合检测或转基因检测。

• 实时监控：可随时查看扩增曲线，掌握实验进展。

• 数据分析：自动生成 Ct 值、标准曲线、熔解曲线及定量结果。

三、实验前准备

1. 环境与条件

• 室温控制在 18–30℃，湿度保持 40–70%。

• 实验室应分区：样品准备区、反应体系配置区、扩增检测区。

• 避免灰尘、气溶胶污染，保持环境清洁。

2. 仪器检查

• 打开电源，确认自检结果正常。

• 检查热循环模块和光学窗口是否干净无尘。

• 热盖温度预设为 105℃。

• 确认仪器与计算机连接正常。

3. 耗材与试剂

• 使用专用的 PCR 管、八联管或 48 孔板，确保光学透明。

• 采用带滤芯枪头，防止气溶胶污染。

• 所有试剂均需在有效期内，使用前充分融解并混匀。

四、反应体系与参数设置

1. 反应体系配置

• 建议采用“主混液+模板”方式，最后加模板。

• 每个实验需设置阴性对照（NTC）、阳性对照和标准品。

• 配置完成后短暂离心，确保液体集中在管底。

2. 热循环参数

• 预变性：95℃ 2–5 分钟。

• 循环变性：95℃ 15–30 秒。

• 退火/延伸：55–65℃ 30–40 秒（采集荧光）。

• 循环次数：40–45 次。

3. 荧光检测设置

• 根据试剂类型选择荧光通道：

• FAM：常用于病毒检测。

• HEX/VIC：多重实验的第二目标。

• ROX：常作为内参或参考。

• Cy5：扩展目标检测。

• 采集点选择在延伸阶段或退火阶段。

4. 熔解曲线参数

• 升温范围：65–95℃。

• 升温速率：0.2–0.5℃/s。

• 每个温度点采集一次荧光信号。

五、系统操作流程

1. 样品上机

• 打开热循环盖，将 48 孔 PCR 板放置在样品槽内。

• 确认板与模块紧密贴合，避免温控不均。

• 关闭热盖，确保压力适中。

2. 软件操作

• 启动 SLAN-48P 配套软件。

• 新建实验项目，输入实验名称、日期及样本编号。

• 设定实验类型（定性、定量、熔解曲线）。

• 输入热循环程序与荧光采集点。

• 保存并检查参数，确认无误后启动实验。

3. 实验运行

• 实验过程中实时监控扩增曲线。

• 若出现阴性对照扩增，应立即记录并评估实验有效性。

• 整个运行过程通常耗时 1.5–2 小时。

六、数据分析与结果解读

1. Ct 值分析

• Ct（阈值循环数）反映模板初始浓度。

• 阴性对照 Ct 值应为无扩增。

• 阳性对照 Ct 值应稳定在合理范围。

2. 标准曲线

• R² ≥ 0.99，扩增效率在 90–110%。

• 梯度稀释标准品用于定量计算。

3. 熔解曲线

• 单一峰：产物特异性好。

• 多峰：存在非特异性扩增或引物二聚体。

4. 报告生成

• 软件自动生成报告，包括扩增曲线、熔解曲线、Ct 值表格。

• 可导出为 Excel 或 PDF，方便归档与共享。

七、常见问题与解决方案

1. 无扩增曲线

• 检查模板是否降解。

• 确认体系配置是否正确。

2. Ct 值过高

• 模板量不足。

• 退火温度过高。

3. 阴性对照扩增

• 存在污染，应重新实验。

• 检查操作环境是否洁净。

4. 熔解曲线异常

• 可能是引物二聚体。

• 优化退火温度或重新设计引物。

八、安全规范

• 操作人员必须佩戴手套与口罩。

• 样品与废弃物须经高压灭菌处理。

• 荧光染料避免直接接触皮肤与眼睛。

• 实验结束后清理工作台，保持环境整洁。

九、维护与保养

1. 日常维护

• 实验后用无水乙醇清洁热循环模块。

• 光学窗口避免直接接触，若有污染用镜头纸轻拭。

1. 定期维护

• 每 3–6 个月进行一次温度校准。

• 每年进行一次光学校准。

• 定期检查软件版本，保持最新。

1. 存放要求

• 长期不用时关闭电源并覆盖防尘罩。

• 存放环境干燥，无腐蚀性气体。

十、总结

SLAN-48P 荧光定量 PCR 仪作为一款高性能的检测设备，其系统操作规范涵盖了 实验准备—参数设置—运行流程—数据分析—安全管理—维护保养 的完整环节。严格遵守操作指南能够确保实验结果的准确性和可重复性，同时延长仪器使用寿命。

在临床检测、基础科研、食品安全及公共卫生领域，SLAN-48P 已被证明是一款高效可靠的工具。规范化操作是其发挥最大价值的前提，实验室应将本指南纳入日常管理制度，并对人员进行持续培训。