宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中等通量的实时荧光定量PCR检测平台，广泛应用于医学检测、食品安全、环境监测和科研实验。设备的稳定性能为核酸检测提供了可靠保障，但若操作不当，极易导致实验失败或结果偏差。正确掌握操作注意事项，不仅能确保实验结果的准确性和可重复性，也能延长设备寿命，减少维护成本。
本文将从实验前准备、运行操作、数据分析、设备维护和常见问题五个维度展开，全面阐述SLAN-48P的操作注意事项，为实验人员提供系统化指导。
实验室应分区设置，包括试剂准备区、样品处理区和扩增检测区。
保持室内温度和湿度稳定，避免过高湿度导致设备内部结露。
桌面需平整稳固，避免设备运行时震动。
使用厂家推荐的48孔板或光学管，确保透光率和耐温性能。
所有试剂需在有效期内，避免使用变质或污染的试剂。
荧光探针需避光保存，避免荧光基团光漂白。
样品提取的核酸应质量合格，浓度适中，OD260/280比值在1.8–2.0之间为宜。
RNA实验需严格防止RNA酶污染，耗材应预处理。
样品编号要规范，避免加样过程中出现混淆。
开机前确认电源电压稳定，不使用劣质插排。
检查温控模块是否干净，光学窗口是否清洁。
若设备长期未使用，建议先运行一次自检程序。
使用带滤芯的枪头，每次移液更换新枪头，避免交叉污染。
加样时保持轻柔，防止产生气泡。
液体需准确落在孔底中央，避免挂壁。
阴性对照（无模板）用于监控污染情况。
阳性对照用于验证体系有效性。
内参基因用于校正样品间差异。
使用光学透明膜或管盖，确保密封性。
封板后用专用工具压紧，避免气泡或液体溢出。
禁止多次揭膜，避免蒸发和污染。
初始变性：95℃，2–3分钟；
扩增循环：95℃变性10–15秒，55–60℃退火/延伸30秒，共40–45次循环；
梯度功能可用于优化退火温度。
确认荧光通道与染料匹配，避免通道设置错误。
实验运行过程中，应实时观察扩增曲线。
若曲线基线波动过大，需检查移液操作和封板质量。
实验进行中不随意开启反应仓，以免影响温控稳定性。
理想曲线呈“S”型，基线平稳，指数期陡升。
异常曲线可能提示反应效率不足或体系污染。
Ct值小于35通常为阳性，超过38需谨慎判定。
平行孔Ct差异应小于0.5，否则需检查移液误差。
单峰表示扩增特异性好；
多峰或拖尾提示非特异性扩增或引物二聚体。
扩增效率应在90%–110%之间，R²大于0.99。
异常效率需优化体系或重新设计引物。
数据应及时导出并保存，建议双重备份。
报告需包括Ct值表格、扩增曲线、熔解曲线和实验条件说明。
每次实验后清洁温控模块和光学窗口，避免残留物影响检测。
外壳用无尘布擦拭，保持整机清洁。
每季度检查一次温度均一性。
光学模块每半年校准一次，保证检测灵敏度。
软件定期更新，获得新功能和修复补丁。
长期停机需断开电源，保持干燥。
避免阳光直射和高温潮湿环境。
操作时需佩戴实验服、手套和口罩。
使用荧光染料和核酸样品时，应严格遵守实验室生物安全规范。
废液和耗材需分类收集，按规定处理。
无扩增信号
检查是否加模板或酶；
确认循环程序是否正确。
Ct值偏高
模板降解或浓度过低；
Mg²⁺不足或退火温度过低。
熔解曲线异常
引物设计不合理；
存在二聚体或非特异性产物。
孔间差异大
样品加样不均一；
封膜不严，导致蒸发。
数据导出失败
检查存储设备或接口；
软件卡顿时重启再导出。
SLAN-48P的运行结果不仅依赖于仪器硬件本身，更取决于实验人员是否掌握规范的操作技巧。注意事项应贯穿实验全流程：
实验前需准备规范、环境达标；
实验中需移液准确、程序设置合理、实时监控曲线；
数据分析需科学解读，确保结果可信；
设备维护与安全管理需长期坚持，保障系统性能。
通过严格遵守操作注意事项，实验人员能够充分发挥SLAN-48P的优势，获得高质量、可重复的实验数据，为临床诊断和科研工作提供可靠支持。
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