宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量的实时荧光定量PCR系统，具有体积小巧、操作简便、检测灵敏度高的特点，适合中小型实验室或临床科室使用。与96通量机型相比，SLAN-48P在保持性能稳定的同时更注重操作效率和节省试剂。为了确保实验顺利进行，以下将对实验步骤进行详细说明。
温度保持在18–30℃之间，湿度控制在30%–80%。
实验台面需坚固、防震，避免靠近强电磁干扰设备。
保持空气流通，避免灰尘堆积，确保环境洁净。
确认SLAN-48P放置平稳，通风口畅通。
检查电源线和通信线连接牢固。
打开电源开关，观察自检过程是否正常。
确认软件能正常识别仪器。
耗材：48孔专用反应管、光学透明盖或封膜。
试剂：定量PCR预混液、dNTP、Taq酶、荧光染料或探针。
样品：提取后的DNA或RNA，RNA需先反转录为cDNA。
阴性对照：不含模板，仅含体系。
阳性对照：含标准模板，验证体系是否有效。
重复设置：建议每个样品设置至少两个重复孔。
在洁净区内操作，避免污染。
使用移液器依次加入反应体系各组分。常见体系为20µL：
预混液：10µL
上游引物：0.5µL
下游引物：0.5µL
探针或荧光染料：0.5–1µL
模板：2–5µL
ddH₂O补足至20µL
加样需轻柔，避免产生气泡。
配置后使用离心机短暂离心，使液体沉底。
加样过程中每次更换吸头，防止交叉污染。
打开配套软件，点击“新建实验”。
输入实验名称、操作者姓名和保存路径。
可设置标签，方便后续查找。
初始变性：95℃，2–3分钟。
循环阶段：
变性：95℃，10–15秒；
退火：55–65℃，20–30秒；
延伸：72℃，20–30秒。
循环次数：35–45次，根据实验需求设定。
荧光采集点：一般设置在退火或延伸阶段。
软件支持多通道检测，如FAM、HEX、ROX、CY5。
根据实验方案为不同靶标分配通道。
每个孔位可同时设定一个或多个通道。
在软件界面中点击48孔反应布局图，逐一输入样品名称。
标记阴性、阳性对照，避免分析时混淆。
可以使用颜色标注不同组别。
将配置好的反应管或反应板轻放入样品仓。
检查放置方向是否正确。
关闭并锁紧舱盖，避免实验中途蒸发或泄漏。
在软件中点击“开始运行”。
仪器进入自动加热循环并采集荧光信号。
实验期间软件显示实时扩增曲线，便于监控。
在反应进行中，曲线逐渐上升。
阳性对照应在预期Ct范围内出现曲线。
阴性对照应无明显信号。
软件显示当前循环的温度变化曲线。
控温精度决定扩增结果可靠性。
实时显示运行进度、剩余时间、循环次数。
若出现异常，软件会报警提示。
典型扩增曲线：S型，基线稳定，指数增长明显。
异常曲线：平直或波动，需排查原因。
软件自动识别阈值线，计算Ct值。
用户可根据曲线状态手动调整阈值。
使用不同浓度标准模板建立标准曲线。
输出相关系数R²和扩增效率。
R²≥0.98，效率90%–110%为理想值。
单峰表示产物特异性好。
多峰或拖尾提示存在非特异性扩增或引物二聚体。
支持Excel、PDF、Word、图片格式导出。
报告包含Ct值表格、扩增曲线、熔解曲线、标准曲线。
模板量不足或降解。
试剂失效或配比错误。
热循环参数不合理。
说明有非特异性扩增。
解决方法：优化退火温度，重新设计引物。
加样体积不一致，操作不规范。
封膜不严导致蒸发。
检查通信线缆。
关闭电源与软件，重新启动。
取出反应管，妥善处理废弃物。
用无水乙醇清洁样品仓。
定期检查电源和散热系统。
保持仪器外表清洁，防止灰尘积聚。
定期擦拭光学检测窗口，避免污染影响检测。
不可使用腐蚀性清洁剂。
切断电源，覆盖防尘布。
存放环境干燥通风，避免潮湿损坏。
SLAN-48P的实验步骤适用于多种分子检测场景：
临床检测：新冠病毒、流感病毒、结核分枝杆菌核酸检测。
基因研究：基因分型、SNP检测、突变筛查。
肿瘤学：基因突变与融合检测。
食品安全：转基因成分检测、致病菌监控。
药物研发：基因表达定量，药物作用机制研究。
宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P以其便捷的操作流程和高灵敏度检测能力，为科研和临床实验提供了可靠工具。从实验前准备到结果分析，每一步都需要严格遵循规范。通过标准化的操作流程，实验者能够获得准确、可重复的结果。与此同时，合理维护和正确使用也能延长仪器使用寿命，使其在分子检测领域发挥长期价值。
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