宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P操作培训资料

一、培训背景

实时荧光定量PCR技术已成为分子生物学和临床检验的核心检测手段。宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量实时检测平台，具备稳定的温控系统和多通道荧光采集能力，能够满足科研与医学检测对核酸定量分析的需求。
在实验室管理中，只有通过系统化的培训，确保实验人员熟悉SLAN-48P的操作流程、数据处理与维护要点，才能保证实验结果的准确性和可重复性。编写本培训资料的目的，是帮助操作者从零起步，逐步掌握SLAN-48P的使用方法，并提升实验室的整体检测水平。

二、培训目标

1. 了解SLAN-48P的整体结构、功能特点和适用范围。

2. 熟练掌握样品制备、反应体系配置和加样操作。

3. 独立完成仪器的程序设定与实验运行。

4. 学会读取扩增曲线、判断Ct值并进行数据分析。

5. 掌握常见问题的排查与解决方法。

6. 熟悉仪器的维护与保养，延长使用寿命。

三、仪器构造与功能

1. 样品仓

• 可容纳48孔反应板或相应管架。

• 温度均一性强，确保各孔反应条件一致。

2. 光学模块

• 配备多通道荧光检测系统，可同时监测不同染料信号。

• 常用通道包括FAM、HEX/VIC、ROX、Cy5。

3. 温控系统

• 采用精密控温技术，升降温速率稳定。

• 温差误差小于±0.2℃，保证扩增效率一致。

4. 软件平台

• 提供实验程序设定、实时曲线显示、Ct值计算、标准曲线生成和融解曲线分析功能。

• 支持数据导出与报告生成。

四、实验前准备

1. 环境要求

• 保持实验室清洁，分区操作，避免气溶胶污染。

• 控制温湿度在合适范围内。

1. 耗材准备

• 48孔反应板或专用管。

• 光学透明封板膜。

• 无RNAse、DNAse吸头和移液器。

1. 样品准备

• 提取高质量DNA或RNA。

• 检测核酸浓度与纯度，确保样品适合PCR扩增。

1. 软件设定

• 打开SLAN-48P软件，创建新实验文件夹。

• 检查实验模板是否更新。

五、操作流程

1. 配制反应体系

• 每孔总体积一般为20–25 μL。

• 按照配方加入缓冲液、dNTP、引物、探针、Taq酶和模板。

• 设置阳性对照、阴性对照和无模板对照。

2. 加样与封板

• 精准移液，避免气泡。

• 用光学膜密封反应板，并进行短暂离心。

3. 程序设定

• 初始变性：95℃，2–3分钟。

• 循环步骤：95℃ 10秒，55–65℃ 30秒，40–45次。

• 选择对应荧光通道。

4. 启动实验

• 将反应板置入样品仓。

• 关闭仓盖，点击软件“运行”。

• 实时监控扩增曲线。

5. 数据采集

• 软件自动记录荧光强度与循环数。

• 实验结束后生成扩增曲线、Ct值与标准曲线。

六、数据分析

1. 扩增曲线

• 标准“S”型曲线表明扩增成功。

• 平滑上升并进入平台期为理想状态。

2. Ct值

• 系统自动计算阈值并给出Ct值。

• Ct值小表示模板浓度高。

3. 标准曲线

• 用已知浓度样品绘制曲线，斜率约-3.3为最佳。

• R² > 0.99，表明线性良好。

4. 融解曲线

• 单一峰值代表特异性扩增。

• 多峰或拖尾提示引物二聚体或非特异性。

5. 报告生成

• 导出Excel、PDF或图片格式，便于存档与共享。

七、常见问题与解决方案

1. 无扩增曲线

• 检查模板质量、引物设计和酶活性。

1. Ct值过高

• 模板量不足或降解。

• 阈值设置过高。

1. 重复性差

• 加样不均匀或存在气泡。

• 板膜未贴紧。

1. 信号干扰

• 光学窗口受污染。

• 通道设置错误。

八、维护与保养

1. 日常维护

• 实验后擦拭样品仓。

• 保持光学窗口清洁。

1. 定期校准

• 温控系统和光学系统需定期检测。

• 使用标准品进行性能验证。

1. 软件维护

• 定期升级至最新版。

• 建立数据分类与备份机制。

九、应用案例

案例一：呼吸道病毒检测

通过特异性探针检测呼吸道病毒RNA，Ct值在22–25范围，结果显示阳性。

案例二：肿瘤基因表达

对肿瘤组织样品进行检测，目标基因与内参基因比较后发现相对表达量显著升高。

案例三：食品转基因成分分析

检测转基因元件，扩增曲线典型，Ct值与标准曲线吻合，判断为转基因阳性。

十、培训考核

1. 理论测试
   涵盖仪器结构、实验原理、程序设定与数据分析。

2. 操作考核
   独立完成一次完整实验，包括加样、设定程序、运行与导出数据。

3. 结果解读
   根据扩增曲线与Ct值，撰写简短实验分析报告。

十一、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量、稳定可靠的核酸检测平台。通过本次培训资料的学习，实验人员能够：

• 掌握SLAN-48P的结构与功能；

• 独立完成实验操作流程；

• 准确进行数据分析与结果解读；

• 熟悉常见问题排查与维护保养方法。

在科研与临床实践中，SLAN-48P的应用不仅能提高实验效率，也能确保数据的科学性和可靠性。通过规范化培训与标准化操作，实验室整体水平将得到显著提升，为分子检测与精准医学提供坚实支持。