宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款高性能的实时荧光定量PCR系统，广泛应用于分子诊断、基因研究、病原体检测和药物研发等领域。为了获得稳定、准确的实验结果，必须遵循标准化的实验步骤。本教程从实验前准备到数据分析，完整梳理SLAN-96R的实验操作流程。
温湿度要求：温度保持在18–30℃，湿度30%–80%。
台面条件：台面稳固、防震，避免磁场和电磁干扰。
清洁要求：实验区应定期清洁，避免灰尘、气溶胶污染。
确认SLAN-96R电源线、通信线连接牢固。
检查样品仓是否清洁，无液体残留。
打开电源，观察自检状态是否正常。
耗材：96孔反应板或八联管，光学封板膜。
试剂：PCR预混液、dNTP、Taq酶、引物、探针/荧光染料。
样品：提取的DNA或RNA（RNA需先反转录）。
阴性对照：不含模板，仅含体系。
阳性对照：含已知浓度模板，用于判断实验体系有效性。
在洁净区内操作，穿戴防护服、手套。
使用移液器准确加入各组分：缓冲液、引物、探针、酶、模板。
最终体系体积常见为20µL或25µL。
加样前需轻轻混匀，避免剧烈震荡。
使用新鲜吸头，避免交叉污染。
设置至少三个重复孔，提高数据可靠性。
配置完成后，将反应板放入离心机，短暂离心5–10秒。
通过离心消除气泡，使液体沉底。
打开配套软件，点击“新建实验”。
输入实验名称、保存路径，便于后续数据管理。
初始变性：95℃，2–5分钟。
循环阶段：
变性：95℃，10–15秒；
退火：55–65℃，20–30秒；
延伸：72℃，20–30秒。
循环次数：35–45次，视实验需求而定。
采集点一般设在退火或延伸阶段。
支持FAM、HEX、ROX、CY5等通道。
若进行多重检测，需为不同靶标分配独立通道。
在96孔板界面中输入样品编号。
指定每个孔位的实验组别和对照类型。
用颜色标注不同样品，方便区分。
将反应板放入SLAN-96R样品仓。
确认放置方向与仪器标识一致。
关闭舱盖，确保密封良好。
点击“开始运行”。
仪器自动执行加热循环并采集荧光信号。
软件界面显示曲线逐渐上升。
指标：对照孔状态正常，曲线呈指数型。
仪器显示每个循环的温度变化。
若控温异常，实验需暂停检查。
状态栏提示实验进度和剩余时间。
出现异常时，系统自动报警。
阴性对照：应无信号。
阳性对照：Ct值应在合理范围内。
样品曲线：呈典型S型，表明扩增成功。
软件自动识别阈值线并计算Ct值。
用户可手动调整阈值线，以优化分析。
输入标准品浓度，绘制标准曲线。
相关系数R²应≥0.98。
PCR效率在90%–110%为理想范围。
检查产物特异性。
单一峰值表明特异性良好；多峰提示存在非特异扩增。
支持Excel、PDF、Word、图像格式。
导出的文件包含Ct值表格、扩增曲线、熔解曲线等。
模板浓度过低，需提高输入量。
检查引物设计与试剂有效性。
提高退火温度，优化反应条件。
重新设计引物或探针。
加样体积不一致。
存在气泡或封膜不严。
检查通信线缆。
关闭软件与仪器电源后重新启动。
取出反应板，清理样品仓。
使用无水乙醇擦拭光学窗口。
定期检查电源与散热系统。
保持仪器外部清洁，防止灰尘积聚。
按厂家要求进行光学系统和温控校准。
保证长期使用的稳定性和准确性。
切断电源，覆盖防尘布。
存放在干燥、通风环境中。
SLAN-96R实验步骤不仅适用于常规基因检测，还可拓展至：
病原体检测：病毒、细菌核酸快速检测。
遗传病研究：突变筛查、基因分型。
肿瘤检测：突变位点与融合基因分析。
药物研发：基因表达定量、药效评估。
食品安全：转基因成分和致病菌检测。
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R的实验步骤涵盖准备、配置、运行、分析与维护五大环节。每一步都直接关系到实验结果的准确性与可靠性。只有在严格遵循规范操作的前提下，才能保证Ct值计算合理、扩增曲线清晰、熔解曲线特异，从而在临床诊断、科研实验和教学培训中充分发挥其应用价值。
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