宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R使用说明
时间:2025-08-23

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R使用说明

一、设备概述

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款基于实时荧光检测技术的高性能核酸扩增与定量分析设备,采用96孔标准样品盘结构,适合临床诊断、科学研究及教学培训。该仪器集高精度温控、灵敏荧光检测、智能化分析软件于一体,能够实现病原体检测、基因表达分析、基因分型及突变筛查等多种功能。
SLAN-96R设计兼顾高通量与灵活性,既能满足临床批量检测,也能支持科研探索中的个性化实验方案,是分子实验室的核心设备之一。

二、实验前准备

  1. 环境准备

    • 仪器应放置在平稳台面,避免震动。

    • 室温保持在18–28℃,湿度控制在40%–70%。

    • 避免阳光直射和强磁场干扰。

  2. 耗材与试剂

    • 使用标准96孔PCR反应板或适配管。

    • 样品需经过高质量核酸提取,保证纯度。

    • 配制反应体系时使用无核酸酶水。

  3. 人员准备

    • 操作者需接受培训,熟悉PCR原理与操作规程。

    • 穿戴实验服、手套,避免污染。

三、操作步骤

  1. 开机与自检

    • 打开电源开关,系统自动运行自检程序。

    • 若发现异常,界面会提示相应信息。

  2. 反应体系配置

    • 在无核酸酶工作台中配置体系。

    • 根据实验需求选择SYBR Green或TaqMan探针体系。

  3. 上样

    • 将配置好的反应体系加入96孔板,每孔体积通常为10–50 μL。

    • 封板膜要压紧,避免蒸发或交叉污染。

  4. 放置样品板

    • 打开样品仓,放置96孔板。

    • 确认孔板方向与定位标记一致。

  5. 设置实验程序

    • 通过触控屏或外接计算机输入实验参数。

    • 包括循环程序、荧光采集点、熔解曲线等。

  6. 运行实验

    • 点击“开始”,系统进入扩增程序。

    • 实验过程可实时监控荧光信号。

  7. 实验结束

    • 程序完成后,系统自动保存结果。

    • 取出样品板并妥善处理。

四、参数设置

  1. 循环程序

    • 预变性:95℃,1–2 min。

    • 变性:95℃,15–30 s。

    • 退火/延伸:55–65℃,30–60 s。

    • 循环次数:35–45次。

  2. 荧光采集

    • SYBR Green体系:退火或延伸阶段采集。

    • TaqMan体系:延伸阶段采集。

  3. 熔解曲线

    • 60–95℃逐步升温,每步0.3–0.5℃,实时记录荧光。

    • 用于检测非特异性扩增和引物二聚体。

  4. 样品信息

    • 输入样品编号、对照、标准品信息。

    • 系统支持批量导入Excel表格。

五、结果分析

  1. 扩增曲线

    • 通过Ct值判断目标基因的存在与丰度。

    • 曲线应平滑并在指数期出现明显上升。

  2. 标准曲线

    • 用于绝对定量分析。

    • 相关系数R²应大于0.99,扩增效率在90%–110%之间。

  3. 熔解曲线

    • 单一峰表示扩增特异性良好。

    • 多峰提示存在非特异性产物。

  4. 统计学分析

    • 相对定量实验需进行ΔCt或ΔΔCt分析。

    • 数据需结合重复实验进行验证。

六、注意事项

  1. 样品制备阶段要防止交叉污染。

  2. 上样时避免气泡,以免影响光学检测。

  3. 每块板必须设置阳性、阴性和无模板对照。

  4. 实验过程中不得随意开关样品仓。

  5. 实验结束后立即导出数据备份。

七、常见问题与解决

  1. 无扩增曲线

    • 检查模板质量与体系配置。

    • 确认程序参数输入正确。

  2. 曲线不规则

    • 可能由样品污染或试剂失效导致。

    • 建议重新制备体系。

  3. 重复间差异大

    • 检查移液操作是否规范。

    • 确认孔板是否密封良好。

  4. 熔解曲线异常

    • 优化退火温度。

    • 重新设计引物。

八、维护与管理

  1. 日常维护

    • 清洁仪器表面,保持通风。

    • 定期检查光学窗口,避免灰尘污染。

  2. 定期校准

    • 使用标准荧光板校准光学系统。

    • 使用温度探针验证加热模块均一性。

  3. 软件升级

    • 保持系统软件最新版本。

    • 升级前做好数据备份。

  4. 数据安全

    • 建立多重备份机制,防止实验数据丢失。

    • 管理员应定期清理和检查用户账户。

九、不同应用场景下的使用方法

  1. 临床检测

    • 多用于病原体核酸检测,如病毒、细菌感染的快速诊断。

    • 要求严格的对照体系与标准化操作。

  2. 科研研究

    • 适合基因表达分析、突变检测、药物反应研究。

    • 实验设计灵活,数据分析需结合统计学工具。

  3. 教学培训

    • 用于展示实时荧光定量扩增过程。

    • 设计简化的教学实验方案,提高直观性。


总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R作为一款专业分子检测设备,其使用说明涵盖了从实验准备到数据分析的全流程。科学、规范的操作不仅能保障实验结果的准确性,还能延长设备寿命,减少故障率。无论是在临床诊断、科研探索还是教学培训中,SLAN-96R都能通过规范的使用方式发挥其最大价值。


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