荧光定量PCR（Real-time PCR, qPCR）是一项广泛应用于分子生物学、医学检验和生物制药领域的关键技术。通过对目标DNA或RNA扩增过程中的荧光信号进行实时监测，可以实现核酸定量和特异性分析。宏石SLAN-96R作为一款高性能荧光定量PCR仪，不仅具备可靠的硬件系统，还配套了功能完善的软件，为科研、教学和临床提供了全面支持。
为了帮助学习者掌握SLAN-96R的操作方法，本文设计了一套系统化的实验教程，涵盖实验准备、操作流程、数据分析和结果解读，适合作为培训教材或实验室标准操作参考。
学习SLAN-96R的基本操作流程；
掌握实验方案的建立与参数设置；
熟悉样本上机、扩增监控与结果获取方法；
能够独立进行Ct值判读和熔解曲线分析；
形成数据保存与实验总结的规范流程。
荧光定量PCR基于聚合酶链式反应（PCR）原理，通过循环反应使目标核酸片段不断扩增。不同于传统PCR，qPCR在反应过程中通过荧光染料或探针的信号变化来实时反映扩增进程。
Ct值（Cycle threshold）：扩增曲线荧光信号首次超过阈值的循环数，间接反映起始模板的丰度。
标准曲线：通过已知浓度梯度的样品绘制，用于定量未知样品。
熔解曲线：通过逐步升温检测产物的熔解特性，用以判断扩增的特异性。
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R；
微量移液器及吸头；
96孔PCR反应板或8联管；
离心机、冷冻保存箱。
PCR反应混合液（含缓冲液、dNTPs、聚合酶）；
荧光染料或探针（如SYBR Green或TaqMan探针）；
模板DNA或cDNA；
引物对；
阴性对照与阳性对照。
提取并纯化目标核酸，检测浓度与纯度；
稀释至合适工作浓度；
分配至反应体系中，加入反应混合液与引物。
将样本分装至96孔板或联管中，标注样本编号；
设置阳性、阴性对照，确保实验结果的可靠性；
用薄膜或盖板密封，离心去除气泡。
打开SLAN-96R软件，新建实验；
输入实验名称、操作者信息、实验编号；
在板型界面中录入样本信息，对应孔位编号；
设置反应体系，包括变性、退火和延伸的温度及时间；
选择荧光通道，如FAM、HEX、ROX等；
保存方案并启动实验。
仪器自动完成循环反应和荧光信号采集；
软件实时绘制扩增曲线，用户可观察荧光上升趋势；
系统显示剩余时间与温度变化。
观察曲线S型特征，判断扩增是否正常；
对比阴性对照和阳性对照，确认实验有效性；
自动计算各样本Ct值。
使用已知浓度样本绘制标准曲线；
根据斜率与截距推算未知样本的初始模板量；
检查相关性系数R²，评估实验可靠性。
单峰提示特异性扩增；
多峰或拖尾说明存在非特异性产物或引物二聚体。
软件支持一键生成实验报告；
报告内容包括实验信息、Ct值表格、扩增曲线和熔解曲线；
可导出为PDF、Excel或Word格式，便于归档。
样本：对照组与处理组细胞RNA；
操作：反转录为cDNA，设定内参基因与目标基因；
结果：通过ΔΔCt方法比较两组表达水平。
样本：疑似感染者拭子样本；
操作：设置阴阳性对照，检测特定病原基因；
结果：Ct值≤阈值判定为阳性，否则为阴性。
样本：单一模板DNA；
操作：扩增后查看熔解曲线；
结果：熔解峰单一，说明扩增特异性良好。
无扩增信号
检查模板是否存在；
核实引物和试剂是否失效。
Ct值差异过大
确认移液操作是否准确；
检查样品浓度是否均一。
熔解曲线多峰
重新设计引物；
优化退火温度。
背景信号过高
确认试剂无污染；
调整阈值线。
实验室环境应无RNA/DNA污染；
样本处理与反应配置需在不同区域完成；
试剂应低温保存，避免反复冻融；
上机前应确保反应板密封良好；
实验完成后及时保存并备份数据。
SLAN-96R荧光定量PCR仪通过简便的操作和直观的软件界面，使用户能够快速开展核酸检测实验。本实验教程的设计，旨在帮助学习者掌握实验流程，从样本准备到结果分析均形成标准化操作习惯。通过多次练习，学生或实验人员可以逐渐熟练掌握Ct值判读、熔解曲线分析与标准曲线绘制，为科研探索和临床应用奠定坚实基础。
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