宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R作为分子诊断与科研实验的核心设备，以其稳定性与高灵敏度在临床与实验室广泛应用。尽管该设备功能强大，但实验人员的操作水平对最终结果影响极大。正确的实验技巧不仅能保证数据准确性，还能显著降低重复性差、曲线异常或结果偏差的发生率。
本文系统梳理了SLAN-96R在日常使用中的实验技巧，旨在为实验人员提供可操作的经验指导。
设备预检
开机前检查温控模块是否干净，无水汽和杂质。
确认光学窗口清洁，避免灰尘或指纹影响检测。
长期停机后重新使用，建议运行一次自检程序。
试剂与耗材
所有试剂提前从低温保存状态取出，自然融化，不可用手搓或高温加速。
使用厂家推荐的光学反应板与封板膜，确保透光性能和密封性。
枪头必须带滤芯，以防止气溶胶污染。
样品准备
提取的核酸应完整，OD260/280在1.8–2.0之间较佳。
高度降解的模板会造成扩增效率低下，应重新提取。
RNA实验需全程防RNase，耗材预处理至关重要。
体积控制
常规反应体积为20 µL，体系过小会影响热传导，过大会导致蒸发风险。
加样后检查液滴位置，确保位于孔底中央。
引物设计与浓度
推荐引物长度18–25个碱基，GC含量40%–60%。
浓度一般为0.1–0.5 µM，过高易形成二聚体。
探针优化
若使用TaqMan探针，探针浓度一般控制在0.1–0.25 µM。
避免荧光基团与淬灭基团过于接近，降低检测灵敏度。
Mg²⁺浓度调节
过低会影响酶活性，过高则增加非特异性扩增。
在梯度实验中逐步优化浓度，确定最佳条件。
移液操作
每次移液要换新枪头，避免交叉污染。
吸样时避免空气进入枪头；加样时保持轻柔，减少液滴飞溅。
板膜封装
使用光学透明封板膜，封板后用专用工具压紧，确保无气泡和缝隙。
不要反复揭膜，以免导致蒸发。
对照设置
阴性对照（无模板对照）是必不可少的，用于监控污染情况。
阳性对照保证体系有效性。
标准循环程序
初始变性：95℃ 2–3分钟；
扩增循环：95℃ 10–15秒，退火/延伸 55–60℃ 30秒；
循环次数：一般为40–45次。
退火温度优化
建议通过梯度温控功能，在55–65℃之间筛选最佳条件。
选择扩增效率最高且特异性最佳的温度。
通道选择
根据荧光染料选择对应检测通道，避免通道交叉。
若为多重反应，需确认荧光信号互不干扰。
实验进行中，及时观察扩增曲线走势，发现异常应暂停排查。
若曲线基线不稳，可能与反应体系配置或污染有关。
防止蒸发
确保封膜牢固，避免因蒸发导致荧光信号偏差。
高温退火阶段特别要注意密封性。
避免中途开盖
一旦实验运行，不要随意开启反应仓，以防温控受扰。
Ct值判断
一般情况下，Ct值小于35为阳性信号；
超过38的Ct值需谨慎判断，可能为低浓度或污染。
扩增曲线
理想曲线为典型“S”型，基线平稳，指数期陡升，平台期平缓。
若曲线缓慢上升，说明反应效率不足。
熔解曲线分析
单一峰值代表特异性扩增；
出现多个峰提示引物二聚体或非特异性产物，需要优化。
重复性考察
平行孔Ct值差异应控制在0.5以内，差异过大需排查移液操作或样品质量。
无扩增信号
检查是否加模板或酶；
确认程序是否设置正确。
Ct值偏高
模板浓度过低或降解；
Mg²⁺不足或反应体系不佳。
熔解峰异常
调整退火温度，优化引物设计；
降低引物浓度减少二聚体形成。
孔间差异大
确认加样均一性；
检查反应板是否受热不均或封膜不牢。
数据保存
实验完成后立即导出数据并备份。
保存原始扩增曲线，便于后续比对。
设备清理
及时清理样品仓内的液体残留；
用无尘布擦拭光学窗口，保持清洁。
试剂管理
使用后的试剂立即放回低温保存环境；
避免反复冻融，建议分装保存。
日常维护
每周检查一次光学系统与温控模块；
保持实验室环境干燥，避免高湿影响。
定期校准
定期进行温度与荧光校准，确保数据准确。
软件升级后需重新验证性能。
停机保养
长期不用时，断开电源，置于干燥环境；
光学部件需避免强光直射。
SLAN-96R荧光定量PCR仪在性能上已具备高精度与高灵敏度，但实验人员的操作技巧决定了其发挥程度。关键要点包括：
实验前：试剂、耗材与设备的充分准备；
实验中：精确移液、优化程序设定、实时监控曲线；
实验后：科学解读数据、妥善保存结果、做好设备清洁；
长期使用：重视维护与校准，保障设备持久性能。
只有在硬件性能与操作技巧的双重保障下，才能获得稳定、可靠的实验数据，为科研与临床应用提供坚实支撑。
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