宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R实验报告
时间：2025-08-23

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R实验报告

一、实验背景

随着分子生物学的发展，核酸检测已经成为疾病诊断、基因研究和食品安全检测的重要手段。荧光定量PCR（qPCR）技术因其灵敏度高、特异性好、可实时监测扩增过程而成为主流方法。宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款高通量实时定量检测平台，广泛用于临床和科研领域。

撰写本实验报告的目的在于全面记录SLAN-96R的实验操作过程与结果，并对数据进行系统分析，为实验室后续操作和科研提供参考依据。

二、实验目的

  1. 熟悉SLAN-96R的操作流程与软件界面。

  2. 完成样品核酸的检测并获得Ct值。

  3. 建立标准曲线，评价扩增效率与线性。

  4. 通过融解曲线分析产物特异性。

  5. 总结实验结果并讨论可能的问题。

三、实验原理

  1. PCR扩增
    PCR通过循环的变性、退火和延伸实现靶核酸的指数级扩增。

  2. 实时荧光检测
    在扩增体系中引入荧光染料或探针。随着靶序列数量增加，荧光信号逐渐增强，由仪器实时捕捉。

  3. Ct值计算
    Ct值代表荧光信号超过阈值时的循环数。Ct值与初始模板浓度呈反比。

  4. 标准曲线分析
    已知浓度的系列稀释模板可建立Ct值与浓度的线性关系，用于定量未知样品。

  5. 融解曲线分析
    升温过程中监测双链解离信号，根据融解温度判断扩增产物特异性。

四、实验材料与方法

1. 仪器与耗材

  • 宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R

  • 专用计算机与分析软件

  • 96孔光学反应板、透明封板膜

  • 微量移液器与无RNAse/DNAse吸头

  • 样品离心管

2. 试剂

  • 核酸提取试剂盒

  • PCR Master Mix（含dNTPs与缓冲液）

  • Taq DNA聚合酶

  • 特异性引物与探针

  • 阳性对照与阴性对照

3. 样品制备

  • 提取血液或组织的DNA/RNA

  • 检测核酸浓度与纯度，确认合格后使用

五、实验操作步骤

1. 反应体系配置

  • 每孔体系总量设为 25 μL

  • 包含成分：2×Mix、引物、探针、模板DNA、酶

  • 加入对照组：阳性对照和无模板对照

2. 加样与封板

  • 按实验设计加样至反应板

  • 使用光学膜封口，避免蒸发

  • 轻轻离心确保体系集中于孔底

3. 仪器设定

  • 打开SLAN-96R软件，新建实验文件

  • 输入样品名称与孔位对应关系

  • 设定程序：

    • 初始变性：95℃ 3分钟

    • 循环40次：95℃ 10秒，60℃ 30秒

  • 选择荧光通道并保存

4. 实验运行

  • 将反应板放入仪器

  • 启动运行，实时监测扩增曲线

  • 实验约需 1.5–2 小时完成

六、实验结果

1. 扩增曲线

  • 阳性对照显示典型“S”型曲线

  • 阴性对照无信号上升

  • 待测样品荧光信号逐渐增强，表明扩增成功

2. Ct值结果

  • 阳性对照Ct值集中在20左右

  • 待测样品Ct值分布在22–30之间，符合预期

  • 阴性对照无Ct值

3. 标准曲线

  • 用系列稀释模板绘制Ct值-对数浓度曲线

  • 斜率约为-3.35，扩增效率约98%

  • R²=0.995，线性良好

4. 融解曲线

  • 融解曲线为单峰，说明产物特异性良好

  • 未见杂峰或拖尾现象

七、数据分析

  1. 灵敏度
    最低检测浓度约为10² copies/反应，显示高灵敏度。

  2. 特异性
    融解曲线结果确认扩增产物单一，无非特异扩增。

  3. 重复性
    重复孔间Ct值差异小于0.5，实验重复性良好。

  4. 定量结果
    通过标准曲线换算，计算出未知样品拷贝数，结果与理论值一致性高。

八、常见问题与解决

  1. 无扩增曲线

  • 检查模板质量与浓度

  • 确认引物设计与酶活性

  1. Ct值过高

  • 模板浓度过低或降解

  • 反应体系比例不合理

  1. 重复性差

  • 加样不均匀或操作失误

  • 反应板封膜不严

  1. 曲线异常

  • 存在气泡或耗材污染

  • 光学窗口需清洁

九、讨论

本实验使用SLAN-96R成功完成核酸扩增与定量检测。实验表明，仪器具备较高的灵敏度和良好的重复性，适合科研与临床检测使用。标准曲线线性优良，Ct值分布合理，结果可信度高。
需要注意的是，实验中必须严格执行分区操作，避免气溶胶污染。加样和封板环节要求细致，以减少实验误差。数据解读时需结合扩增曲线和对照组表现，避免仅凭单一指标判断结果。

十、结论

  1. 宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R操作简便，结果可靠。

  2. 实验获得了理想的扩增曲线和Ct值，标准曲线斜率合理，扩增效率接近100%。

  3. 融解曲线验证了扩增特异性，排除了假阳性。

  4. 本实验报告完整记录了操作步骤和结果分析，为后续实验提供了规范参考。

  5. SLAN-96R适用于临床诊断、科研实验及食品安全检测，是一款高效的核酸检测平台。

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