在正式操作SLAN-96R之前,必须做好环境、仪器和试剂的准备工作,以确保实验的准确性和稳定性。
实验室温度保持在18–30℃之间,湿度控制在30%–80%。
实验区域应避免直射光线和强烈气流。
桌面需平整稳固,避免震动和灰尘。
设置专门的清洁区和加样区,减少交叉污染。
电源电压要求220V±10%,频率50Hz。
建议使用稳压电源或UPS,防止断电影响实验。
检查电源线和通信线连接是否牢固。
开机前确认仪器外观无损伤。
按照实验方案配置反应体系,体积一般为20µL或25µL。
设置阳性对照和阴性对照,确保实验结果可信。
配置完成后轻轻混匀,并用离心机短暂离心去除气泡。
打开SLAN-96R电源开关,等待系统自检完成。
在计算机上启动配套软件。
检查软件是否能正常识别仪器,若无连接则排查USB或网线接口。
进入“新建实验”界面,为实验输入文件名和保存路径。
初始变性:一般95℃,2–5分钟。
循环阶段:
变性:95℃,10–15秒。
退火:55–65℃,20–30秒。
延伸:72℃,20–30秒。
循环次数:35–45次,具体依赖于实验要求。
荧光采集点通常设置在退火或延伸阶段。
选择实验使用的荧光染料(如FAM、HEX、ROX、CY5等)。
为不同样品分配检测通道,避免重复或遗漏。
若为多重检测,需明确各通道对应的基因靶标。
在软件界面中建立与96孔板对应的样品布局。
输入样品编号、实验分组、对照类型。
标记空孔,避免软件误判。
在无污染环境中使用移液器将反应体系分装到96孔板中。
加样过程中避免产生气泡。
使用光学封板膜密封反应板,确保边缘贴合紧密。
将反应板放入离心机,短暂离心,确保液体沉底且无气泡。
将反应板放入SLAN-96R样品仓内,注意方向标记与仪器一致。
关闭反应仓盖,确认已锁紧。
在软件中点击“开始运行”。
仪器进入自动加热循环,系统实时采集荧光信号。
软件界面显示扩增曲线,可随时观察反应进展。
若出现异常信号,应立即暂停并检查对应样品。
实验结束后,SLAN-96R软件会自动保存检测数据,用户需根据实验目的进行分析。
检查阴性对照孔,应无扩增信号。
阳性对照应在合理Ct值范围内。
样品曲线呈指数增长,说明扩增正常。
使用已知浓度的标准品绘制标准曲线。
检查曲线线性相关系数R²,应大于0.98。
PCR效率计算:90%–110%为理想范围。
根据Ct值和标准曲线进行绝对定量或相对定量。
选择SYBR Green体系时必须检查熔解曲线。
单一峰值表明扩增产物特异性良好。
多峰或拖尾表明存在引物二聚体或非特异扩增。
软件支持导出Excel、PDF、图片等格式。
实验结果可保存至实验室数据库或打印存档。
模板量不足或降解。
引物浓度过低。
热循环条件需优化。
检查反应体系配置是否正确。
样品是否加错或漏加。
仪器荧光通道是否设定正确。
调整退火温度。
重新优化引物序列。
确认反应体系中无污染。
反应板封膜不严,导致蒸发。
加样体积不一致。
仪器光学系统需清洁。
实验结束后及时清理样品仓。
避免液体溅入光学窗口。
定期清理仪器外部灰尘。
使用无水乙醇和无尘布轻拭光学窗口。
不可使用腐蚀性溶剂清洁。
按厂家说明定期校准温控精度。
出现温度异常时应联系技术支持。
切断电源,覆盖防尘布。
存放于干燥通风环境中。
SLAN-96R的应用范围不仅限于基础科研,还可扩展到多种应用场景:
临床诊断:病毒核酸检测、细菌定量、耐药基因分析。
遗传学研究:基因分型、突变检测、SNP分析。
药物研发:药效学研究、药物代谢相关基因检测。
食品安全:转基因成分检测、致病菌筛查。
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R以其高灵敏度的光学检测系统和精确的温控性能,为分子诊断和科学研究提供了可靠工具。通过标准化的操作步骤、合理的实验设计与科学的数据分析,可以获得高重复性与高准确性的结果。掌握本教程中的详细流程,能够帮助使用者熟练操作该仪器,避免常见问题,并充分发挥SLAN-96R在科研与临床中的价值。
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