宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R详细步骤
时间:2025-08-23

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R详细操作步骤

一、实验前准备

在正式操作SLAN-96R之前,必须做好环境、仪器和试剂的准备工作,以确保实验的准确性和稳定性。

1. 环境准备

  • 实验室温度保持在18–30℃之间,湿度控制在30%–80%。

  • 实验区域应避免直射光线和强烈气流。

  • 桌面需平整稳固,避免震动和灰尘。

  • 设置专门的清洁区和加样区,减少交叉污染。

2. 电源与硬件检查

  • 电源电压要求220V±10%,频率50Hz。

  • 建议使用稳压电源或UPS,防止断电影响实验。

  • 检查电源线和通信线连接是否牢固。

  • 开机前确认仪器外观无损伤。

3. 试剂与耗材准备

  • 使用专用的96孔板或八联管。

  • 确认封板膜或光学盖板无气泡和划痕。

  • 准备无RNA酶/无DNA酶污染的枪头和离心管

  • 所需试剂包括预混液、引物、探针或荧光染料、模板DNA/RNA。

4. 样品配置

  • 按照实验方案配置反应体系,体积一般为20µL或25µL。

  • 设置阳性对照和阴性对照,确保实验结果可信。

  • 配置完成后轻轻混匀,并用离心机短暂离心去除气泡。


二、仪器开机与软件启动

  1. 打开SLAN-96R电源开关,等待系统自检完成。

  2. 在计算机上启动配套软件。

  3. 检查软件是否能正常识别仪器,若无连接则排查USB或网线接口。

  4. 进入“新建实验”界面,为实验输入文件名和保存路径。


三、实验设置步骤

1. 循环程序设定

  • 初始变性:一般95℃,2–5分钟。

  • 循环阶段

    • 变性:95℃,10–15秒。

    • 退火:55–65℃,20–30秒。

    • 延伸:72℃,20–30秒。

  • 循环次数:35–45次,具体依赖于实验要求。

  • 荧光采集点通常设置在退火或延伸阶段。

2. 荧光通道设置

  • 选择实验使用的荧光染料(如FAM、HEX、ROX、CY5等)。

  • 为不同样品分配检测通道,避免重复或遗漏。

  • 若为多重检测,需明确各通道对应的基因靶标。

3. 样品板布局

  • 在软件界面中建立与96孔板对应的样品布局。

  • 输入样品编号、实验分组、对照类型。

  • 标记空孔,避免软件误判。


四、加样与反应板装载

  1. 在无污染环境中使用移液器将反应体系分装到96孔板中。

  2. 加样过程中避免产生气泡。

  3. 使用光学封板膜密封反应板,确保边缘贴合紧密。

  4. 将反应板放入离心机,短暂离心,确保液体沉底且无气泡。

  5. 将反应板放入SLAN-96R样品仓内,注意方向标记与仪器一致。

  6. 关闭反应仓盖,确认已锁紧。


五、实验运行与实时监控

  1. 在软件中点击“开始运行”。

  2. 仪器进入自动加热循环,系统实时采集荧光信号。

  3. 软件界面显示扩增曲线,可随时观察反应进展。

  4. 若出现异常信号,应立即暂停并检查对应样品。


六、数据分析步骤

实验结束后,SLAN-96R软件会自动保存检测数据,用户需根据实验目的进行分析。

1. 扩增曲线分析

  • 检查阴性对照孔,应无扩增信号。

  • 阳性对照应在合理Ct值范围内。

  • 样品曲线呈指数增长,说明扩增正常。

2. 标准曲线与定量分析

  • 使用已知浓度的标准品绘制标准曲线。

  • 检查曲线线性相关系数R²,应大于0.98。

  • PCR效率计算:90%–110%为理想范围。

  • 根据Ct值和标准曲线进行绝对定量或相对定量。

3. 熔解曲线分析

  • 选择SYBR Green体系时必须检查熔解曲线。

  • 单一峰值表明扩增产物特异性良好。

  • 多峰或拖尾表明存在引物二聚体或非特异扩增。

4. 数据导出

  • 软件支持导出Excel、PDF、图片等格式。

  • 实验结果可保存至实验室数据库或打印存档。


七、常见问题与解决办法

1. Ct值偏高

  • 模板量不足或降解。

  • 引物浓度过低。

  • 热循环条件需优化。

2. 无扩增曲线

  • 检查反应体系配置是否正确。

  • 样品是否加错或漏加。

  • 仪器荧光通道是否设定正确。

3. 熔解曲线异常

  • 调整退火温度。

  • 重新优化引物序列。

  • 确认反应体系中无污染。

4. 信号波动大

  • 反应板封膜不严,导致蒸发。

  • 加样体积不一致。

  • 仪器光学系统需清洁。


八、维护与保养

1. 日常维护

  • 实验结束后及时清理样品仓。

  • 避免液体溅入光学窗口。

  • 定期清理仪器外部灰尘。

2. 光学系统维护

  • 使用无水乙醇和无尘布轻拭光学窗口。

  • 不可使用腐蚀性溶剂清洁。

3. 温控系统校准

  • 按厂家说明定期校准温控精度

  • 出现温度异常时应联系技术支持。

4. 长期停机处理

  • 切断电源,覆盖防尘布。

  • 存放于干燥通风环境中。


九、应用拓展

SLAN-96R的应用范围不仅限于基础科研,还可扩展到多种应用场景:

  • 临床诊断:病毒核酸检测、细菌定量、耐药基因分析。

  • 遗传学研究:基因分型、突变检测、SNP分析。

  • 药物研发:药效学研究、药物代谢相关基因检测。

  • 食品安全:转基因成分检测、致病菌筛查。


十、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R以其高灵敏度的光学检测系统和精确的温控性能,为分子诊断和科学研究提供了可靠工具。通过标准化的操作步骤、合理的实验设计与科学的数据分析,可以获得高重复性与高准确性的结果。掌握本教程中的详细流程,能够帮助使用者熟练操作该仪器,避免常见问题,并充分发挥SLAN-96R在科研与临床中的价值。


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