宏石荧光定量PCR仪 SLAN-96R 操作细节说明

一、设备简介与应用范围

宏石荧光定量PCR仪 SLAN-96R 属于实时荧光定量PCR检测平台，广泛应用于基础分子生物学实验、临床核酸检测、病原体监测、转基因检测、药物研发以及食品安全等领域。它的设计兼顾高通量与高灵敏度，能够在一个运行周期内同时处理96个样本，支持多重荧光通道检测，为科研和临床实验提供快速、准确的数据支持。

SLAN-96R 的操作过程包含：实验前准备、反应体系配制、样品上机、程序运行、数据采集与分析，以及实验后处理。正确掌握每一个环节的细节，不仅能提升结果的可靠性，还能有效降低污染风险。

二、实验前准备

1. 环境准备

• 实验室应保持洁净，避免灰尘和气溶胶进入设备。

• 建议分区管理：试剂准备区、样本提取区和扩增分析区，物品与人员不可随意交叉。

• 温度控制在18–30℃之间，相对湿度保持40–70%，避免过冷或过热影响热循环模块。

2. 仪器检查

• 开机后系统会自动自检，确认状态灯与显示界面提示正常。

• 检查热盖温度设置是否在105℃左右，防止样品蒸发。

• 确认光学模块校准无误，若有偏差需提前进行校正。

• 检查样品台与加热模块表面是否洁净，无尘屑、油迹或残留液体。

3. 试剂与耗材准备

• 所有试剂须在有效期内，并按照说明保存（部分需避光、部分需低温）。

• 配置PCR体系前，需在洁净台或超净工作台中操作，避免环境污染。

• 使用一次性无酶枪头，推荐带滤芯枪头，避免气溶胶污染移液器。

• PCR板、管或八联管必须为光学透明材质，并与设备型号兼容。

三、反应体系配置细节

1. 样品处理

• 核酸提取后需立即检测或在–20℃至–80℃保存，避免反复冻融。

• 模板浓度需在体系推荐范围内，过高会抑制扩增，过低则导致Ct值偏高甚至无扩增。

2. 配置步骤

• 建议按照“主混液 + 模板”两步法操作。先配好反应体系的总混合液（含引物、探针、预混液等），最后再分装加入模板。

• 对照设置不可缺少，包括阴性对照（无模板）、阳性对照和标准品。

• 混合均匀后轻轻离心，确保液体集中在管底，避免壁挂。

3. 加样注意事项

• 配置反应时避免将气泡带入反应管/板，因为气泡会影响荧光检测。

• 若必须多批次加样，应将体系放在冰上，减少非特异性扩增风险。

• 反应板封膜需压紧，确保热循环过程中不发生蒸发或交叉污染。

四、样品上机操作

1. 放置样品

• 打开热循环仪盖子，将PCR板按标记方向放入样品槽。

• 样品板与加热模块需紧密贴合，避免因接触不良导致温度不均。

• 封膜边缘需压实，避免实验中出现液体蒸发。

2. 设置实验程序

• 通过软件界面建立新实验，输入实验名称与样本编号。

• 选择所需荧光通道，并根据实验设计匹配相应的探针染料。

• 设置循环条件：包括预变性温度与时间、退火延伸温度与时间、循环次数。

• 确定荧光信号采集点，通常在退火或延伸阶段进行。

• 如需熔解曲线分析，应额外设定从低温到高温的逐步升温过程。

3. 实验运行

• 确认参数无误后启动实验，系统会自动完成加热、降温和信号采集。

• 运行过程中避免频繁触碰或移动仪器。

• 可在电脑界面实时观察扩增曲线的生成情况。

五、实验过程中的细节控制

1. 温控与热盖

• 热盖温度必须高于扩增温度约10℃，以避免冷凝。

• 若实验体系小于20 µL，可适当提高热盖温度，减少蒸发。

2. 荧光信号采集

• 不同荧光染料需匹配正确的检测通道，避免交叉干扰。

• 定量实验中，基线与阈值的设置对Ct值有直接影响，应根据扩增曲线合理调整。

3. 数据实时监控

• 扩增早期若出现异常曲线，应立即检查阴性对照。

• 如果阴性对照出现扩增，说明可能存在气溶胶污染，应终止实验。

六、数据分析与结果判读

1. Ct值判断

• Ct值（阈值循环数）是判断扩增信号的关键参数。

• 阴性对照不得出现Ct值，阳性对照Ct值应在合理范围。

• 重复样本之间Ct差异不应超过0.5–1个循环。

2. 标准曲线与定量结果

• 通过标准品系列稀释，绘制标准曲线，线性相关系数R²应大于0.99。

• 扩增效率在90–110%为合格范围。

3. 熔解曲线分析

• 单一特异性产物应表现为单一峰形。

• 若出现多峰或拖尾，说明存在非特异性扩增或引物二聚体。

七、实验后的处理与安全规范

1. 实验结束

• 实验完成后，关闭仪器，轻轻取出反应板。

• 将反应产物按照生物安全规范处理，避免二次污染。

• 软件数据保存时应分类命名，并做好实验记录。

2. 仪器清洁

• 热循环模块表面可用无水乙醇擦拭，避免腐蚀性清洗剂。

• 光学窗口需保持清洁，如有污染可用镜头纸轻拭。

• 长期不用时应覆盖防尘罩。

八、常见问题与解决办法

1. 扩增曲线不正常

• 检查反应体系是否缺失成分。

• 确认荧光通道选择是否正确。

2. 阴性对照出现扩增

• 说明污染严重，应更换试剂并重新实验。

• 加强区域隔离与操作规范。

3. Ct值过高或无法检测

• 模板浓度过低或降解。

• 引物设计不合理，需优化。

4. 熔解曲线多峰

• 存在非特异性扩增或二聚体，建议优化退火温度。

九、日常维护与保养

• 开关机规范：先开机再开软件，关机时先关闭软件再断电。

• 温度校准：建议每3–6个月进行一次校准。

• 光学模块维护：避免长时间暴露在强光下，保持干燥。

• 软件升级：保持更新，以便兼容新型荧光染料。

• 运行记录：建立维护日志，记录每次使用情况和异常。

十、总结

SLAN-96R 荧光定量PCR仪的实验操作细节涵盖从样品准备到数据分析的全过程。实验人员必须严格遵守操作规程：

• 实验前确保环境与设备状态良好。

• 实验中注意体系配置、程序设定及实时监控。

• 实验后妥善处理产物并进行数据保存与分析。

只有在细节上做到规范化与标准化，才能保证实验结果的准确性、重复性和可靠性，同时也能延长仪器的使用寿命，为科研和临床检测提供持续的技术保障。