宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R使用教程
时间:2025-08-23

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R使用教程

一、仪器概述

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款高性能的核酸扩增与实时荧光检测设备,广泛应用于医学检验、分子生物学研究、疾病诊断、基因检测等领域。其核心功能是通过荧光信号实时监控PCR反应过程,实现目标基因的定性与定量分析
SLAN-96R配备高灵敏度光学系统与精密温控模块,支持多种荧光通道检测,能够兼容多样化的荧光染料和探针体系。同时,仪器配套的软件提供强大的数据处理功能,包括标准曲线分析、熔解曲线绘制、Ct值计算、相对与绝对定量结果输出等。


二、安装与环境准备

在使用SLAN-96R之前,需要对实验环境和设备安装进行规范准备。

  1. 环境要求

    • 温度:18–30℃,湿度:30%–80%。

    • 避免阳光直射及强磁场干扰。

    • 保持实验室空气洁净,防止灰尘进入光学系统。

  2. 电源条件

    • 电源电压:220V±10%,频率50Hz。

    • 独立稳压电源,避免大功率设备共用。

    • 建议配备UPS,防止实验中断。

  3. 安装步骤

    • 将仪器放置在稳固台面,确保平整无震动。

    • 接通电源线与通信线缆(如USB/网线)。

    • 打开主机电源开关,确认软件和仪器连接正常。


三、实验准备

在进行荧光定量PCR实验之前,需要做好样品与耗材的准备。

  1. 耗材准备

    • 专用96孔反应板或八联管。

    • 光学透明封板膜或盖子。

    • 无核酸酶污染的枪头和离心管

  2. 试剂准备

    • 荧光定量PCR预混液(含Taq酶、dNTP、缓冲液)。

    • 上游与下游引物。

    • 探针或荧光染料(如SYBR Green)。

    • 模板DNA或RNA(需经反转录)。

  3. 样品配置

    • 根据实验方案配制反应体系,常见体系为20µL或25µL。

    • 设置阴性对照(NTC)与阳性对照,确保实验可靠性。

    • 使用离心机短暂离心,去除气泡。


四、操作步骤

  1. 开机与软件启动

    • 打开电源,进入主界面。

    • 启动配套软件,选择“新建实验”。

  2. 程序设定

    • 输入实验名称与保存路径。

    • 设置循环参数:预变性、变性、退火、延伸温度与时间。

    • 设置荧光采集点(通常在退火或延伸阶段)。

  3. 样品布局

    • 在软件界面建立样品板布局,定义孔位对应的样品或对照。

    • 指定荧光通道与检测染料。

  4. 样品装载

    • 将反应板放入仪器,确保放置方向正确。

    • 关闭反应仓盖,确认密封性良好。

  5. 运行与监控

    • 点击“开始运行”,仪器自动完成加热循环与荧光采集。

    • 软件实时显示扩增曲线,便于监控反应状态。


五、数据分析

实验完成后,需对荧光信号进行分析。

  1. 扩增曲线

    • 查看对照组扩增曲线,确认无污染或异常扩增。

    • 样品Ct值在合理范围内,曲线呈指数增长。

  2. 标准曲线

    • 通过已知浓度标准品绘制标准曲线。

    • 计算PCR效率,理想范围为90%–110%。

  3. 熔解曲线分析

    • 检测产物特异性,避免非特异性扩增或引物二聚体干扰。

    • 单一峰值表明扩增产物特异。

  4. 结果导出

    • 软件支持导出Ct值表格、扩增曲线图、熔解曲线图。

    • 可生成PDF或Excel格式报告,便于后续统计与归档。


六、常见问题与处理

  1. Ct值偏高或未检测到信号

    • 检查样品浓度是否过低。

    • 确认引物设计是否合理。

    • 排查反应体系配置错误。

  2. 熔解曲线出现多个峰

    • 可能存在非特异性扩增。

    • 适当提高退火温度或优化引物。

  3. 重复性差

    • 确保加样一致性,避免气泡。

    • 样品与试剂充分混匀。

  4. 软件连接异常

    • 检查USB/网线连接。

    • 重启仪器与电脑,再次尝试连接。


七、维护与保养

  1. 日常维护

    • 每次实验后清理样品仓,避免残留液体腐蚀。

    • 定期擦拭光学窗口,使用无水乙醇清洁。

  2. 校准与检测

    • 按照厂家要求定期进行温控与光学校准

    • 检查荧光通道灵敏度,确保检测准确。

  3. 存储与停机

    • 长期不用时,断开电源,覆盖防尘布。

    • 存放环境应干燥通风,避免潮湿。


八、应用拓展

SLAN-96R不仅适用于常规的基因扩增检测,还可广泛应用于:

  • 病原体快速检测(如新冠、流感、结核等)。

  • 肿瘤基因突变分析。

  • 遗传病筛查与基因分型。

  • 药物代谢基因检测与个体化用药指导。


九、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R凭借其精准的温控系统、灵敏的荧光检测和便捷的软件操作,已成为分子诊断和科研实验室的核心设备之一。规范操作与合理维护是确保实验结果可靠性的关键。通过本教程,实验人员可以系统掌握该仪器的使用流程,从而在科研与临床检测中发挥其最大效能。


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