荧光定量PCR技术（Real-time Quantitative PCR, qPCR）已成为分子生物学研究、临床检测以及食品安全检验等领域的重要工具。宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R作为新一代高性能设备，以其精准、稳定和智能化的特征，广泛应用于各类核酸检测实验。为了让实验人员能够更直观地理解该设备的使用流程和功能，本次演示将从实验准备、操作步骤、数据分析和应用案例四个方面进行详细介绍。
在进行实验之前，需要对SLAN-96R进行全面检查：
外观检查：确认仪器无明显损坏、无异物堵塞，检测通道清洁。
电源与网络：确保供电稳定，若需要远程数据传输，需提前配置网络。
环境条件：实验室温度保持在18–28℃之间，相对湿度40%–70%，避免强烈震动与灰尘污染。
96孔反应板或八联管：根据实验需求选择。
光学密封膜：确保荧光信号不受干扰。
移液枪与滤芯枪头：用于精确加样。
荧光定量试剂：如SYBR Green或TaqMan探针体系。
模板DNA或cDNA：经严格提取与纯化，保证浓度和纯度符合要求。
引物和探针：设计合理，避免二聚体与非特异性扩增。
在实验前，需在SLAN-96R配套软件中建立实验方案：
设置实验名称、样品编号及板式布局。
选择检测通道，如FAM、HEX/VIC、ROX、Cy5等。
定义循环程序，包括预变性、变性、退火和延伸温度及时间。
根据实验需求启用熔解曲线分析功能。
在洁净工作台中进行，避免气溶胶污染。
将反应体系配置好后，均匀分配到PCR反应管中。
加盖光学密封膜，确保无气泡、无渗漏。
将样品管或反应板放置于SLAN-96R的样品仓中。
轻轻关闭样品盖，确保受热均匀。
在主界面选择对应的实验程序，检查通道与参数设置是否正确。
启动实验，仪器自动进入加热、循环扩增与实时荧光采集。
实验过程中，软件界面实时显示扩增曲线。
研究人员可随时观察不同样本的荧光信号变化，判断扩增是否正常。
若出现异常荧光，需及时检查样本是否有气泡或试剂问题。
正常扩增曲线呈典型的S型。
阴性对照（NTC）应保持无信号或极低信号，若有明显上升说明存在污染。
阈值线的设定需保证处于指数扩增阶段。
仪器会自动计算每个样品的循环阈值（Ct）。
通过标准曲线可实现绝对定量，通过ΔΔCt方法可实现相对定量。
多重检测时，需校正内参基因，保证数据可靠性。
对于SYBR Green体系，熔解曲线分析尤为重要。
单一峰代表扩增产物特异性良好；若出现多峰，说明存在非特异性扩增或引物二聚体。
可根据熔解峰温度判断目的片段的正确性。
软件可自动生成扩增曲线图、熔解曲线图及Ct值表格。
用户可选择导出Excel或PDF格式，便于后续科研统计或临床报告。
在演示中需要强调：即便微小的加样偏差，也会导致Ct值差异。正确的移液技术是保证实验结果可靠的关键。
qPCR对污染极为敏感，实验中必须强调操作规范：
分区实验：样品提取、体系配置与扩增分区进行。
使用滤芯枪头，避免交叉污染。
定期对仪器进行紫外消毒。
演示过程中需要让实验人员学会如何快速判断：
正常曲线与异常曲线的区别。
内参基因是否稳定。
多重荧光通道之间的信号差异。
病原微生物检测：如新冠病毒、流感病毒、乙肝病毒的核酸检测。
肿瘤标志物检测：例如循环肿瘤DNA的定量分析。
基因表达水平分析：通过比较不同组织、处理条件下的表达差异，研究基因功能。
转基因植物筛选：检测外源基因的插入与表达情况。
食品安全：检测转基因成分、致病菌污染。
环境监测：水体中有害微生物的定量分析。
通过完整的实验演示，观众能够：
熟悉SLAN-96R的操作流程；
理解荧光定量PCR的原理；
掌握数据分析与质量控制要点；
将所学应用到实际检测与科研中。
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R不仅具备高通量、灵敏度高、稳定性强等优势，还提供了人性化的操作界面与智能化的数据分析功能。通过实验演示，可以直观展现其在科研与应用检测中的强大能力。对于实验人员而言，掌握操作流程与数据分析方法，不仅能提升实验效率，更能保障检测结果的准确性和可信度。
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