宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R实验注意
时间:2025-08-23

宏石荧光定量PCR仪 SLAN-96R 实验注意事项及使用介绍

一、设备概述

宏石荧光定量PCR仪 SLAN-96R 是一款广泛应用于分子生物学研究、临床检测药物研发及食品安全检测的实时荧光定量PCR设备。其核心功能在于通过荧光信号的实时监测,对核酸扩增过程进行定量分析,从而实现对病原体检测、基因表达分析、突变检测等多种科研与应用任务。

该设备采用高精度温控系统、先进的光学检测模块以及智能化的软件平台,具有以下显著特点:

  1. 高通量检测:一次可同时检测96个样本,提升实验效率。

  2. 多通道荧光检测:具备多个荧光通道,可实现多重反应。

  3. 快速升降温性能:缩短实验时间,保证扩增的特异性与灵敏度。

  4. 软件友好:配备数据分析功能,可自动生成扩增曲线、熔解曲线和定量结果。

  5. 稳定可靠:长期运行条件下仍可保证数据准确性和重复性。


二、实验前准备

1. 环境要求

  • 实验室区域划分:应设立试剂准备区、样本处理区和扩增分析区,避免交叉污染。

  • 温湿度控制:保持环境温度在18–30℃之间,相对湿度40–70%。

  • 防污染措施:在样本制备时必须佩戴一次性手套、口罩和实验服。

2. 试剂与耗材准备

  • 确保所用试剂均在有效期内,并根据说明书正确保存。

  • 荧光定量PCR常用试剂包括预混液、引物探针、模板DNA/cDNA、无核酸酶水等。

  • 使用专用的低吸附PCR管或96孔板,并搭配光学透明封板膜。

3. 样品制备

  • 核酸提取应在专门区域进行,避免气溶胶污染。

  • 提取后的样品应低温保存,避免反复冻融。

  • 加入PCR反应体系前需确保模板浓度合适,避免过高或过低影响结果。


三、操作流程

1. 开机与系统检查

  • 打开电源,检查仪器自检状态是否正常。

  • 检查热盖温度设定,通常需维持在105℃左右以防止蒸发。

  • 确认荧光通道校准情况,保证光学检测精度。

2. 反应体系配置

  • 在洁净台中配置PCR反应体系,避免气溶胶污染。

  • 配置时应严格按照体系比例操作,注意对照组和阴阳性对照的设置。

  • 配制完成后立即将样品加入PCR板或管中,并密封。

3. 样本上机

  • 打开热循环仪盖子,将96孔板正确放置,注意方向标记。

  • 确保PCR板与热循环模块紧密接触,避免温控不均。

  • 设置实验方案,包括反应步骤、荧光采集点及循环次数。

4. 实验运行

  • 启动实验程序,仪器将自动完成扩增与信号采集。

  • 实验过程中无需频繁开盖,以免影响光学稳定性。

  • 可通过软件实时监控扩增曲线,若有异常可中止运行。

5. 数据分析

  • 扩增结束后,软件会自动生成结果,包括Ct值、标准曲线及熔解曲线。

  • 检查阴性对照是否有扩增曲线,以判断污染情况。

  • 对照标准品,确认定量结果是否在合理范围内。


四、实验注意事项

1. 防止污染

  • PCR实验最重要的环节是防污染,需严格区分试剂区、样本区和扩增区。

  • 配置体系时使用滤芯枪头,避免气溶胶进入移液器。

  • 阴性对照必须全程设立,作为实验监控。

2. 温控与光学精度

  • 确保热循环模块表面清洁,无灰尘或油污。

  • 光学检测区域不得有指纹或污染物,以免影响荧光信号。

  • 定期进行温度校准与光学检测模块的维护。

3. 样本保存与处理

  • 样本尽量避免多次冻融,以防核酸降解。

  • 使用低吸附耗材,减少核酸吸附损失。

  • 实验结束后,废弃物需经高压灭菌处理。

4. 软件使用注意

  • 设置程序时,确保循环次数、退火温度与延伸时间符合反应体系要求。

  • 保存实验数据前确认文件命名规范,以便后期溯源。

  • 避免在实验运行中随意更改参数。


五、安全规范

  • 实验人员必须经过PCR操作培训后方可独立操作。

  • 所有接触样品的耗材应视为潜在污染物,按生物安全废弃物处理。

  • 使用含有荧光染料的体系时,应避免皮肤直接接触。

  • 仪器周围保持清洁,不可放置杂物。


六、常见问题与解决

  1. 扩增曲线无信号

    • 检查体系配置是否正确。

    • 确认模板是否降解。

    • 检查荧光通道是否匹配探针。

  2. Ct值偏高

    • 模板浓度过低或降解。

    • 移液误差导致反应体系不足。

    • 热循环条件设置不合理。

  3. 阴性对照出现扩增

    • 可能为气溶胶污染,需重新配置体系。

    • 实验区分隔不严,需严格执行防污染措施。

  4. 熔解曲线异常

    • 可能存在非特异性扩增。

    • 引物设计不合理或反应体系优化不足。


七、维护与保养

  • 日常维护:实验结束后,用无水乙醇擦拭热循环模块和光学窗口。

  • 定期维护:每3–6个月进行一次温度与光学校准

  • 软件与固件更新:保持仪器软件版本最新,以获取更优性能。

  • 存放环境:长期不用时,应关闭电源并用防尘罩覆盖。


八、总结

宏石荧光定量PCR仪 SLAN-96R 作为一款高效、稳定的实时荧光定量分析平台,在科研与临床检测中具有重要应用价值。正确的实验操作与严格的注意事项执行,是获得准确结果的关键。实验人员需从环境准备、体系配置、操作规范到数据分析等环节全程把控,确保结果科学可靠。与此同时,做好日常维护和定期校准,可延长仪器使用寿命并保持最佳性能。

通过遵循上述操作与注意事项,研究人员不仅能够提升实验成功率,还能最大程度减少误差与风险,为分子检测和科学研究提供有力保障。


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