宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R使用方法

一、仪器概述

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款全自动化、多功能的实时荧光定量PCR分析系统。该仪器主要用于核酸检测、病原体分析、基因分型、转录水平研究以及临床诊断实验等场景。相比传统PCR，荧光定量PCR可以在扩增过程中实时监测反应体系内的荧光信号，通过荧光强度的变化反推出核酸的拷贝数，实现定性与定量的精准分析。
SLAN-96R型号在硬件结构、软件算法、光学系统和温控系统上都有优化，具备灵敏度高、重复性好、通量大等优势，广泛应用于医学检验、生物科研、食品安全检测及环境监测等领域。

二、使用前准备

1. 仪器安置

• 将仪器放置在稳定、防震的平台上，避免靠近水源、强磁场和阳光直射位置。

• 保持环境温度在18℃至30℃之间，相对湿度40%–70%。

• 预留足够的散热空间，确保风道通畅。

2. 电源与连接

• 使用符合仪器额定电压和功率的独立电源插座，避免与其他大功率设备共用。

• 打开电源前检查电源线是否连接牢固，避免接触不良。

• 与计算机相连时需确认USB或网络接口接触良好。

3. 软件安装

• 在配套电脑上安装SLAN-96R专用分析软件。

• 确认驱动程序和数据库正常运行。

• 软件首次启动时需进行系统初始化设置。

4. 耗材与试剂

• 使用推荐型号的96孔反应板、八联管或单管。

• 配套光学透明封板膜需平整贴合，避免气泡影响荧光信号。

• 反应体系包括引物、探针、核苷酸混合物、反应缓冲液及Taq酶。

• 实验前将样本与试剂在冰上准备，避免降解。

三、实验操作流程

1. 样品准备

• 样品可来自血液、组织、细胞或环境材料，经核酸提取纯化后作为模板。

• 需要测定浓度与纯度（常用A260/A280比值），保证模板质量适合PCR反应。

• 根据实验目的调整稀释倍数。

2. 反应体系配制

• 在无RNAse、DNAse污染的洁净台中操作。

• 按说明书推荐比例配置主混合液：包括缓冲液、dNTP混合物、引物对、探针、聚合酶等。

• 每管加入适量模板，总体积一般在20–50 μL范围。

• 设置阴性对照（无模板）与阳性对照（标准核酸），用于判定实验有效性。

3. 加样与封板

• 将反应体系加至96孔板中，每孔加样一致。

• 使用专用压膜机或手动刮板将光学膜贴紧，避免蒸发和交叉污染。

• 封板后轻轻离心，使液体沉于孔底。

4. 程序设定

• 在软件界面选择“新建实验”。

• 输入实验名称、日期、实验人员等基本信息。

• 设定反应程序：包括初始变性（一般95℃，2–3分钟）、循环变性（95℃，10–15秒）、退火与延伸（55–65℃，30–60秒），循环数通常设为40–45。

• 选择荧光通道（如FAM、HEX、ROX、Cy5），并分配至对应孔位。

• 保存程序并加载到主机。

5. 启动实验

• 将反应板放入仪器样品仓中，确保方向正确。

• 关闭仓盖，点击软件界面“开始运行”。

• 实验过程中可实时观察扩增曲线与荧光信号。

四、数据分析方法

1. 扩增曲线

• 软件自动绘制荧光信号随循环数的变化曲线。

• 正常扩增应呈现“S”型曲线：基线期、指数期、平台期。

• 若曲线无上升趋势需检查模板、引物和酶活性。

2. Ct值判定

• Ct值为扩增曲线达到设定阈值时的循环数。

• Ct值越小，说明模板浓度越高。

• 一般定量分析采用ΔCt或ΔΔCt法计算。

3. 标准曲线

• 通过已知浓度的系列稀释样品建立标准曲线。

• 软件自动回归计算斜率与相关系数R²。

• 根据曲线方程可推算未知样品的浓度。

4. 融解曲线

• 对SYBR Green等非特异性染料实验，可进行融解曲线分析。

• 单一峰形代表特异性扩增，多峰提示可能存在非特异产物或引物二聚体。

5. 报告输出

• 系统可生成扩增曲线图、Ct值表格、标准曲线图等结果。

• 用户可导出Excel或PDF格式文件，用于归档和后续分析。

五、常见问题与解决

1. 无扩增信号：

• 检查是否加入模板、引物是否设计合理、酶是否失活。

• 确认反应体系中Mg²⁺浓度适当。

2. 曲线拖尾或平台异常：

• 可能因荧光探针降解或反应体系污染。

• 调整反应体积或更换耗材。

3. Ct值不稳定：

• 样品浓度不均一或加样操作不规范。

• 仪器未校准温控或光学模块。

4. 重复性差：

• 需确保反应体系充分混匀，样本分装均匀。

• 避免加样过程中形成气泡。

六、维护与保养

1. 日常维护

• 每次实验结束后，用无水乙醇或专用清洁布擦拭外壳。

• 样品仓保持清洁干燥，若有溅液需及时处理。

• 检查光学窗口是否清洁，避免灰尘影响检测。

2. 软件维护

• 定期更新软件版本，保证算法与数据库为最新。

• 建立实验文件夹分类存储，便于数据追溯。

3. 校准与检测

• 按照建议周期进行温控与光学系统校准。

• 使用标准品进行性能验证，确保检测灵敏度与准确性。

七、安全注意事项

• 操作PCR体系需在生物安全柜或洁净环境中进行，防止气溶胶污染。

• 样本涉及临床病原体时，应遵循相关生物安全规范。

• 实验耗材须高压灭菌或专用消毒后方可丢弃。

• 操作人员需佩戴手套、口罩和实验服，避免直接接触有害试剂。

八、应用实例

1. 病原体检测

通过特异性引物和探针，可快速检测病毒或细菌核酸，如呼吸道病毒、流感病毒、结核分枝杆菌等。

2. 遗传学研究

在基因表达分析中，通过比较目标基因与内参基因的相对表达水平，可研究不同条件下基因的调控机制。

3. 食品与环境监测

用于检测食品中的转基因成分、病原菌残留，以及水源和空气中的核酸污染物。

4. 临床诊断

在个体化医疗中，荧光定量PCR可检测肿瘤相关基因突变、药物代谢基因多态性，为治疗方案提供参考。

九、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款高通量、灵敏度高且操作简便的实时定量PCR平台。其核心优势在于：

• 高精度温控系统保证了扩增反应的稳定性；

• 多通道荧光检测适配多种实验需求；

• 人性化软件界面方便操作和结果分析；

• 广泛应用场景覆盖科研、临床、食品与环境检测等领域。

通过规范的实验步骤、科学的数据解读以及定期的维护保养，使用者能够充分发挥SLAN-96R的性能，为科研与诊断提供可靠的数据支持。