一、设备启动与预热

1. 检查设备状态

在开始实验之前，需要检查SLAN-96S设备的状态。确保设备已连接到电源并且处于正常状态。检查设备的触摸屏、操作界面和其他连接部件，确保没有明显的损坏或松动。

2. 启动设备

按下设备的电源按钮，启动SLAN-96S。启动后，屏幕将显示设备的初始化画面，用户可以通过触摸屏进入设备的操作界面。如果是首次启动设备，确保系统软件已更新至最新版本。

3. 设备预热

SLAN-96S在启动后会自动进入预热阶段。由于PCR反应需要精确的温控，设备必须经过充分的预热以确保温控系统稳定。通常需要进行5-10分钟的预热，使得设备内部达到适宜的温度，避免温度波动影响实验结果。

4. 检查反应板和样品架

在设备预热的同时，检查96孔反应板及样品架的状态。确保反应板没有污染，并且放置在设备的样品槽内。如果使用新的96孔反应板，确认其适配SLAN-96S，并按照要求安装。

二、样本准备与试剂配置

1. 样本采集与RNA/DNA提取

样本的质量对PCR实验结果至关重要。根据实验需求，选择合适的样本类型，如血液、组织、细胞、唾液等。不同类型的样本需要采用不同的RNA或DNA提取方法。常见的RNA提取方法有Trizol法、柱式法等，DNA提取方法有酚/氯仿法、柱式法等。

• 在RNA提取时，使用RNA保护剂或快速冷冻方法防止RNA降解。

• 在DNA提取时，确保提取的DNA浓度合适，并且DNA纯度符合要求。使用分光光度计检测样本的浓度和纯度，通常A260/A280值应为1.8-2.0。

2. 反转录合成cDNA（用于RNA样本）

如果样本为RNA，需要进行反转录反应，将RNA转化为cDNA。反转录反应需使用逆转录酶，并根据样本浓度调整反应体系。反转录后，使用分光光度计检测cDNA浓度，确保其适合后续PCR反应。

3. 试剂准备

PCR反应需要多种试剂，包括DNA聚合酶、dNTPs、引物、探针、缓冲液、MgCl₂等。试剂的质量和浓度直接影响PCR的特异性和效率。

• DNA聚合酶：常用的聚合酶有Taq酶和Hot Start Taq酶。根据实验需求，选择合适的聚合酶，并按照试剂盒说明书推荐的浓度进行使用。

• dNTPs：dNTPs混合液的浓度一般为200 µM。

• 引物：引物浓度应根据引物的设计进行优化，通常为0.1-0.5 µM。

• 探针：探针的浓度一般为0.1-0.5 µM。

• 缓冲液：PCR缓冲液应根据PCR聚合酶的要求选择，一般为10×浓度。

• MgCl₂：MgCl₂的浓度通常为1.5-3 mM。

4. 反应体系配制

根据试剂浓度和目标DNA的量，配置合适的PCR反应体系。每个反应孔的体积通常为20-25 μL，且需要确保所有孔内反应体系的体积一致。每个反应孔需加入适量的模板DNA（或cDNA）、引物、探针、聚合酶、缓冲液等。

三、PCR反应程序设置

1. 选择实验模式

SLAN-96S提供多种实验模式，用户可以根据实验的需求选择合适的模式。在主屏幕中，选择“新建实验”，进入实验设置界面。根据实验设计，选择合适的反应类型，例如基因表达分析、病毒载量检测等。

2. 设置反应程序

根据目标基因的特性和实验要求设置PCR反应条件。SLAN-96S支持自动计算和调整反应条件，以下是常见的PCR反应程序：

• 初始变性：94-95℃，2-5分钟，用于裂解细胞或组织中的DNA，确保模板完全解链。

• 变性：94-95℃，15-30秒，用于模板DNA的解链。

• 退火：55-65℃，15-30秒。退火温度根据引物的退火温度（Tm值）进行设置。

• 延伸：72℃，30秒至1分钟（取决于扩增产物的大小）。聚合酶在此温度下合成新的DNA链。

• 数据采集：每个PCR循环结束时，SLAN-96S将实时采集荧光信号，并记录CT值。

3. 选择荧光染料与通道

SLAN-96S支持多达4个荧光通道，适用于多重PCR实验。在实验设置中，选择所使用的荧光染料和对应的通道。例如，FAM、VIC、JOE等常见的荧光染料可以用于标记不同的引物和探针，确保多目标同时检测。

四、PCR反应的执行与监控

1. 加载96孔反应板

将已配置好的PCR反应体系均匀地分配到96孔反应板的每个孔中。确保每个孔内的反应体系体积一致，避免因样本误差导致实验结果不准确。对于每个实验组，可以设置三个重复孔，以提高结果的可靠性。

2. 封板与加载

用反应板膜封住96孔反应板，以防止反应体系在热循环过程中蒸发或泄漏。确认封板膜无气泡，并确保密封良好。

将反应板轻轻放入SLAN-96S的样品槽中，并确保反应板牢固固定。

3. 启动PCR反应

在SLAN-96S的触摸屏上，点击“启动”按钮，开始PCR反应。设备将自动执行预设的热循环程序，并在每个循环结束时自动采集荧光信号。

4. 实时监控反应过程

SLAN-96S的触摸屏将实时显示PCR反应的进程，包括扩增曲线、温度曲线和溶解曲线等信息。用户可以随时检查反应状态，确保反应按预期进行。

5. 实验结束与数据保存

当PCR反应完成时，SLAN-96S将自动停止并生成实验数据报告。实验数据会保存在设备的存储系统中，用户可以导出数据或通过USB接口进行备份。

五、数据分析与结果解读

1. 数据导出

SLAN-96S的操作软件可以将实验数据导出为Excel或CSV文件，方便用户进一步处理和分析。通过点击“数据导出”按钮，用户可以选择保存的文件格式，并将数据保存到外部设备中。

2. CT值分析

SLAN-96S提供了强大的数据分析功能，包括实时数据分析和标准曲线生成。根据实验设计，用户可以选择使用ΔΔCT法或标准曲线法进行相对定量或绝对定量分析。

• 标准曲线法：通过构建标准品浓度系列，SLAN-96S可以计算出样本中目标基因的拷贝数。

• ΔΔCT法：适用于相对定量分析，通过比较实验组与对照组之间的CT值差异，得出目标基因的表达变化。

3. 溶解曲线分析

SLAN-96S还提供了溶解曲线分析功能，帮助用户检测PCR扩增产物的特异性。通过观察PCR产物的熔解峰，用户可以判断是否存在非特异性扩增或引物二聚体。

4. 实验报告生成

SLAN-96S会自动生成实验报告，报告内容包括扩增曲线、溶解曲线、CT值、标准曲线、相对/绝对定量分析结果等。用户可以根据报告结果进行进一步的分析和解读。

六、清理与维护

1. 设备清洁

在完成实验后，需要对SLAN-96S进行清洁。首先，关闭设备电源，并用干净的湿布擦拭设备表面。定期清理反应板托盘和样品槽，以保持设备的清洁和良好的工作状态。

2. 反应板与耗材处置

使用过的96孔反应板和试剂管应按照实验室规定进行妥善处置。对于一次性使用的耗材，应严格遵循生物安全规范，避免交叉污染。

3. 定期维护

定期对SLAN-96S进行保养，检查温控系统、荧光系统、光学系统等是否正常工作。定期校准设备，确保其长期稳定运行。具体维护频率可以根据设备使用情况和实验室要求决定。

七、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96S是一款高通量、高灵敏度的荧光PCR分析工具，其精确的温控系统、多重PCR支持以及强大的数据分析能力，使其在分子生物学实验中具有重要应用。在使用SLAN-96S进行PCR实验时，准确的操作步骤是确保实验成功的关键。从设备启动、样本准备、试剂配置、反应程序设置、数据采集到结果分析，每个步骤都需要严格按照要求进行操作。通过合理设置和优化实验条件，SLAN-96S可以帮助研究人员获得高质量的实验数据，推动生命科学研究和临床诊断的进步。