、设备准备与安装

在开始实验前，确保SLAN-96S处于适宜的工作环境，并按照以下步骤进行设备准备与安装：

1. 环境要求

• 温度范围：设备应放置在温度稳定的环境中，理想工作温度为18℃到30℃之间。避免将设备放置在高温或寒冷的环境中。

• 湿度要求：设备工作环境的湿度应保持在10%到90%（无凝结水分）。湿度过高可能会影响设备的稳定性。

• 无震动环境：为确保设备正常工作，应选择无震动的平稳台面，以避免因震动导致的仪器不稳定或实验误差。

• 良好的通风条件：确保设备所在区域通风良好，避免过高的温度影响设备的散热。

2. 电源连接

• 电源要求：确保SLAN-96S连接到稳定的电源，电压为220V ± 10%，频率为50/60Hz。避免使用不稳定的电源插座，防止电源波动影响设备的正常工作。

• 电源连接检查：检查电源线及插头是否完好，确保连接牢固。

3. 设备开机

• 按下设备背面的电源按钮，SLAN-96S将自动启动。启动过程中，屏幕上会显示设备的初始化界面，并进行自检，确保各项功能正常。

二、样品与试剂准备

成功的定量PCR实验不仅依赖于PCR仪器的性能，还依赖于高质量的样品和试剂。正确的样品和试剂处理是确保实验顺利进行的基础。

1. 样品准备

• DNA/RNA提取：使用标准的核酸提取方法从生物样本中提取DNA或RNA。确保样品不含抑制PCR反应的物质，如酚、醇类、盐类等。

• 样品质量检测：提取后的核酸应检查其浓度和纯度。可以使用分光光度计或其他方法测量样本的吸光度（A260/A280），以确保核酸的纯度。

• 样本浓度调整：根据PCR反应的需要调整样品浓度。通常，PCR反应体系需要的模板浓度为10-100ng/µL的DNA或1-10ng/µL的RNA。

2. 试剂准备

• PCR缓冲液：使用合适的PCR缓冲液，确保PCR反应的pH和盐浓度符合要求。

• dNTP：使用新鲜的dNTP混合物，以确保扩增反应中的每种碱基的供给。

• 引物与探针：选择适合的引物和探针，确保它们与目标基因序列的特异性配对。引物的设计要避免形成二聚体或发夹结构。

• 酶类：选择热稳定的Taq酶或其他合适的DNA聚合酶，确保高效的DNA扩增。

三、PCR程序设置

SLAN-96S提供灵活的程序设置功能，可以根据不同实验需求进行调整。常见的PCR程序一般包括预变性、变性、退火、扩增等步骤。用户应根据实验的特定需求设置相应的PCR程序。

1. 设置PCR反应程序

• 预变性步骤：通常设定在94-98°C，持续1-10分钟，用于确保模板DNA完全变性。

• 变性步骤：设置为94-98°C，持续15-30秒，使DNA双链分开，便于引物的结合。

• 退火步骤：退火温度应根据引物的Tm值（熔解温度）进行设定，通常在50-65°C之间，持续15-30秒，确保引物与模板DNA正确结合。

• 延伸步骤：设置为72°C，持续30秒至1分钟。该阶段聚合酶在模板DNA上延伸形成新链，时间的长短取决于扩增产物的长度。

• 荧光信号采集：SLAN-96S允许在每个PCR循环结束时进行荧光信号采集，确保实时监控PCR过程。

2. 设置荧光检测模式

• SYBR Green染料模式：如果使用SYBR Green等染料进行检测，设置合适的荧光探测波长。SYBR Green在特定波长激发下发出荧光，SLAN-96S能够在每个扩增循环中实时监测荧光信号。

• TaqMan探针模式：使用TaqMan探针时，SLAN-96S能够检测到目标DNA的荧光释放，并通过不同的探针设置（例如FAM、VIC等）进行多重检测。

3. 运行程序
   在程序设置完成后，点击“开始”按钮，SLAN-96S将自动运行预设的PCR程序。设备将自动控制温度的升降，并实时采集荧光信号。

四、数据采集与分析

SLAN-96S配备了先进的数据采集和分析系统，能够实时记录PCR过程中的荧光信号，并在实验结束后自动生成数据报告。

1. 扩增曲线和Ct值

• 扩增曲线：SLAN-96S根据每个PCR循环中的荧光信号生成扩增曲线，反映出目标DNA的扩增过程。随着PCR反应的进行，荧光信号逐渐增加，扩增曲线呈现S形。

• Ct值：SLAN-96S会自动计算每个样本的阈值周期（Ct值），即PCR反应中荧光信号首次超过阈值的周期数。Ct值与初始模板量呈负相关，Ct值越小，表示目标DNA浓度越高。

2. 标准曲线与定量分析

• 标准曲线的构建：SLAN-96S可以根据已知浓度的标准品生成标准曲线。通过将标准品的Ct值与其已知浓度进行对比，可以构建标准曲线，从而定量分析样本中目标DNA的初始拷贝数。

• 相对定量与绝对定量：SLAN-96S支持相对定量和绝对定量两种分析方法。在相对定量分析中，通过比较目标基因与参考基因的Ct值比值，来推算基因表达水平的变化；在绝对定量分析中，结合标准曲线计算样本中目标基因的拷贝数。

3. 数据输出与报告生成

• 实时数据展示：SLAN-96S在实验过程中会实时展示扩增曲线、标准曲线、荧光强度变化等数据，用户可以在设备界面上直接查看实验进展。

• 数据导出：实验完成后，SLAN-96S可以将实验数据导出为Excel、CSV或PDF格式，方便后续的数据分析、结果汇总和报告撰写。

五、常见问题及故障排除

在使用SLAN-96S过程中，用户可能会遇到一些常见问题。以下是一些常见故障及其排除方法：

1. 设备无法启动

• 原因：电源未接入、插座接触不良、设备硬件故障。

• 解决方案：检查电源线及插头是否连接牢固，确认插座正常工作；如果问题依然存在，请联系售后服务进行维修。

2. 荧光信号异常

• 原因：样品浓度过低、探针设计问题、仪器光学系统污染。

• 解决方案：确保样品浓度适宜，检查探针设计是否合理；如果仪器光学系统被污染，使用专业工具清洁光学部件。

3. 扩增曲线不理想

• 原因：反应体系不合适、引物设计不当、PCR条件设置错误。

• 解决方案：重新优化PCR反应体系，检查引物设计是否合理；调整PCR程序中的温度和时间设置，确保反应条件最优化。

六、设备的日常维护与保养

为了确保SLAN-96S长期稳定运行，定期维护和保养是必不可少的。以下是一些日常维护的注意事项：

1. 清洁与保养

• 仪器外部清洁：定期用无纤维的布擦拭设备外壳，避免灰尘堆积。

• 光学系统清洁：定期检查光学元件，清洁透镜和探测器，确保荧光信号的准确捕捉。

2. 仪器校准
   定期校准SLAN-96S，确保其温控系统、光学系统和程序设置均处于最佳工作状态。

3. 软件更新
   定期检查SLAN-96S操作软件的版本，确保设备运行的是最新的稳定版本。软件更新可提升仪器的功能，优化数据处理过程。

七、总结

宏石荧光定量PCR仪SLAN-96S凭借其高精度、高灵敏度和灵活性，广泛应用于科研和临床领域。通过本操作手册的指导，用户能够掌握SLAN-96S的操作流程，确保设备在样品准备、程序设置、数据采集和结果分析中的高效应用。同时，定期的设备维护和故障排除也有助于延长仪器使用寿命，确保实验的稳定性和可靠性。