赛默飞 Applied Biosystems™ 7500 实时荧光定量 PCR 系统（ABI 7500） 是一款经典的实时荧光定量PCR（qPCR）设备，广泛应用于基因表达定量、基因分型、突变检测和病原体检测等多种分子生物学研究和临床诊断领域。该系统以其高灵敏度、灵活性和可靠的结果输出，成为全球科研和临床实验室中的常用设备之一。

一、主要特点

1. 多通道荧光检测

ABI 7500 系统配备 5 个荧光检测通道，支持 SYBR Green、TaqMan 探针等多种荧光检测方法，能够在一次实验中同时检测多个基因靶标。多通道的设计使得系统可以进行多重PCR检测，适合复杂的基因表达定量、基因型分析等实验。

2. 高灵敏度与精确性

ABI 7500 具有极高的检测灵敏度，能够精确定量低拷贝数的DNA或RNA样品。通过TaqMan探针和SYBR Green染料，系统提供了高特异性和准确的定量检测，特别适用于要求高精度的临床和科研应用。

3. 快速热循环系统

ABI 7500 系统配备高效的热循环模块，能够快速升温和降温，缩短每个PCR扩增循环的时间。在需要快速检测结果的应用中，如临床诊断，快速热循环技术能够显著提高实验效率。

4. 用户友好的软件界面

ABI 7500 系统配备 7500 系列系统软件，操作界面简洁直观。用户可以轻松设置实验参数、实时监控扩增曲线并进行数据分析。该软件支持自动Ct值计算、标准曲线生成、相对定量分析和熔解曲线分析，帮助科研人员快速获得准确的结果。

5. 多样化的样品格式支持

ABI 7500 系统支持 96孔板，适合中等通量的实验需求。无论是进行小规模实验还是中型样品检测，该系统都能够灵活适应实验室的要求。

6. 熔解曲线分析功能

系统支持熔解曲线分析，特别适合使用 SYBR Green 染料的实验，能够区分特异性和非特异性扩增产物。通过熔解曲线分析，科研人员可以检测 PCR 产物的特异性并确保实验的准确性。

二、ABI 7500 系统的工作流程

1. 实验准备

• 引物与探针设计：设计特异性的引物和探针，确保高特异性和高灵敏度的检测。

• 模板制备：提取高质量的DNA或RNA（如果是RNA，需要先进行逆转录），确保模板无污染。

• 试剂准备：选择合适的qPCR Master Mix，包含Taq酶、dNTPs、荧光染料和缓冲液。

2. 反应体系设置

每个反应体系通常为10-20 µL，包括：

• qPCR Master Mix：预制好的2x Master Mix；

• 引物和探针：正向引物、反向引物和探针按建议浓度加入；

• 模板：加入适量的DNA或cDNA模板；

• 无核酸酶水：补足至总反应体积。

3. 反应板装载与封板

将反应体系加至96孔板的各个孔中，然后用封板膜将反应板封装，避免样品蒸发。

4. PCR循环参数设置

使用 ABI 7500 系统软件设置以下循环参数：

• 初始变性：95°C，30秒至2分钟；

• PCR循环：

• 95°C，15秒（变性）；

• 60°C，30-60秒（退火和延伸，同时进行荧光信号采集）；

• 循环次数：40-45个循环；

• 熔解曲线分析（如适用）：设置熔解曲线分析，用于SYBR Green实验检测扩增产物特异性。

5. 数据采集与分析

• 实时荧光信号采集：在每个PCR循环中系统会实时采集荧光信号，记录每个样品的扩增曲线。

• Ct值确定：系统自动计算每个样品的Ct值（循环阈值），Ct值越低表示起始模板量越高。

• 数据分析：通过标准曲线或ΔΔCt方法进行定量分析，并生成扩增曲线、标准曲线和熔解曲线（SYBR Green法）。

6. 结果解读

• 扩增曲线和Ct值：分析样品的扩增曲线，确认实验结果是否符合预期。分析标准品的Ct值绘制标准曲线，或者根据内参基因进行相对定量。

• 熔解曲线（SYBR Green）：查看熔解曲线是否显示单一峰，以验证PCR扩增产物的特异性。

三、ABI 7500 系统的应用领域

1. 基因表达定量

ABI 7500 系统能够准确定量基因表达水平，帮助科研人员分析不同条件下基因的表达变化。通过TaqMan探针或SYBR Green染料，科研人员可以实时监测并分析基因表达。

2. 病原体检测

该系统广泛应用于临床诊断中的病原体检测，能够快速检测DNA或RNA病原体，包括病毒、细菌等。其高灵敏度和多靶标检测能力，特别适用于传染病筛查和诊断。

3. 基因分型与突变分析

ABI 7500 系统通过荧光探针技术支持SNP（单核苷酸多态性）分析和基因突变筛查，适用于遗传学研究、个体化医疗和药物基因组学领域。

4. 食品安全与环境监测

ABI 7500 系统应用于食品安全和环境监测，能够检测食品中的转基因成分、致病菌和环境污染物，确保食品和环境安全。

四、ABI 7500 系统的优势

1. 高灵敏度和特异性：能够精确定量低拷贝数样品，适合精确的基因表达定量和突变检测。

2. 多功能应用支持：系统能够执行基因表达、病原体检测、突变分析等多种实验，适合多种应用场景。

3. 快速的热循环能力：高效的热循环技术减少了PCR反应时间，特别适合需要快速结果的实验室。

4. 强大的数据分析能力：配备的7500系列系统软件支持多种数据分析功能，包括Ct值计算、标准曲线生成和熔解曲线分析。

5. 灵活的样品处理：支持96孔板，适合中等通量的实验室需求，能够适应多种规模的实验。

五、价格

赛默飞 Applied Biosystems™ 7500 实时荧光定量PCR系统的价格通常在 人民币30万至60万 之间，具体价格会根据系统配置、软件和其他附加功能有所变化。建议联系赛默飞的官方销售或授权经销商，获取准确报价和售后服务支持。

六、技术参数

七、总结

赛默飞 Applied Biosystems™ 7500 实时荧光定量 PCR 系统是全球实验室广泛使用的一款高灵敏度、高通量的qPCR平台。其多通道荧光检测、高效的热循环系统和强大的数据分析能力，确保了实验室能够快速、准确地进行基因表达定量、病原体检测、基因分型等多种应用。无论是科研实验、临床诊断还是食品安全检测，ABI 7500 系统都能提供可靠的结果，帮助实验室提高工作效率并简化实验流程。