酶标仪96孔板（96-well microplate）是一种标准化的实验耗材，用于酶标仪等检测仪器进行多样本的快速检测和分析。96孔板广泛应用于酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白质和核酸浓度测定、细胞增殖和毒性测试等实验中，具有操作简便、效率高和样品用量少等优点。

一、96孔板的结构和特点

1. 孔布局

• 96孔板通常分为8列12行（即8×12），形成96个孔，编号从A1到H12，以便于样品定位和数据记录。

2. 孔容量

• 每个孔的容量通常为100-400微升，适合添加少量的样品和试剂，避免试剂浪费，提高检测灵敏度。

3. 材料

• 常见的96孔板材料为聚苯乙烯（PS），这种材料透明度高、成本低，适合光吸收检测。对于荧光检测，通常会使用黑色或白色96孔板，以减少相邻孔之间的光串扰。

4. 底部设计

• 96孔板底部有平底、U型底和V型底等设计，其中平底最常用于酶标仪检测，因其光路更稳定，有利于光吸收检测。

5. 表面处理

• 部分96孔板经过表面处理，使其更适合特定实验需求，如增强细胞附着性或提高蛋白结合能力，广泛应用于细胞培养和蛋白检测实验。

二、96孔板在酶标仪中的应用

1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）

• 96孔板是ELISA实验的标准耗材。将抗体或抗原固定在孔板上，通过显色反应检测样品中目标分子的浓度，酶标仪可以快速读取96个孔的光吸收值（OD值），实现高通量分析。

2. 蛋白质和核酸浓度测定

• 通过添加蛋白或核酸染色剂，酶标仪在特定波长下读取96孔板的吸光度，计算样品的浓度。96孔板可进行大量样品的同时检测，节省时间。

3. 细胞增殖和毒性测试

• 在细胞增殖实验中，细胞种植在96孔板中，经过染色后，酶标仪测定孔内吸光度或荧光强度，用于评估细胞活性。在药物毒性实验中，96孔板可实现多浓度药物对细胞的毒性筛选。

4. 化学发光和荧光检测

• 96孔板用于化学发光或荧光实验时，通常选择白色或黑色孔板，以减少相邻孔间的光串扰，提高信号强度和检测灵敏度。

三、96孔板的使用注意事项

1. 避免气泡和溢出

• 加样时应避免产生气泡，气泡会干扰光路，导致读数不准确。如果发现气泡，可以用移液器小心去除。避免样品溢出，以防孔间污染。

2. 确保样品均一性

• 加样时应保证每孔的样品量一致，减少体积差异导致的实验误差。

3. 正确编号和记录

• 使用96孔板时应按行列编号进行样品分配，便于后续数据分析和记录，避免样品位置错误导致数据混淆。

4. 选择合适的孔板类型

• 根据实验需求选择适合的孔板底部和材料，例如平底透明孔板适合吸光度检测，而黑色或白色孔板适合荧光和发光检测。

四、96孔板在酶标仪中的操作步骤

1. 样品准备和分配

• 根据实验设计，将样品、对照和空白溶液加入孔中，确保每孔体积一致。为避免孔板变形或液体污染，用移液器添加样品时要轻拿轻放。

2. 插入酶标仪

• 将96孔板插入酶标仪的托架中，确保孔板对准光源和检测器。光路对准后，关闭仪器盖子，准备开始检测。

3. 读取和记录数据

• 设置酶标仪的波长和读取模式，选择单次或多次读取。酶标仪将依次检测每个孔，自动记录并显示数据。

4. 数据分析和导出

• 检测完成后，使用数据处理系统进行分析。96孔板的格式便于数据导出为图表或表格，方便后续处理和分析。

总结

96孔板是酶标仪检测的标准耗材，具有操作便捷、样品用量少、检测通量高等优点。选择合适类型的96孔板并规范操作，有助于提高实验结果的准确性和重复性。