酶标仪测吸光度是生物医学实验中常见的操作，广泛应用于检测样品的浓度，如在ELISA、蛋白质浓度测定、核酸定量等实验中。以下是使用酶标仪测量吸光度的详细步骤：

一、样品准备

1. 选择微孔板：

• 使用标准的96孔或384孔微孔板，透明平底微孔板最适合吸光度检测，因为光能更稳定地通过样品，确保吸光度读数准确。

2. 样品加样：

• 将样品、标准品、阳性对照、阴性对照和空白溶液按实验设计依次加入微孔板。每孔加样量应保持一致，通常为50-200微升，以减少体积差异带来的误差。

• 加样时避免产生气泡，气泡会影响光路，导致不准确的读数。可以用移液器尖端轻轻除去气泡。

3. 孵育（如需要）：

• 某些实验（如ELISA）可能需要在特定温度下孵育一定时间，以确保反应完成。通常，ELISA实验需在37°C孵育30分钟到1小时。孵育时间和温度根据具体实验而定。

二、设置酶标仪参数

1. 启动酶标仪：

• 打开酶标仪，确保设备正常工作，包括光源、检测器和滤光片等部件。

2. 选择检测模式：

• 在软件界面选择“吸光度”或“OD值”模式，确保仪器在吸光度检测模式下运行。

3. 设定波长：

• 根据实验需求选择合适的波长。例如，ELISA实验常用450 nm波长检测结果，620 nm作为背景波长，蛋白质定量常用280 nm，核酸检测用260 nm。

• 有些实验需要设定双波长检测（如450/620 nm）来消除背景干扰。单色器系统的设备可以直接输入波长值，而滤光片系统需要选择并插入合适的滤光片。

4. 其他参数设置：

• 读取模式：一般选择“终点法”检测每孔的吸光度一次，适用于大多数终点法实验。

• 读取速度：可根据实验要求选择快速读取或高精度读取。高精度模式适用于对数据准确性要求较高的实验，而快速模式适合需要节省时间的高通量检测。

三、检测步骤

1. 插入微孔板：

• 打开酶标仪的托架，将微孔板放入托架中，确保孔板对准光源和检测器。如果微孔板位置不正，可能会影响检测精度。

2. 启动检测：

• 在软件界面点击“开始”或“读取”按钮，酶标仪会自动依次检测每个孔的吸光度，并在界面上实时显示检测数据。

• 检测过程中，保持设备稳定，避免震动，防止盖子被意外打开，以确保光路的稳定性。

3. 查看检测结果：

• 检测完成后，仪器会生成每个孔的吸光度数据（OD值），可以在软件界面上查看这些数据。

四、数据分析与导出

1. 数据导出：

• 检测结束后，可以将数据导出为Excel、PDF等文件格式，以便于数据分析和记录。

2. 数据处理与分析：

• 计算每组样品的平均OD值。

• 使用标准品数据生成标准曲线，确定样品的浓度。

• 使用酶标仪内置的数据分析软件或其他统计分析软件进行数据处理。通常包括：

• 在ELISA实验中，通过标准曲线的回归方程计算未知样品的浓度。

3. 保存与记录：

• 将实验结果和分析图表保存到本地文件夹或实验记录系统中，以便日后参考和复查。

五、实验后的设备清洁与维护

1. 清洁微孔板托架：

• 使用无尘布或棉签轻轻擦拭托架，以去除残留物，防止其对下次实验产生影响。

2. 检查光学系统：

• 定期检查光源、滤光片和检测器，确保设备的准确性和稳定性。

3. 设备校准：

• 如果频繁使用，建议定期对光源、检测器等部件进行校准，以确保数据的精确性。

使用注意事项

• 选择合适的孔板：透明平底微孔板适用于吸光度检测，应避免使用颜色较深或不透明的孔板，以免干扰光的透过。

• 控制环境光源：应避免强光直射酶标仪，以防环境光对检测产生干扰。

• 样品加样的一致性：确保每个孔加样体积一致，避免体积差异导致的误差。

总结

酶标仪的吸光度检测步骤包括样品准备、参数设定、检测过程、数据分析和设备维护。通过正确的操作步骤和设置，可以获得准确、可靠的实验数据，为ELISA、蛋白质浓度测定和其他吸光度检测实验提供可靠的数据支持。