实时荧光定量PCR仪 AQS8830-16 操作步骤

以下是 AQS8830-16 实时荧光定量PCR仪 的详细操作步骤，包括实验准备、仪器设置、运行实验和结果分析。确保每一步操作都严格按照标准流程进行，以确保实验结果的准确性和可靠性。

一、实验前准备

1. 环境检查

• 确保实验室环境干净整洁，防止样品污染。

• 实验分区明确，核酸提取、反应体系准备和PCR操作区域分开。

2. 样品制备

• 提取目标核酸（DNA或RNA），确保其纯度和浓度符合实验要求。

• 使用高质量的反应试剂（如荧光探针、引物、酶、dNTPs）。

3. 反应体系配置

• 样品模板：目标DNA/RNA。

• 引物对：特异性扩增目标序列。

• 荧光探针或染料（如SYBR Green）。

• PCR反应缓冲液和DNA聚合酶。

• 按实验设计将样品和试剂混合，通常包括：

• 配置完成后将反应混合液分装到微孔板或反应管中，确保体积一致。

4. 反应管/板准备

• 将微孔板或反应管密封，避免样品蒸发。

• 检查密封膜或盖是否牢固，防止荧光信号干扰。

二、仪器准备

1. 仪器开机

• 打开 AQS8830-16 的电源，等待仪器完成自检。

• 确保仪器运行正常，无错误提示。

2. 软件启动

• 启动仪器配套软件，在主界面选择“新建实验”或打开既有实验模板。

3. 实验设置

• PCR程序：

• 荧光采集：

• 退火：50-65°C（根据引物设计确定），30秒。

• 延伸：72°C，30秒至1分钟。

• 初始变性：95°C，30秒至2分钟。

• 退火和延伸循环：通常40个循环。

• 如果需要熔解曲线分析，添加熔解曲线阶段。

• 设置目标通道（如 FAM、HEX 等）采集荧光信号。

• 确保每个循环的退火/延伸阶段采集荧光信号。

• 在软件中输入实验参数：

4. 梯度功能设置（如需要）

• 如果需要优化退火温度，可在退火阶段设置梯度范围。

三、运行实验

1. 样品装载

• 将准备好的微孔板或反应管放置在仪器的样品槽中。

• 确保板位或管位安装稳固，并按照软件提示正确摆放。

2. 启动实验

• 点击“开始实验”按钮，仪器将按照设置的程序自动运行。

3. 实时监控

• 实验过程中，软件会实时显示荧光信号变化并绘制扩增曲线。

• 确认曲线是否正常，是否出现异常信号（如无扩增、信号过低）。

四、实验完成与数据分析

1. 结果查看

• 扩增曲线：判断扩增效率和特异性。

• Ct值：提取荧光信号达到设定阈值时的循环数。

• 标准曲线（如有）：用于绝对定量分析。

• 实验完成后，软件将自动生成扩增曲线、Ct值和标准曲线。

• 数据分析包括：

2. 熔解曲线分析

• 如果实验设计包含熔解曲线阶段，查看解链温度曲线，确认扩增特异性。

• 熔解峰过多可能提示非特异性扩增或引物二聚体。

3. 保存数据

• 将实验数据保存至本地或导出为通用格式（如 Excel、PDF）。

• 备份数据以便后续分析。

4. 样品回收

• 实验完成后，取出微孔板或反应管，按照实验室生物安全规范处理废弃物。

五、仪器维护与关机

1. 清洁

• 清洁样品槽，去除可能的样品残留或冷凝水。

• 清理实验台，确保下一次实验的洁净操作环境。

2. 关机

• 退出实验软件并关闭仪器电源。

• 如果长时间不使用仪器，断开电源以保护设备。

3. 维护

• 定期检查光源、荧光探测器和温控模块是否正常。

• 根据使用说明书定期校准仪器，确保结果准确。

六、注意事项

1. 样品准备

• 避免样品污染，使用无核酸酶耗材和高纯度试剂。

• 确保模板浓度适宜，过高或过低会影响扩增效率。

2. 密封性

• 确保反应管或微孔板密封良好，避免蒸发影响结果。

3. 参数设置

• PCR程序需根据实验需求精准设定，过长或过短可能影响结果。

4. 仪器校准

• 定期校准温控和荧光检测系统，避免数据偏差。

5. 数据管理

• 妥善保存实验数据，确保可追溯性。

七、总结

AQS8830-16 实时荧光定量PCR仪以其高精度、快速和多功能性广泛应用于核酸检测和基因研究领域。通过正确操作、合理设置实验参数以及规范维护设备，可以确保实验结果的可靠性和重复性，为科研和临床提供强有力的数据支持。