WB化学发光成像仪操作步骤

以下是使用WB（Western Blot）化学发光成像仪的标准操作步骤。具体步骤可能根据不同品牌和型号略有差异，但基本流程一致。

一、实验前准备

1. 检查仪器

• 确保成像仪正常运行，摄像头、镜头和样品台干净无污染。

• 检查仪器是否通电，确认计算机与仪器连接正常。

2. 准备样品

• 将目标蛋白转移到PVDF或硝酸纤维素膜上，完成封闭、抗体孵育和洗涤步骤。

• 加入化学发光底物，确保均匀覆盖目标区域。

3. 环境准备

• 关闭实验室多余光源，避免光干扰（如果仪器有抗光干扰功能可略过）。

二、成像操作

1. 启动仪器

• 打开化学发光成像仪和配套计算机，运行仪器控制软件。

• 选择“化学发光模式”作为检测模式。

2. 样品放置

• 将处理好的印迹膜放置在样品台上，确保样品膜面朝上，位置居中。

• 如有多个样品，可以依次放置并调整间距以避免重叠。

3. 调整仪器参数

• 曝光时间：根据样品的发光强度设置初步曝光时间（建议从30秒开始，弱信号可适当延长）。

• 增益值：根据信号强弱调整摄像头增益值，弱信号适当提高增益。

• 分辨率：选择适合分析需求的分辨率（高分辨率适合精确分析）。

• 背景扣除：如有自动背景扣除功能，可提前设置。

4. 预览图像

• 进行短时间预览曝光，检查样品条带位置和信号强度。

• 确保所有目标蛋白条带在视野范围内，信号不过曝或信号丢失。

5. 正式成像

• 确认参数后，进行正式成像，仪器将捕捉化学发光信号并生成数字图像。

• 如果结果不理想，可调整曝光时间或增益值重新成像。

三、数据处理

1. 图像保存

• 将成像仪生成的原始数据保存为TIFF格式，确保图像质量不会损失。

• 备份数据以防丢失。

2. 图像分析

• 扣除背景噪声，优化条带清晰度。

• 测量蛋白条带的光密度，进行定量分析。

• 归一化处理（如对照总蛋白或内参蛋白信号）。

• 使用仪器配套的软件对图像进行处理：

3. 数据导出

• 导出分析结果，包括图像文件、条带强度值和定量结果。

四、实验后操作

1. 清洁仪器

• 取出样品膜，用无绒布或酒精擦拭样品台。

• 确保镜头或摄像头无灰尘或污染。

2. 关闭设备

• 按仪器要求关闭软件和电源，避免设备长期待机。

3. 记录实验参数

• 记录实验条件（如曝光时间、增益值）和样品信息，便于重复实验或数据追踪。

五、注意事项

1. 底物使用

• 确保化学发光底物新鲜且均匀分布，避免信号强弱不一。

• 底物反应时间有限，处理样品时应迅速完成。

2. 避免光干扰

• 如果仪器对环境光敏感，需在弱光或暗室条件下操作。

3. 信号调整

• 信号过强会导致过曝，需缩短曝光时间或稀释抗体。

• 信号过弱可通过延长曝光时间或提高底物灵敏度来增强。

4. 样品重复性

• 同批样品建议设置多个重复，确保数据可靠性。

六、总结

通过严格按照以上操作步骤，可以充分发挥WB化学发光成像仪的高灵敏度和高分辨率特性，获得清晰、可靠的实验结果。规范的实验记录和定量分析有助于提高数据的科学性和实验结果的可重复性。